Navegando por Palavras-chave "Análise Mutacional de DNA"

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    Analise molecular de genes de falencia ovariana prematura mapeados nos segmentos cromossomicos FOP1 e FOP2
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Hassun Filho, Pericles Assad [UNIFESP]
    RESUMO ARTIGO 1 - Fertilidade em mulheres e o resultado de uma serie de eventos moleculares complexos que se iniciam na vida intrauterina com a diferenciacao ovariana e a formacao dos foliculos primordiais e continua depois do nascimento por um processo altamente coordenado e sincronizado. A falencia ovariana pode se manifestar como amenorreia primaria ou secundaria caracterizada por elevados niveis de gonadotrofinas antes dos 40 anos de idade, cuja etiologia pode ser atribuida a varias causas, incluindo rearranjos do cromossomo Xq. Mutacoes no gene homologo humano do gene da Drosophila melanogaster diaphanous (DIAPH2), mapeado em Xq22, foram relacionados com falencia ovariana prematura (FOP) familiar. Alelos mutados deste gene afetam a espermatogenese e a ovogenese na Drosophila. Com o objetivo de investigar se o gene DIA humano tem papel definitivo na etiologia da FOP pesquisou-se por mutacoes no ultimo exon (l56) usando as tecnicas de SSCP (Polimorfismo conformacional em fita simples) e sequenciamento automatico do DNA de 27 pacientes com falencia ovariana prematura e 15 controles. RNA total foi extraido de celulas sanguineas das amostras. A sintese de cDNA foi feita por meio da reacao de transcricao reversa partindo-se do RNA mensageiro. Para amplificar o exon 156 do gene DIA, a estrategia do Nested-PCR' foi empregada para posterior analise de mutacao atraves do SSCP e sequenciamento automatico do DNA. Nenhuma mutacao foi encontrada no exon 156 do gene DIA nas amostras analisadas. Portanto, mutacoes nesse exon nao parecem ser causa comum da disfuncao ovariana. RESUMO ARTIGO 2 - Estudos citogeneticos do cromossomo X sugerem que principalmente o segmento Xql3 a Xq28 esteja envolvido na falencia ovariana prematura (FOP). Falencia ovariana prematura e uma sindrome heterogenia cuja origem permanece obscura na maioria dos casos. Varios genes, que estao envolvidos no desenvolvimento ovariano podem estar presentes nesta regiao e apresentar-se mutados. O gene QM que sintetiza a proteina ribossomal L10 (RPL10), mapeado na regiao Xq28, pertence a uma classe de proteinas regulatorias de transcricao. Este gene e altamente conservado atraves da evolucao dos eucariotos, sendo expresso em diversos tecidos. A RPL10 pode estar envolvida nos processos pos transcricionais que sao essenciais para a diferenciacao de tecidos especificos durante a embriogenese. A sua localizacao, expressao e funcoes levam a suposicao que o gene QM...(au)
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    Pesquisa de mutacoes do gene PINK1 em pacientes com doenca de Parkinson de inicio precoce
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011) Godeiro Junior, Clecio de Oliveira [UNIFESP]
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    Pesquisas de mutações na região codificadora do gene QM em pacientes com falência ovariana prematura e disgenesia gonodal pura
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Costa, Ana Maria Massad [UNIFESP]; Baracat, Edmund Chada [UNIFESP]
    Estudos mais detalhados do cromossomo X vem sendo realizados e algumas alteracoes, como translocacoes e delecoes, foram detectadas e estariam associadas a perda da funcao endocrina das gonadas antes dos 40 anos. Inumeros genes passaram a ser avaliados, principalmente aqueles que se encontravam no cromossomo X, mais precisamente em seu braco longo, nas regioes entao denominadas POF1 (Xq26-ter) e POF2 (Xq13.3-21.3). O gene QM pertence ao segmento POF1. Pesquisas com celulas animais mostraram ser um importante gene supressor de tumor. A associacao dessas duas caracteristicas e a possibilidade de ocorrerem alteracoes estruturais nesse gene, despertou nosso interesse em analisa-lo em pacientes com a falencia ovariana prematura e disgenesia gonadal pura. Propusemo-nos, pois, a analisar, por meio de tecnicas biomoleculares, a presenca de mutacoes na regiao codificadora do gene QM em pacientes com diagnostico de falencia ovariana prematura e disgenesia gonadal pura Estudaram-se 37 pacientes, atendidas no Setor de Ginecologia Endocrina do Departamento de Ginecologia da Universidade Federal de São Paulo - Escola Paulista de Medicina (UNIFESP-EPM), das quais 23 tinham diagnostico de falencia ovariana prematura e 14 de disgenesia gonadal pura. Todas possuiam idade inferior a 40 anosa fenotipo feminino; amenorreia primaria ou secundaria (de, no minimo, seis meses de duracao); cariotipo 46, XX e niveis sericos de hormonio foliculo-estimulante (FSH) superiores a 30 UIImL. As pacientes autorizaram a coleta de 10mL de sangue que foi acondicionado em freezer a -80°C. A seguir, realizamos extracao de DNA, reacao da polimerase em cadeia (PCR) para o gene QM e analise de single strand conformation polymorphism (SSCP). Uma paciente, a de numero 4, apresentou padrao de migracao eletroforetica diferente das demais. Nessa amostra foi realizado o sequenciamento automatico do DNA. Todas as amostras das pacientes com falencia ovariana prematura sofreram analise do gene da sindrome do X fragil realizada no J. C. Self Research Institute of Human Genetics (1 Gregor Mendel Circle - Greenwood - South Carolina 29646), pelo Dr. Charles E. Schwartz. Encontramos total de cinco pontos de mutacao na regiao codificadora do gene QM em paciente com falencia ovariana prematura. Em quatro dessas mutacoes, as alteracoes de nucleotideos levou tambem a troca de aminoacidos na proteina QM propriamente ditaa(au)
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    Polimorfismos de genes codificadores de mediadores de apoptose e o aborto espontâneo de repetição
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010) Banzato, Priscilla Chamelete Andrade [UNIFESP]; Mattar, Rosiane [UNIFESP]
    Objetivo: Avaliar a relacao entre polimorfismos de genes codificadores de FAS (670 A/G)(rs1800682) e FASL (844 C/T) (rs10458360) e o aborto espontaneo de repeticao (AER). Pacientes e metodos: Este estudo de carater caso-controle incluiu 133 pacientes com AER e 237 pacientes sem patologia sistemica ou obstetrica, e com historia de uma ou mais gestacoes sem intercorrencias, como controles. O DNA genomico foi extraido de sangue periferico por metodo de DTAB/CTAB, e os polimorfismos foram genotipados utilizando a tecnica de PCRRFLP, sendo as enzimas de restricao especificas BstNI (FAS) e BsrDI (FASL). Para a analise dos resultados, foram utilizados os testes de t de Student, qui-quadrado (χ2) e exato de Fischer, tendo sido adotado o nivel de significancia de p<0,05. Resultados: As frequencias genotipicas do polimorfismo do gene codificador de FAS (-670) foram 24% AA, 44,8% GA e 31,2% GG nos casos de AER; e 25,6% AA, 49,8% GA e 24,7% GG no grupo controle. Nao houve diferencas significantes entre os grupos tanto quanto as frequencias genotipicas como as alelicas (p=0,41 e p=0,30, respectivamente). Em relacao ao polimorfismo do gene codificador de FASL (-844), as frequencias genotipicas observadas foram 11,6% CC, 41,1% CT e 47,3% TT no grupo de AER; e 20,4% CC, 45,1% CT e 34,5% TT no grupo controle. Neste caso, foi detectada diferenca significante entre os grupos, tanto das frequencias genotipicas como alelicas (p=0,02 e p=0,004, respectivamente). Conclusoes: Neste estudo foi observada associacao entre os polimorfismos do gene codificador de FASL (-844) e a ocorrencia de AER. Por outro lado, nao foi identificada qualquer associacao entre o polimorfismo de FAS (-670) e AER