Navegando por Palavras-chave "AT2 receptor"

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    Escherichia coli lipopolysaccharide impairs the calcium signaling pathway in mesangial cells: role of angiotensin II receptors
    (Soc Experimental Biology Medicine, 2010-06-01) Maquigussa, Edgar [UNIFESP]; Arnoni, Carine P. [UNIFESP]; Cristovam, Priscila C. [UNIFESP]; Oliveira, Andrea S. de [UNIFESP]; Higa, Elisa M. S. [UNIFESP]; Boim, Mirian A. [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Sepsis causes impaired vascular reactivity, hypotension and acute renal failure. the ability of the Escherichia coli endotoxin (lipopolysaccharide [LPS]) to impair agonist-induced contractility in mesangial cells, which contributes to LPS-induced renal dysfunction, was evaluated. Agonist-induced intracellular calcium ([Ca(2+)]i) mobilization was analyzed using angiotensin II (AngII). the effect of LPS on the levels of the renin-angiotensin system (RAS) components and the roles of vasodilatation-inducing molecules including AT2 receptor (AT2R) and nitric oxide (NO) in the cell reactivity were also evaluated. Confluent human mesangial cells (HMCs) were stimulated with LPS (0111-B4, 100 mu g/mL). AngII-induced [Ca(2+)]i mobilization was measured by fluorometric analysis using Fura-2AM in the absence and presence of an AT2R antagonist (PD123319). the mRNA and protein levels for angiotensinogen, renin, angiotensin-converting enzyme, AT1R and AT2R were analyzed by realtime reverse transcriptase-polymerase chain reaction and Western blot, respectively. NO production was measured by the chemiluminescence method in the culture media after 24, 48 and 72 h of LPS incubation. After 24 h, LPS-stimulated HMCs displayed lower basal [Ca(2+)]i and an impaired response to AngII-induced rise in [Ca(2+)]i. LPS significantly increased AT2R levels, but did not cause significant alterations of RAS components. PD123319 restored both basal and AngII-induced [Ca(2+)]i peak, suggesting an involvement of AT2R in these responses. the expected increase in NO production was significant only after 72 h of LPS incubation and it was unaffected by PD123319. Results showed that LPS reduced the reactivity of HMCs to AngII and suggest that the vasodilatation induced by AT2R is a potential mediator of this response through a pathway independent of NO.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Mesangial Cells Cultured from Pregnant Rats Display Reduced Reactivity to Angiotensin II: the Role of Relaxin, Nitric Oxide and AT2 Receptor
    (Karger, 2012-01-01) Carvalho, Lucimeire Nova de [UNIFESP]; Cristovam, Priscila Cardoso [UNIFESP]; Passos, Clévia dos Santos [UNIFESP]; Boim, Mirian Aparecida [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Background/Aims: Pregnancy is characterized by vasodilatation and increased glomerular filtration rate (GFR), despite overstimulation of the renin angiotensin system (RAS). the mesangial cells (MCs) influences GFR and when cultured from pregnant rats displays refractoriness to Ang II. We evaluated the role of relaxin (RLX) and its receptor (RXFP1), nitric oxide (NO) and the AT2 receptor in this response. Methods: MCs cultured from kidneys of virgin (V) and pregnant (P) Wistar rats were treated with RLX or AT2 receptor blocker PD123319 or NO synthase inhibitor L-NAME. After 24 hr, intracellular calcium concentration ([Ca]i) was recorded before and after the addition of Ang II. Results: MCs from V group expressed AT2, RLX and RXFP1, whose levels were increased in P cells. Ang II induced a 150% increase in [Ca]i in the V cells and 85% (p<0.05) in the P cells. V cells treated with RLX displayed a similar response to that observed in P cells, suggesting that RLX can modulate the reactivity of the MCs to Ang II. L-NAME and PD123319 did not interfere in this response. Conclusion: Results suggest that RLX is a mediator of the refractoriness of the MCs to Ang II during pregnancy. Copyright (c) 2012 S. Karger AG, Basel
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    Acesso aberto (Open Access)
    Relação estrutura-atividade entre os receptores AT1 e AT2 da angiotensina II à luz da estrutura do receptor CXCR4 da quimiocina
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014) Martin, Renan Paulo [UNIFESP]; Shimuta, Suma Imura [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A angiotensina II (AngII) e um potente agente do sistema renina-angiotensina participando da regulacao da pressao arterial e na homeostase hidromineral. Seu efeitos fisiologicos sao mediados pelos receptores tipo 1 (AT1) e tipo 2 (AT2) que possuem respostas contrarias nas suas vias de sinalizacao. Alguns modelos de interacao agonista-receptor vem sendo propostos onde e possivel destacar alguns residuos importantes para interacao do agonista ao receptor como Asp1, Arg2 e Tyr4 alem das extremidades N e C-terminais. Numa etapa inicial foi proposta para avaliar a possiblidade da substituicao do metodo de estudo de ligacao tradicional baseado em uso de radioligantes por um nao radioativo (fluoroforo). Foi entao utilizado o lantanideo Europio (Eu3+) como marcador do ligante nos ensaios de competicao pelo sitio de ligacao comparando ao uso do 3H. Depois disso, o projeto foi dividido em duas etapas, sendo a primeira, uma abordagem pratica, onde diferentes ligantes foram testados e as afinidades de ligacao de cada um comparada com aquelas dos receptores AT1 e AT2. Posteriormente foram obtidas 3 mutacoes sitio dirigidas no receptor AT2 onde a primeira causou o rompimento da segunda ponte SS (C35S), a segunda a substituicao das Asn127 por Gly no meio da helice III (N127G) e a terceira a substituicao da Asp297 por Ala (D297A). Alem disso foi proposto um metodo teorico de estudo usando modelagem molecular dos receptores AT1 e AT2 por homologia ao CXCR4. Os testes de ligacao usando os dois metodos propostos mostraram resultados equivalentes, razao pela qual se adotou o metodo fluorimetrico para o prosseguimento dos experimentos. E interessante destacar que a substituicao da Tyr4 por Ile provocou uma queda de afinidade de cerca de 100 vezes enquanto o uso da Phe na mesma posicao quase nao afetou a afinidade do ligante ao receptor AT1. Por outro lado o mesmo experimento conduzido com o receptor AT2 mostrou nao haver diferenca significativa. Esses resultados estao de acordo com os da literatura, uma vez que o residuo Asn111 do AT1 parece funcionar como botao que controla as mudancas do estado nao ativado para um estado propicio a ativacao que e um estado essencial para a correta acomodacao do ligante no receptor. Entretanto o receptor AT2 parece ja estar nesse estado independentemente da presenca desse residuo. Alem disso, o receptor AT2 possui um sitio de interacao mais flexivel do que o do AT1 que parece ser mais critico as mudancas no ligante. Na analise mutacional abordada, tanto o mutante C35S quanto o N127G nao apresentaram mudancas significativas no perfil de resposta aos ligantes estudados. Por outro lado o receptor AT2 carregando a mutacao D297A sofreu uma queda drastica na capacidade de ligacao com todos os analogos testados, indicando assim que esse residuo e crucial para a interacao com o segmento N-terminal da AngII. Os resultados de dinamica corroboram com os dados experimentais reforcando a melhor acomodacao da molecula de AngII ao receptor AT2 quando comparada ao receptor AT1