Teses e Dissertações
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Navegando Teses e Dissertações por Orientador(es) "Barcelos, Gustavo Rafael Mazzaron [UNIFESP]"
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- ItemSomente MetadadadosAvaliação da citotoxicidade e genotoxicidade da coexposição ao Triclosan e ao Ftalato DEHP em células HepG2(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2021) Lima, Lindiane Eloisa De [UNIFESP]; Barcelos, Gustavo Rafael Mazzaron [UNIFESP]; Universidade Federal de São PauloTriclosan (TCS) is widely used as a preservative and bactericide in personal care products, household items, sports equipment, and toys. Di-2-ethylhexyl phthalate (DEHP) is the main derivative of phtalic acid, can give malleability to plastic, which is why it is widely used in medical devices, toys, building materials, etc. Considered endocrine disrupters and environmental contaminants, studies have shown several adverse effects, however the majority have an emphasis on ecotoxicology using aquatic organisms, thus, there is little data about the evaluation of the possible adverse effects of these contaminants in mammals. This study aims to assess the impact of exposure to TCS, DEHP, as well as their associations, on cell viability and genomic stability, in HepG2 cells. The MTT and Red Neutral (VN) assays were used to assess cytotoxicity using different concentrations of TCS and DEHP (0.3 - 50 µM) and the cells were exposed for 24 hours. From the results of these tests, three concentrations of each toxicant were chosen (0.10; 1.0 and 10 µM), for subsequent monitoring of cell viability and DNA damage, by the comet assay. The results show that the lysosomal pathway was not affected by coexposure to toxicants; however, mitochondrial activity was compromised at all concentrations tested, especially in combinations of the lowest DEHP concentration (0.10 µM) with TCS concentrations 0.10 µM (44%), 1.0 µM (17%) and 10 µM (21%). Genotoxicity by the comet assay showed greater DNA damage at concentrations of 0.10 µM TCS (16.4%) and 1.0 µM DEHP (19%), than in higher concentrations. The combinations showed significant damage when compared to the negative controls, but it is not significant when compared to the corresponding individual concentrations of TCS and DEHP. The results observed by cytotoxicity and genotoxicity tests suggest possible changes in the cell redox state and consequent induction of DNA damage.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Avaliação da influência de polimorfismos do gene da metalotioneína MT2A sobre as concentrações de chumbo (Pb) no sangue, plasma e urina de trabalhadores expostos ao metal(Universidade Federal de São Paulo, 2020-05-28) Faria, Jéssica Ramalho [UNIFESP]; Barcelos, Gustavo Rafael Mazzaron [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3494181017350657; http://lattes.cnpq.br/4521716627642528; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)O chumbo (Pb) é o segundo elemento mais tóxico, atrás apenas do arsênio (As), e está presente em abundancia na crosta terrestre. O metal é utilizado principalmente na fabricação de baterias automotivas. A exposição ao Pb pode causar diversos efeitos nocivos à saúde tais como distúrbios gastrointestinais, neurológicos e no sistema antioxidante. Com o objetivo de minimizar os efeitos nocivos causados durante a jornada de trabalho o Ministério do trabalho classificou a exposição ao Pb inorgânico como insalubridade de grau máximo, além de estabelecer os biomarcadores de toxicidade, entretanto os valores limites estão desatualizados. Há grandes variações nas concentrações de biomarcadores de toxicidade associados à exposição ao chumbo (Pb), apesar de níveis semelhantes de exposição, hipoteticamente relacionados às diferenças genéticas nas enzimas que metabolizam o metal. Entretanto, pouco se sabe a respeito dos efeitos genéticos sobre o metabolismo e toxicidade induzida pelo Pb. As metalotioneínas (MTs) são proteínas de transporte e distribuição de metais essenciais tais como o zinco (Zn), cobre (Cu) e ferro (Fe); porém, devido a sua alta quantidade de grupamentos sulfidril, metais não essenciais podem ligar-se a ela, como o Pb, cádmio (Cd), dentre outros. Sendo assim, o objetivo do estudo foi avaliar o impacto de polimorfismos do tipo Single Nucleotide Polymorphisms (SNP) do gene MT2A (UTR-3 (3’-Untranslated Region), G → C; rs10636 e UTR-5 (5’-Untranslated Region), A→ G; rs28366003) sobre as concentrações de Pb no sangue (Pb-s), plasma (Pb-p) e urina (Pb-u), em 236 trabalhadores de fábricas de baterias automotivas expostos ao metal. As concentrações de Pb-s, Pb-p e Pb-u foram quantificadas por espectrometria de massa com plasma acoplado indutivamente (ICP-MS) e as genotipagens dos polimorfismos do gene MT2A foram realizadas através do método TaqMan, por meio do da Reação em Cadeia da Polimerase (RT-PCR) em Tempo Real. Para a avaliação do impacto dos polimorfismos sobre as concentrações do metal, regressões múltiplas foram aplicadas e ajustadas por idade, IMC, tempo de trabalho, tabagismo, álcool, além das concentrações de 15 elementos químicos (Al, Sr, Sn, Se, Sb, P, Mo, Mn, Mg, Co, As, Cu, P, Cd, Fe, Pb) e o valor de p≤0,050 foi considerado significativo. A idade média foi de 38 anos e o tempo de trabalho variou de 1 mês até 27 anos; concentrações de Pb-s, Pb-p e Pb-u foram de 21,1 ± 11,9 µg/dL, 0,60 ± 0,71 µg/dL e 38,9 ± 48,4 mg/g creatinina, respectivamente. Associações positivas entre tempo de trabalho e concentrações de Pb-s e Pb-p foram observadas, indicando que o período de exposição influência nas concentrações de Pb absorvido. Associações positivas entre os elementos Manganês (Mn) e Selênio (Se) no sangue e Magnésio (Mg) no plasma com as concentrações de Pb-s e Pb-p podem sugerir uma co-exposição a esses elementos durante a jornada de trabalho. Foi observado associação negativa entre os elementos Fe e As e as concentrações de Pb-s, o que pode sugerir uma competição entre os elementos na fase de absorção. Ainda, Cobre (Cu) e Antimônio (Sb) se mostram associados negativamente ao Pb-p. O alelo C do SNP rs10636 não impactou nas concentrações de Pb-s (β= -1,0; p= 0,65), Pb-p (β= 0,03; p= 0,71) e Pb-u (β= 0,09; p= 0,40) e o genótipo raro (AG) do SNP rs28366003 não influenciou nas concentrações de Pb-p (β= 0,09; p= 0,46) e Pb-u (β= 0,03; p= 0,84). Entretanto o genótipo raro (AG) está associado a maiores concentrações de Pb-s (β= 7,9; p=0,04), quando comparados com os indivíduos portadores do genótipo prevalente (AA). O resultado do estudo sugere que elementos químicos podem influenciar nas concentrações de Pb-s e Pb-p e que o SNP rs28366003 localizado na região promotora 5’UTR do gene MT2A pode impactar na toxicocinética e na toxicodinâmica do Pb.
- ItemSomente MetadadadosAvaliação do impacto da co-exposição do Triclosan e do Ftalato dehp sobre a viabilidade celular e a estabilidade genética, in vitro(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2020-01-15) Duarte, Nathalia De Assis Aguilar [UNIFESP]; Barcelos, Gustavo Rafael Mazzaron [UNIFESP]; Universidade Federal de São PauloTriclosan (TCS) is an antimicrobial agent widely used in Personal Care Products (PCPs) and Di-(2-ethylhydroxyl-phtalate) (DEHP) is a phthalate, a group of chemical compounds derived from phthalic acid, used in medical devices and plastic products with Polyvinyl Chloride (PVCs). As a result of extensive use, TCS and DEHP has been found in the environment and previous studies have demonstrated the interaction between their exposure and genotoxic damage to aquatic organisms. However, there is a shortage in the literature of these effects on human cells. Therefore, the aim of this study is to evaluate the cytotoxicity, genotoxicity, mutagenicity and interaction between TCS and DEPH compounds in HepG2 human hepatocarcinoma cell culture. Three different concentrations of each drug were chosen using the MTT test (0,10 μM, 1 μM e 10 μM) and 8 different combinations were evaluated later (e.g. TCS 10 μM + DEHP 1μM). The number of micronuclei (MN), nucleoplasmic bridges (NPBs), nuclear buds (NBUDs), nuclear division index (NDI), nuclear division cytotoxic index (NDCI), apoptotic and necrotic cells were evaluated. The results have shown that the three concentrations of TCS and the two highest DEHP concentrations increased the number of MN (p<0,05) as well as their combinations. The lower concentrations of both drugs had lower NDI and NDCI (p<0,05) when compared to the control group (DMSO 1%). The compounds showed synergistic and antagonist effects in several parameters analyzed. Finally, the results have shown a significant mutagenic (increase of MN) and cytostatic (decrease of NDI) and cytotoxic (decrease of NDCI) damage especially with co-exposure treatments, which is a more realistic model than studying drugs separately.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Impacto da exposição ao chumbo (Pb) sobre o perfil de expressão de genes relacionados ao metabolismo do metal em indivíduos ocupacionalmente expostos(Universidade Federal de São Paulo, 2022-01-18) Araújo, Marília Ladeira [UNIFESP]; Barcelos, Gustavo Rafael Mazzaron [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3494181017350657; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)O chumbo (Pb) é um metal versátil utilizado por humanos há mais de 9.000 anos e, sua exposição poderá influenciar no processo de regulação da expressão gênica o qual é composta por diversos eventos complexos, caracterizando-os como um processo biológico essencial. Além disso, a identificação de biomarcadores moleculares que podem preceder a efeitos adversos à saúde relacionados à exposição a toxicantes aumentou significativamente na última década. Diante deste contexto, a expressão de genes relacionados com a toxicocinética do Pb e a expressão de microRNAs (miRNAs) em indivíduos expostos a baixas concentrações de Pb podem gerar novas perspectivas na ampliação do entendimento dos mecanismos associados à toxicidade induzida pelo metal. Deste modo, o objetivo do presente estudo consistiu na avaliação do impacto da exposição ao Pb sobre o perfil de expressão transcricional (RNAm) de genes associados ao metabolismo do metal (VDR, SLC11A2, MT2A, ALAD, GCLM, GSS, GSR, GGT1) e sobre a expressão de dois miRNAs, hsa-miR-148a-5p e hsa-miR-23a-3p, em trabalhadores expostos ao metal, por RT-qPCR. Foram coletadas cerca de 10 mL de sangue e cerca de 30 mL de urina de 85 trabalhadores de fábricas de baterias automotivas no estado do Paraná, após esclarecimento detalhado sobre o projeto e assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido (TCLE). Foram incluídos no estudo indivíduos com idade entre 19 a 69 anos, do sexo masculino e que declararam não possuírem doenças conhecidas no momento da coleta. As concentrações de Pb no sangue (Pb-s), no plasma (Pb-p) e na urina (Pb-u) foram determinadas por espectrometria de massas com plasma indutivamente acoplado (ICP-MS). Para as análises das expressões transcricionais dos genes de metabolismo e do miRNA hsa-miR-148a-5p foram realizadas a partir de extrações de sangue, enquanto que a extração do miRNA hsa-miR-23a-3p foi obtida pelo plasma e os ensaios de RT-qPCR foram realizados através do método TaqMan. As médias ± desvio padrão (DP) de Pb-s, Pb-p e Pb-u foram de 19 ± 11 µg/dL, 0,54 ± 0,65 µg/dl, 35,39 ± 40 µg/g creatinina, respectivamente, evidenciando que estes valores encontram-se abaixo do permitido pela legislação brasileira. Correlações de Spearman e as análises de regressões multivariadas apontaram para associações positivas entre Pb-s e a expressão dos genes GSR e SLC11A2 (β=0,053 p=0,045 e β= 0,052 p=0,048, respectivamente). As regressões múltiplas apresentaram associações inversas entre a expressão de hsa- miR-148a-5p e metilação global do DNA (%5-mC DNA), em função do Pb-p (β = -4,1; p =0,050). Ademais, em baixas concentrações de Pb, os miRNAs (hsa-miR-148a-5p e hsa-miR-23a-3p) não impactaram na alteração da expressão de genes alvo. Por fim, os dados obtidos colaboraram para uma melhor compreensão sobre a influência da toxicidade do Pb em baixas concentrações, através da ativação do gene carreador de soluto (responsável pela absorção e distribuição do metal no organismo), assim como uma ativação do papel antioxidante, caracterizando como um possível mecanismo de defesa.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Impacto de polimorfismos em genes envolvidos na toxicidade do mercúrio e selênio, em comunidades amazônicas expostas aos elementos via dieta(Universidade Federal de São Paulo, 2024-03-21) Maraslis, Flora Troina [UNIFESP]; Barcelos, Gustavo Rafael Mazzaron [UNIFESP]; Barbosa Júnior, Fernando; http://lattes.cnpq.br/5072630975779407; http://lattes.cnpq.br/3494181017350657; http://lattes.cnpq.br/2680147665149201; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Tanto no ambiente quanto nos organismos vivos, existe uma complexa relação entre as formas elementar, orgânica e inorgânica do mercúrio. O metilmercúrio (forma orgânica - MeHg) é a forma com maior potencial de bioacumulação e o consumo de peixe é a principal fonte de exposição ao ser humano. Uma vez ingerido, a maior parte é absorvida e distribuída para todo o organismo, sendo o sistema nervoso central o principal órgão afetado. Comunidades em que os habitantes consomem pescados frequentemente, como os ribeirinhos da Amazônia brasileira, estão expostos a elevadas concentrações de metilmercúrio (MeHg). O selênio (Se), um elemento traço essencial ao organismo, é conhecido por contrapor os efeitos tóxicos do Hg, em parte, por meio das selenoproteínas que têm a selenocisteína incorporada na sequência de aminoácidos da proteína. O MeHg pode interagir e prejudicar o funcionamento de diversas moléculas devido à grande afinidade por grupos tiol (-SH) e selenol (-SeH) de proteínas e moléculas de baixo peso molecular. Os efeitos da exposição ao Hg não são homogêneos, sugerindo que características dos indivíduos podem alterar o padrão de resposta individual ao metal. Com isso, este estudo avaliou a influência de polimorfismos genéticos de GLRX rs2007 (C→G), GLRX2 rs912071 (C→T), TXNRD1 rs11111979 (C→G), TXNRD2 rs5748469 (C→A), MT1A rs11640851 (C→A), MT1M rs2270837 (A→G), MT2A rs10636 (G→C), SLC6A15 rs11116642 (C→T), SLC6A19 rs9418 (C→T), rs7732589 (G→A), SLC11A1 rs17235409 (G→A) e SLC11A2 rs149411 (A→ G), rs11169654 (C→T) sobre a concentração de Hg (Hg-s) e Se (Se-s) sanguíneo e plasmático (Hg-p e Se-p), espécies químicas de mercúrio no cabelo (Hg total, Hg orgânico e Hg inorgânico) e biomarcadores de estresse oxidativo de residentes ribeirinhos da região do rio Tapajós da Amazônia Brasileira. Residentes nessa região, que assinaram o TCLE, participaram de um grande estudo interdisciplinar, dos quais 365 participantes foram incluídos no presente estudo transversal. Foram utilizadas informações obtidas através de questionários sociodemográfico e de hábitos alimentares, além de medidas antropométricas. Amostras de sangue e cabelo foram utilizadas para dosagem de mercúrio. Amostras de sangue também foram utilizadas para avaliação dos biomarcadores de estresse oxidativo e submetidas à extração de DNA para avaliação dos polimorfismos propostos por PCR em tempo real. Os dados obtidos foram avaliados estatisticamente, por regressões lineares múltiplas considerando todos os indivíduos e nas estratificações por sexo, consumo de bebida alcoólica e fumo. Diversas associações foram observadas entre os polimorfismos estudados e as concentrações de Hg e Se nas diferentes matrizes biológicas e espécies químicas, e biomarcadores de estresse oxidativo. As análises com menores valores de p (com significância mantida após cálculo considerando múltiplas análises) foram observadas na estratificação por fumo. Indivíduos tabagistas que carregam o homozigoto CC para TXNRD1 apresentaram menores concentrações de Se-s do que aqueles com genótipo homozigoto GG (p<0,00010). Já, dentre os não tabagistas, participantes que têm o genótipo homozigoto CC para TXNRD2 têm menores concentrações de Hg-p (p=0,00035). Não tabagistas que carregam o genótipo homozigoto CC para GLRX2 apresentaram menor atividade de GPX (p=0,00014). Este estudo adiciona evidencia à literatura da modulação de Hg, Se e de biomarcadores de estresse oxidativo por polimorfismos genéticos.