Navegando por Palavras-chave "Biotecnologia Marinha"

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    Acesso aberto (Open Access)
    Análise do potencial anticâncer de extratos obtidos de esponjas marinhas de Fernando de Noronha
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-03-29) Santos, Letícia Schmitz Saraiva [UNIFESP]; Jimenez, Paula Christine [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4248251483705135; http://lattes.cnpq.br/4552158300334014; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A natureza vem contribuindo há tempos com recursos e inspirações para busca de compostos com funções terapêuticas. Sobretudo, o oceano tem demonstrado ser um ambiente de grande significância nestas descobertas devido à biodiversidade extremamente rica presente. As esponjas marinhas figuram entre os grupos de organismos mais estudados por seu potencial farmacológico, sendo inclusive representadas por dois dos oito medicamentos aprovados para tratamento de câncer (Ara-C e Mesilato de eribulina). Com a rica biodiversidade brasileira e a grande necessidade mundial por tratamentos anticâncer mais eficazes e com menos efeitos colaterais, o objetivo deste estudo foi investigar o potencial de extratos obtidos de esponjas marinhas coletadas no Arquipélago de Fernando de Noronha, através da avaliação da atividade citotóxica dos extratos obtidos em células tumorais em cultura. No capítulo I realizou-se um estudo bioprospectivo. Para tanto, exemplares de 47 esponjas foram coletadas no ano de 1998 em diversos locais do Arquipélago, classificadas taxonomicamente e extraídas em solvente orgânico, dando origem aos respectivos extratos brutos. Destes, 39 extratos brutos foram submetidos à avaliação qualitativa de sua citotoxicidade em duas linhagens de células tumorais humanas em cultura: HCT116 (carcinoma colorretal) e MCF-7 (adenocarcinoma mamário) pelo ensaio de MTT. Os resultados obtidos através desta triagem selecionaram, para abordagem quantitativa, as amostras com porcentagem de ao menos 75% de inibição do crescimento celular na presença de concentrações de 5 e 50 μg/mL dos extratos. Dos 39 testados contra as células HCT-116, aproximadamente 46% mostraram-se ativos, enquanto por volta de 29% dos 34 testados demonstraram resultados promissores contra MCF-7. Entre os extratos ativos, o FN98-017 obtido da espécie Ectyoplasia ferox foi considerado promissor e selecionado para prosseguir em investigação, realizado no capítulo II deste estudo. Para tanto, foi realizado o fracionamento bioguiado deste extrato, identificando a partição But P e a fração F16 como as amostras mais citotóxicas. Estas amostras ainda se apresentaram citotóxicas contra linhagens tumorais de diversas origens histológicas. Mais além, foram submetidas à verificação dos respectivos efeitos sobre a viabilidade celular e quanto à indução de alterações morfológicas, buscando gerar evidências para aprofundar o conhecimento do modo de ação destas amostras. A partir destas análises, é possível sugerir que But P e F16 são capazes de disparar o processo de apoptose celular, logo, mostram-se promissoras para estudos mais aprofundados sobre os seus efeitos anticâncer.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Bioprospecção alvo-direcionada de moduladores da família das proteínas inibidoras de apoptose (IAPS) em extratos de microrganismos marinhos
    (Universidade Federal de São Paulo, 2018-09-21) Barbosa, Gabriel Henrique [UNIFESP]; Jimenez, Paula Christine [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introduction: Electing a good molecular target is still a hindrance regarding the discovery of new drugs. The Inhibitor of Apoptosis Protein family (IAPs) is a relevant target in cancer research, as we find members of this class overexpressed in several tumor types and almost totally absent in normal cells. Objective: Thus, this work aimed to prospect, through a target-guided approach, natural products produced by marine actinobacteria that act as modulators of the IAP family, validating its activity and interaction through in vitro assay. Methods: Three members of the IAP family (i.e. survivin, livin and XIAP) obtained by heterologous expression in E. coli vector were attached to a resin support and incubated with marine actinobacteria extracts using a bioaffinity assay called functional chromatography. Molecules retained in the resin were eluted and analyzed by HPLC-MS, resulting directly in the mass of the ligand. We fractionated the crude extract of the selected actinobacteria (BRA-214) in Sephadex-LH20, silica cartridge, semi-preparative HPLC and manually collected in analytical HPLC, monitored by DAD detector. Isolated compounds were tested for their IC50 in SK-MEL-19 cells and, by Western blotting, inquired about their effects on protein expression of the IAP survivin and other relevant apoptosis markers. Results: 19 crude extracts were submitted to bioaffinity assays; two of them resulted in hits. The selected extract, produced by actinobacteria BRA-214, previously identified as a member of the Streptomyces genus, returned hits of m/z 613, 670, 684, 704, 718 and 752 (M+H+]. Four of them (m/z 613, 704, 718 and 752) were successfully isolated and seem to be unpublished structures. Their fragmentation profile indicates that they belong to the same class of non-ribosomal peptides, except for the 613 m/z hit, which seems to be from another unknown class. The treatment with the compound of m/z 704 promoted a lower expression of survivin in SK-MEL-19 cells. Conclusion: Functional chromatography showed to be a valid and applicable technique to bioprospect ligands to protein from the IAP family, allowing the identification and recovery of unprecedented secondary metabolites that seem to interact and modulate this family of proteins.