Navegando por Palavras-chave "Atividade hemolítica"

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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudos de síntese, conformação e atividade biológica de análogos do peptídeo antimicrobiano longipina
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-03-31) Silva, Jones Montenegro da [UNIFESP]; Miranda, Antonio de [UNIFESP]; Silva Júnior, Pedro Ismael da; http://lattes.cnpq.br/7158586957386749; http://lattes.cnpq.br/1357848049935882; http://lattes.cnpq.br/4701582072086750; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Longipina (Lp) é um potente peptídeo antimicrobiano isolado e caracterizado a partir da hemolinfa do Acustisoma longipe. É rico em lisina (K) e tirosina (Y) e sua sequência primaria é: SGYLPGKYVYKYKGKVF. O objetivo principal deste trabalho é estudar a relação estrutura-atividade de novos análogos da Lp, assim como entender os seus mecanismos de ação. Os peptídeos foram sintetizados pelo método de fase sólida manual e foram purificados e caracterizados por cromatografia líquida de fase reversa e por espectrometria de massas. As atividades antimicrobianas dos peptídeos foram avaliadas através de um ensaio de inibição de crescimento líquido contra P. aeruginosa, E. coli, S. marcescens, E. c1oacae, C. albicans, C. parapsilosis, C. tropicalis, C. neoformans, A. niger, C. herbarum e P. farinosus. As atividades hemolíticas e de resistência à degradação foram feitas, respectivamente, com hemácias e plasma humanos. Após uma análise dos resultados, observamos que os análogos: Ac_[Arg7,12,14,16]_Lp_NH2A,c_[Trp3,9,11,13]_Lp_NH2A;c_[Trp3,9,11,13A, rg7,12,14,16]_ Lp-NH2, Ac-[Des-Ser1, Trp3,9,11,13,Arg7,12,14,16]_Lp_NH2foram os mais ativos quando comparados com a Lp. Até a concentração de 100 IJM todos os compostos testados não apresentaram atividade hemolítica. Os análogos mais ativos foram também os mais resistentes à degradação em plasma. Concluímos que a acetilação e amidação e a substituição dos resíduos de Lys por Arg e de Tyr por Trp geraram análogos mais potentes e menos líticos. As perspectivas futuras são a realização dos estudos conformacionais por dicroísmo circular e a avaliação das atividades antitumorais dos compostos estudados.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Síntese, estudos conformacionais e atividade biológica do peptídeo antimicrobiano oligoventina e análogos
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-11-14) Mendes, Roberta Brandão [UNIFESP]; Silva Junior, Vani Xavier da {UNIFESP]; Silva Junior, Pedro Ismael da [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7158586957386749; http://lattes.cnpq.br/8202238208943023; http://lattes.cnpq.br/9759007573287366
    Introdução: A oligoventina é um peptídeo antimicrobiano (PAM) isolado a partir dos ovos da aranha armadeira Phoneutria nigriventer, contendo 8 resíduos de aminoácidos (Gln-Pro-Phe-Ser-Leu-Glu-Arg-Trp) e apresenta atividade contra bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e levedura e não apresenta atividade hemolítica. Objetivos: Estudar a relação estrutura-atividade da oligoventina e seus análogos, onde foram feitas modificações pontuais para tentar entender seu mecanismo de ação. Os peptídeos foram projetados com modificações C- e N- terminal; sínteses retro-inversas e D-aminoácidos e acrescentando cargas positivas por meio de substituições de arginina ao longo da cadeia (Arg-scan) para tentar melhorar sua atividade antimicrobiana. Metodologia: Os peptídeos foram sintetizados pela síntese em fase sólida, purificados por HPLC e caracterizados por LC/ESI-MS. Os estudos da atividade antimicrobiana foram determinados por ensaio de inibição de crescimento em meio líquido; os ensaio de atividade hemolítica foram realizados utilizando sangue recém coletado tipo A, fator RH positivo; os estudos de degradação utilizando plasma humano recém coletado com diferentes tempos de incubação (0, 1, 2 e 24 horas) ; os estudos conformacionais foram determinados por Dicroísmo circular em diferentes concentrações de TFE (0, 10, 30 e 50% de TFE/H2O) utilizando o espectropolarímetro e os ensaios de atividade antitumoral foram determinados contra células normais (Vero) e diferentes células tumorais ( K562, Jurkat, B16F10 e Neuro 2A) utilizando o Alamar BLUE e MTT para a viabilidade celular. Resultados: Analisando os resultados, na atividade antimicrobiana, quando comparados com a Ogv, que apresentou um CMI de 400 µM, os análogos que apresentaram uma atividade com CMIs melhores foram: Ac-Ogv-NH2 (12,5 µM), Ac-[Retro]-Ogv-NH2 (25 µM), Ac-[Des-Phe3]-D-Ogv-NH2(12,5 µM), Ac-D-Ogv-NH2 (50 µM),Ac-Ogv (100 µM), Ogv-NH2 (100 µM), [Arg2]-Ogv (100 µM), [Arg3]-Ogv (100 µM) e [Arg4]-Ogv (50 µM). Na atividade hemolítica, os análogos que apresentaram as melhores atividades, não apresentaram hemólise nas concentrações testadas, enquanto o restante, apresentou taxa de hemólise mais alta. Na degradação, os análogos com modificações C- e N- terminal que foram acetilados e amidados, respectivamente, foram mais estáveis e não degradaram em até 24 horas de ensaio, enquanto os peptídeos com extremidades livres, degradaram em 2 horas. Nas estruturações secundárias dos análogos testados, todos possuem estruturas randômicas, exceto o análogo [Arg4]-Ogv, cujo espectro apresentou uma conformação mais rígida, mas sem adquirir conformação específica. Contra as células tumorais eritroleucêmicas K562 e melanoma murino, os análogos não apresentaram resultados significativos. Contra as Jurkat, Ac-(Glu1)-Ogv-NH2 foi a que apresentou a maior atividade em comparação com a Ogv. Contra as células Vero, a Ogv preservou cerca de 73% de viabilidade celular, juntamente com todos os análogos testados. Já contra as células N2A, os análogo que apresentaram os melhores resultados foram a [Arg4]-Ogv, com viabilidade celular de 45%, a Ogv e o análogo Ac-[Retro]-Ogv-NH2 com 53% de viabilidade celular. Conclusão: Esses estudos apresentaram alguns análogos com resultados melhores que a Ogv, sendo eles: Ac-Ogv-NH2, Ac-D-Ogv-NH2, Ac-[Retro]-Ogv-NH2 e Ac-[Des-Phe3]-D-Ogv-NH2 com as melhores atividades antimicrobianas, não foram degradados e não apresentaram atividade hemolítica no MIC que possuem atividade. A [Arg4]-Ogv foi a que apresentou um amplo espectro de ação, contra todas as bactérias Gram-positivas e Gram-negativas testadas e a única que apresentou atividade contra fungo filamentoso e levedura. A acetilação e amidação dos peptídeos tiveram um papel fundamental na melhora da atividade antimicrobiana, hemolítica e resistência a degradação. Novos estudos se fazem necessários para elucidar e se obter um melhor entendimento sobre a atividade desse peptídeo.