Navegando por Palavras-chave "Célula mesangial"

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    Acesso aberto (Open Access)
    Alterações na expressão protéica das células mesangiais em cultura sob os efeitos quimiotóxicos do meio de contraste radiológico iodado, HexabrixR.
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006-12-31) Perez, Juliana Dinéia [UNIFESP]; Casarini, Dulce Elena [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The kidney is a common target organ for toxic agents, like contrast media (CM). The CM with iodine is normally used in angiography, urography and tomography. CM is filtrated and metabolized in the kidney, being the major cause of acute renal failure (ARF). Nowadays, proteome is actually a powerful tool in the Nephrology Research, mainly in the identification of protein modifications when in contact with toxic agents. This technique also gives the possibility of biomarkers identification to help the physicians in the patient treatments. The aim of this study was to separate by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE) and to identify by matrix-assisted laser desorption ionization-time-of-flight (MALDI-TOF) mass spectrometry the proteins that were up- or down-regulated in immortalized mesangial cell in culture (IMC) in the presence of CM. We evaluated three groups of IMC: control (CT), manitol (Man) and HexabrixTM (Hx). The samples were treated and submitted to the 2D-PAGE analysis, where the proteins were separated according to their isoelectric points and molecular weights. We identified by MALDI-TOF around 11 proteins. Some proteins were expressed only in the Hx group (Proliferating Cell Nuclear Antigen and Masp 1); others were more expressed in the Man group when compared with Hx and Ct groups (Translationally Controlled Tumor Protein). On the other hand, some proteins were expressed only in the Ct and Man groups (Annexin A3 and DNA ligase), suggesting that probably the Hx caused injury in these cells and it was responsible for the down-regulation of these proteins. Finally, we identified proteins that were expressed in the three cell groups (Heat Shock Protein 27, Heat Shock Protein 84), but with different levels. We concluded that the osmolarity of manitol and Hx could influenciate the alterations in the concentration of a specific protein. We believe that osmolarity and other factors of the CM could be responsible for the nephrotoxicity observed in this model. Proteomic analysis is a promising tool to study the renal pathophysiology making possible in the future the identification of biomarkers of renal diseases that can constitute therapeutically targets, minimizing the actual damages for the ARF.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Efeitos de vesículas extracelulares derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas em lesões geradas por fator de crescimento transformador beta em células mesangiais
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021) Bronel, Bruno Aristides dos Santos; Boim, Mirian Aparecida [UNIFESP]; Novaes, Antônio da Silva; http://lattes.cnpq.br/5061955959868415; http://lattes.cnpq.br/8916858915652849; http://lattes.cnpq.br/3134243614920457
    O fator de crescimento transformador beta (TGF-β) é um dos principais indutores de fibrose renal. Dentre suas ações destaca-se a indução da transdiferenciação miofibroblástica, tendo um papel importante na disfunção renal em várias condições fisiopatológicas, contribuindo para progressão da doença renal crônica. A inibição do sistema renina-angiotensina (SRA) é uma estratégia eficiente em reduzir os processos pró-fibróticos, no entanto, essa estratégia apenas retarda a progressão da doença, mas não reverte a fibrose estabelecida. Nesse contexto, é necessária a busca por novas terapias. A utilização de célulastronco pluripotentes induzidas (iPSC) tem sido considerada uma abordagem com grande potencial regenerativo tecidual, através de efeitos parácrinos pela secreção de biomoléculas liberadas no meio extracelular ou transportadas dentro de vesículas extracelulares (EVs) para células alvo. Portanto, a utilização de EVs derivadas de iPSC (EV-iPSC) pode ser uma abordagem terapêutica promissora com reduzidos efeitos colaterais em comparação às iPSC. Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial efeito terapêutico de EVs derivadas de iPSC (EV-iPSC) em modelo in vitro, utilizando células mesangiais de camundongos (MMCs) estimuladas com TGF-β. EV-iPSC foram obtidas por ultracentrifugação diferencial do meio de cultura de iPSC e avaliadas por análise de rastreamento de nanopartículas (NTA). As EV-iPSC foram caracterizadas pela avaliação proteica de marcadores específicos. MMCs foram estimuladas com 5 ng/mL de TGF-β e tratadas ou não com EV-iPSC. Marcadores de inflamação, de fibrose e os componentes do SRA foram avaliados por RT-PCR, western blotting e imunofluorescência. Os resultados estão expressos como média ± erro padrão da média. A análise estatística foi feita através de análise de variância (ANOVA), seguida de teste de Tukey. Foi observada a expressão de marcadores positivos de EVs (CD9, CD63 e CD81) e negativo (calnexina), marcador de retículo endoplasmático. O tamanho médio das EV-iPSC foi de 151,6 nm. A análise quantitativa mostrou uma concentração média de 1,03x109 partículas/mL por 106 células. O estímulo com TGF-β aumentou a expressão de marcadores de fibrose (fibronectina, vimentina, α-SMA e colágeno do tipo I), moléculas relacionadas à inflamação (p50 e p65) e componentes do SRA (renina, angiotensinogênio e receptor AT1). Essas alterações foram atenuadas na presença de EV-iPSC. As EV-iPSC foram eficientes em reduzir os marcadores de fibrose, moléculas relacionadas à inflamação e componentes do SRA em MMCs estimuladas com TGF-β, podendo constituir uma ferramenta terapêutica em potencial na doença renal crônica. A utilização de EV-iPSC é uma terapia inovadora e de alta relevância translacional para modelos in vivo, abrindo novas perspectivas na área de nefrologia.