Navegando por Palavras-chave "Compostos naturais"

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    Efeito dos compostos naturais na atividade enzimática da urease em biossensores
    (Universidade Federal de São Paulo, 2024-06-05) Souza, Thaísa da Silva de [UNIFESP]; Philadelphi, Laura Oliveira Péres [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7511492642565571; http://lattes.cnpq.br/7900547637593708
    Os biossensores são dispositivos projetados para detectar e quantificar a presença de substâncias específicas em um meio. Atualmente, seu uso tem crescido devido a diversos benefícios, como alta sensibilidade e especificidade, fácil utilização e, principalmente, baixo custo em comparação com outras técnicas analíticas. Neste trabalho, foram estudadas maneiras de aprimorar a detecção de ureia através da adição de compostos naturais aromáticos a biossensores enzimáticos de urease. Os compostos naturais avaliados foram o eugenol e o bis eugenol, que possuem propriedades antioxidantes, antimicrobianas e anti-inflamatórias, além de suas propriedades sensoriais. Ambos os compostos têm potencial para aumentar a eficiência na detecção de ureia devido à sua estrutura conjugada e possível capacidade de interagir com a enzima urease, resultando em maior imobilização da enzima no filme e melhorando sua estabilidade, permitindo que ela mantenha sua atividade enzimática por mais tempo. Para a construção do biossensor, foram produzidos filmes finos de várias camadas (1 a 5) pelo método de spin coating, utilizando o polímero conjugado poli(9,9-dioctilfluoreno-co-fenileno) (PFPh) como matriz, a urease como enzima catalisadora da reação com a ureia, e o composto natural (eugenol ou bis-eugenol) para intensificar a imobilização e atividade da urease. Diferentes concentrações dos compostos naturais (0,1, 0,3 e 0,5 mg/mL) foram avaliadas para determinar sua eficácia nos filmes. Para comprovar os resultados, foram realizadas caracterizações dos compostos e dos filmes obtidos, utilizando espectroscopia na região do infravermelho, UV-vis e fluorescência, além de avaliações da atividade enzimática, variando a concentração de ureia de 5 a 40 mM. Os resultados obtidos foram comparados com filmes de mesma estrutura, porém sem a presença de compostos naturais, confirmando o aumento da atividade enzimática devido à inclusão desses compostos no sistema.
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    Genômica funcional de adipócitos 3T3-L1 tratados com o extrato padronizado de Ginkgo biloba (EGb)
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-11-03) Thomaz, Fernanda Malanconi [UNIFESP]; Telles, Monica Marques [UNIFESP]; Alonso-Vale, Maria Isabel Cardoso [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4266175652800598; http://lattes.cnpq.br/8143359335123923; http://lattes.cnpq.br/0573458164830062
    O consumo excessivo de calorias, predisposição genética e o sedentarismo são alguns dos principais fatores que contribuem para um desequilíbrio calórico, situação em que se consome mais calorias do que se gasta. Nesse cenário, adipócitos maduros aumentam de tamanho, causando hipertrofia celular que pode levar à obesidade, e inflamação do tecido adiposo, resultando em graves consequências metabólicas. Nas últimas décadas, houve uma grande expansão no estudo e na elucidação sobre o papel do tecido adiposo branco, incluindo sua importante função endócrina, a qual está relacionada à morfologia e alteração metabólica dos adipócitos. Estudos anteriores do nosso grupo demonstraram o potencial antiobesogênico e atenuador de perturbações metabólicas do extrato padronizado de Ginkgo biloba (EGb), em diferentes modelos animais, como de obesidade induzida pela dieta quanto de depleção hormonal causada pela ovariectomia. Sendo assim, esse trabalho teve por objetivo determinar o efeito do EGb sobre o metabolismo e o transcriptoma durante o processo de diferenciação de pré-adipócitos murinos 3T3-L1, bem como de avaliar o potencial do EGb de atuar na lipólise de adipócitos maduros murinos (3T3-L1) e humanos (hWA A41), a fim de serem elucidados possíveis mecanismos pelos quais o extrato modula o metabolismo dessas células. Para o estudo do potencial efeito do EGb na adipogênese, pré-adipócitos 3T3-L1 foram diferenciados durante 7 dias na ausência ou presença de EGb. A citotoxicidade do extrato foi verificada em pré-adipócitos 3T3-L1 e hWA A41 em diferentes concentrações após 48h de tratamento utilizando o método colorimétrico MTT. A análise do conteúdo lipídico dos adipócitos foi realizada por coloração com óleo vermelho O, e seu transcriptoma foi avaliado por PCR Array, utilizando placas customizadas com os genes de interesse. A análise proteica dos marcadores C/EBP, C/EBPα, perilipina-1 e FABP4 foi realizada de forma temporal, nos dias 0 (D0), 3 (D3), 5 (D5) e 7 (D7) durante o processo de diferenciação por Western Blotting. O estudo do potencial efeito do EGb na lipólise foi avaliado em adipócitos maduros 3T3-L1 diferenciados durante 7 dias e em adipócitos maduros hWA a41 diferenciados durante 19 dias, seguidos de 48h de tratamento na ausência ou presença de EGb 1.0 mg/mL. Avaliou-se a taxa de lipólise basal dessas células por meio da quantificação de glicerol. Para os adipócitos 3T3-L1, a expressão gênica dos marcadores lipolíticos Plin 1, Lipe e Pnpla2 foram avaliados por RT-PCR. Os resultados de viabilidade celular mostraram uma ausência de citotoxidade do extrato nas concentrações avaliadas para ambas as linhagens (murino e humana) de pré-adipócitos estudadas. Pré-adipócitos 3T3-L1 tratados com EGb nas concentrações 0,75 (p < 0,001) e 1,00 mg/mL (p < 0,001) apresentaram um aumento no conteúdo lipídico de 37% e 44%, respectivamente, em comparação as células não tratadas. O perfil apresentado pelo transcriptoma das células tratadas com EGb 1,0 mg/mL apresentou 42% de genes superexpressos significativamente relacionados a lipases e enzimas lipolíticas, pró-adipogênese, pró-browning, oxidação de ácidos graxos e termogênese, e citocinas, fatores de crescimento e transdução de sinal. A quantificação de proteínas-chave da via de adipogênese mostrou que o tratamento com EGb 1,0 mg/mL aumentou a expressão de C/EBPβ em 78% (p = 0.0002) no D7, bem como apresentou uma tendência de aumento da expressão de C/EBPα de 80% (p = 0,075) no D3 e de 170% (p = 0,0506) no D7, em comparação com o controle. Ao avaliar marcadores característicos de adipócitos maduros, o tratamento com EGb modulou positivamente a expressão de perilipina em aproximadamente 400% no D3 (p = 0.0039) e aproximadamente 200% no D5 (p < 0.0001), bem como elevou os níveis de FABP4 em 281% no D5 (p = 0.0007). Ao avaliar o efeito do EGb (1,0 mg/mL) em adipócitos maduros, observou-se para ambas as linhagens de células (murinas 3T3-L1 e humanas hWA A41), aumento significativo de 24% (p = 0,0102) e 26% (p < 0,0001), respectivamente, na taxa da lipólise basal em comparação com o grupo controle. Em células 3T3-L1 tratadas com EGb, os níveis de mRNA de Plin 1 e Lipe foram diminuídos em 32% (p = 0,0182) e 40% (p = 0,0047), respectivamente, em comparação as que não receberam tratamento. Assim, pode-se concluir que o EGb apresenta um efeito promissor pró-adipogênico e pró-lipolítico nos modelos celulares avaliados, sugerindo um potencial terapêutico complementar no tratamento da obesidade. No entanto, são necessários estudos adicionais para investigar com mais profundidade os mecanismos envolvidos, principalmente com foco em linhagens celulares humanas.