Navegando por Palavras-chave "Escherichia coli Enteropatogênica"

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    Avaliacao de uma potencial correlacao entre capacidade de invasao de celulas intestinais cultivadas in vitro, subtipos de intimina e expressao da proteina efetora EspT em Escherichia coli Enteropatogenica (EPEC) Atipica
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Pacheco, Veronica Carvalho Rezende [UNIFESP]
    Escherichia coli enteropatogenica (EPEC) tipica (tEPEC) e EPEC atipica (aEPEC) diferem quanto a ocorrencia do plasmideo EAF (EPEC adherence factor) nas tEPEC e sua ausencia nas aEPEC. Ambas produzem lesao attaching-effacing em celulas eucarioticas, sendo que a aderencia intima observada nessa lesao e mediada pela proteina bacteriana intimina. Variacoes na porcao de ligacao de intimina aos enterocitos definem diferentes subtipos da proteina. Neste estudo, a capacidade invasora de aEPEC portadoras de subtipos de intimina alfa, beta, gama e omicron foi avaliada em celulas intestinais Caco-2 diferenciadas in vitro e a participacao da proteina efetora EspT no mecanismo de invasao de amostras selecionadas foi determinada. Para comparacao, foi empregada a amostra JPN15, derivada da tEPEC E2348/69 por perda do plasmidio EAF. Somente duas aEPEC (EC423/03, intimina beta, e 1551-2, intimina omicron) apresentaram indices de invasao (4,75 + 1,50 e 4,72% ± 0,95, respectivamente) significativamente maiores do que JPN15, em ensaios de protecao com gentamicina. Dessas duas amostras, apenas a 1551-2 persistiu intracelularmente ate 48 h. O gene que codifica EspT, uma proteina que ativa GTPases Rac1 e Cdc42 levando a invasao celular, foi identificado em apenas duas aEPEC nao invasoras. As insercao e expressao de espT em JPN15 (nao invasora) e 1551-2 (invasora) nao alterou seus indices de invasao. Neste estudo, demonstramos que o processo de invasao de celulas Caco-2 por aEPEC nao depende exclusivamente do subtipo de intimina, e que a capacidade invasora nao esta diretamente relacionada com persistencia e/ou multiplicacao intracelular. Alem disto, verificamos que a proteina efetora EspT nao e o fator determinante do potencial invasor em aEPEC
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo da influência de fatores ambientais na interação de células epiteliais por uma amostra de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) atípica.
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Romao, Fabiano Teodoro [UNIFESP]; Gomes, Tania Aparecida Tardelli [UNIFESP]; Hernandes, Rodrigo Tavanelli [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8376974115598584; http://lattes.cnpq.br/1704285823923729; http://lattes.cnpq.br/5572231018398705; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    As Escherichia coli enteropatogenicas (EPEC) sao agentes de diarreia humana, que produzem lesao denominada attaching/effacing (AE), a qual e caracterizada pelo apagamento das microvilosidades e aderencia intima bacteriana aos enterocitos. Essa lesao ocorre apos a interacao entre intimina (proteina de membrana externa bacteriana) e o seu receptor, Tir, que e translocado para celulas eucarioticas atraves do Sistema de Secrecao Tipo 3 (SST3). EPEC sao divididas em tipicas (tEPEC) e atipicas (aEPEC). tEPEC produz Bundle forming pilus (BFP), uma fimbria que medeia o padrao de aderencia localizada, que e caracterizado pela formacao de microcolonias bacterianas compactas sobre a superficie celular. Embora aEPEC sejam desprovidas de BFP, e portanto produzam microcolonias frouxas, nosso grupo identificou anteriormente algumas cepas de aEPEC produtoras do padrao AL compacto. Estudos anteriores da literatura mostraram que fatores ambientais podem regular genes que codificam fatores de virulencia, como por exemplo: producao de adesinas e proteinas do SST3. Neste estudo, foi avaliada a influencia de pH, glicose, concentracao de CO2 e presenca de sais biliares na interacao da aEPEC 1551-2 com celulas HeLa. Os resultados mostraram que sua efiCiência em aderir a celulas HeLa e maior entre os pH 7,2 e 8,0. Uma maior concentracao de CO2 promoveu aumento no numero de bacterias aderidas independentemente do pH. A taxa de crescimento bacteriano nao foi afetada pelas diferencas de pH e CO2. O padrao AL foi mantido no DMEM com 5 mM de glicose, independentemente da concentracao de CO2. A presenca de sais biliares nao promoveu alteracoes na interacao bacteriana na concentracao usada. Alem disso, com o aumento da concentracao de glicose, aEPEC 1551-2 aderiu com um padrao de aderencia hibrido: AL e agregativo-like. Este padrao e provavelmente associado com a producao de fimbria tipo 1 (T1P), ja que o mutante isogenico em T1P nao adere mais de forma hibrida, mantendo somente o padrao AL anteriormente descrito. Neste estudo, foi demonstrado que o numero de bacterias aderidas sobre as celulas HeLa foi influenciado pelas variacoes de pH e CO2, mas nao pela concentracao de glicose ou presenca de sais biliares. Alem disso, o padrao AL de aEPEC 1551-2 pode ser alterado para um padrao hibrido AL e AA-like com o aumento da concentracao de glicose, e este evento ocorre devido a presenca de T1P
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    Acesso aberto (Open Access)
    Ocorrência e caracterização de eventos de invasão de linhagens celulares cultivadas in vitro por amostras de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) atípica
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2009-03-25) Yamamoto, Denise [UNIFESP]; Gomes, Tania Aparecida Tardelli [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) produce attaching/effacing (A/E) lesions on eukaryotic cells mediated by the outer membrane adhesin Intimin. EPEC are subgrouped into typical (tEPEC) and atypical (aEPEC). We have recently demonstrated that aEPEC strain 1551-2 (serotype O non-typable, non-motile) invades HeLa cells by a process dependent on the expression of intimin subtype omicron. In this study, we evaluated whether aEPEC strains expressing other intimin subtypes are also invasive using the quantitative gentamicin protection assay. We also evaluated whether aEPEC invade intestinal differentiated T84 cells. Five of six strains invaded HeLa and T84 cells in a range of 13.3%-20.9% and 5.8%-17.8%, respectively, of the total cellassociated bacteria. The strains studied were significantly more invasive than prototype tEPEC strain E2348/69 (1.4% and 0.5% in HeLa and T84 cells, respectively). aEPEC strain 1551-2 was also tested in differentiated Caco-2 cells, resulting in an invasion index similar to that obtained in T84 cells (7.5%±1.7%). This strain was also significantly more invasive than prototype tEPEC strain E2348/69 (1.8%±0.6%). Invasiveness of T84 cells was confirmed by transmission electron microscopy. We also showed that invasion of HeLa cells by aEPEC 1551-2 depended on actin filaments, but not on microtubules. In addition, infection of non-differentiated monolayers and disruption of tight junctions enhanced its invasion efficiency in T84 cells, suggesting preferential invasion via a non-differentiated surface. In summary, aEPEC strains may invade intestinal cells in vitro with varying efficiencies and independently of the intimin subtype.