Navegando por Palavras-chave "Galleria mellonella"

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    Análise das propriedades antimicrobianas dos derivados do peptídeo multifuncional Quiotorfina na formação de biofilme
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-02-25) Simões, Fernanda da Silva Seiffert [UNIFESP]; Conceição, Katia [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5360223612968931; http://lattes.cnpq.br/8273242260043933
    A quiotorfina (KTP, L-tirosil-L-arginina) é um neuropeptídeo analgésico endógeno isolado pela primeira vez do cérebro bovino em 1979. Estudos anteriores indicam que a Quiotorfina pode ser considerado um peptídeo multifuncional possuindo principalmente atividades antinociceptiva, neuromodulatória, anti-inflamatória e antimicrobiana. Os peptídeos antimicrobianos (PAMs) são uma forma alternativa de combater a alta taxa de resistência de bactérias a antibióticos convencionais. No presente trabalho, três derivados de KTP (Indol-KTP-NH2, GABA-KTP-NH2 e Bu-KTP-NH2) foram selecionados e testados contra as células planctônicas de bactérias gram-positivas (Streptoococcus pneumoniae e Staphylococcus aureus) e gram-negativas (Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa). Também foi avaliada a eficiência dos derivados de KTP na inibição da formação de biofilme de microrganismos selecionados. Além dos testes antimicrobianos, foram realizados testes de toxicidade dos derivados contra glóbulos vermelhos, fibroblastos embrionários de camundongos, células tumorais B16-F10-Nex2 e no organismo modelo Galleria mellonella. Os três derivados analisados foram eficazes na inibição do crescimento de E. coli na forma planctônica, sendo que os derivados Indol-KTP-NH2 e GABA-KTP-NH2, apresentaram também atividade significativa no teste de inibição de biofilme E. coli e S. pneumoniae. Todos os derivados apresentaram baixa atividade citotóxica e hemolítica. Os testes de infecção in vivo corroboraram a eficácia do derivado GABA-KTP-NH2 para inibição da infecção causada por E. coli. Esses resultados sugerem que dentre os derivados testados, o mais eficaz, GABA-KTP-NH2, além de sua ação analgésica, pode atuar como um eficaz agente antimicrobiano e, portanto, pode ser considerado um derivado promissor para aplicação terapêutica.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Avaliação do neuropeptídeo quiotorfina e seus derivados na viabilidade fúngica e formação de biofilmes
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-04-01) Andrade, Vitor Martins [UNIFESP]; Conceição, Katia [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5360223612968931; http://lattes.cnpq.br/5265382339197713
    A quiotorfina (KTP, L-tirosil-L-arginina) é um neuropeptídeo analgésico endógeno isolado pela primeira vez do cérebro bovino em 1979. Estudos anteriores mostraram que a quiotorfina possuem atividades anti-inflamatória e antimicrobiana. Seis derivados de quiotorfina [KTP-NH2, KTP-NH2-DL, KTP conjugado com ibuprofeno (IbKTP), IbKTP-NH2, N-metil-L-Tyr-L-Arg (Me-KTP-NH2-LL) e N-metil -D-Tyr-L-Arg (Me-KTP-NH2-DL)] foram projetados e sintetizados para melhorar a lipofilicidade e a resistência à degradação enzimática. Este estudo avaliou a atividade antimicrobiana e antibiofilme desses peptídeos. A atividade antifúngica das quiotorfinas foi determinada em cepas padrão de espécies de Candida, incluindo Candida albicans ATCC 10231, Candida krusei ATCC 6258 e sete isolados clínicos (C. albicans 28, Candida dubliniensis 19-S, Candida glabrata 217-S, Candida lusitaniae 14 -S, Candida norvegensis 51-S, Candida parapsilosis 63 e Candida tropicalis 140-S) obtidas da cavidade oral de pacientes HIV-positivos. Os peptídeos foram sintetizados em fase sólida, purificados por RP-HPLC (pureza> 95%) e caracterizados por ressonância magnética nuclear. Os resultados do ensaio de microdiluição em caldo e microscopia eletrônica de varredura mostraram que o IbKTP-NH2 apresentou atividade antifúngica significativa contra cepas de Candida e atividade antibiofilme contra os isolados clínicos. A toxicidade e sobrevivência após a infecção foi avaliada após a injeção do peptídeo em larvas de Galleria mellonella como modelo de infecção experimental. Além disso, o IbKTP-NH2 apresentou atividade antimicrobiana potente contra fungos multirresistentes e não apresentou toxicidade para larvas de G. mellonella até a concentração de 500 μM. Esses resultados sugerem que o IbKTP-NH2, além de seu conhecido efeito nas membranas celulares, pode desencadear uma resposta imune celular e, portanto, é promissor para aplicação biomédica.
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    Avaliação dos mecanismos de virulência e do fitness bacteriano de isolados clínicos de Klebsiella pneumoniae produtores de KPC-2
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2016-07-26) Visconde, Marina Francisco [UNIFESP]; Gales, Ana Cristina [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8402272715765172; http://lattes.cnpq.br/5369711625712661; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objective: The aim of this study was to evaluate and compare the virulence and bacterial fitness of KPC-2-producing-K. pneumoniae isolates. Methods: A total of 30 K. pneumoniae clinical isolates distributed in three distinct groups, KPC-2-producing, ES?L-producing and community-acquired, were evaluated in this study. The genetic similarity among the isolates was determined by PFGE and MLST techniques. The antimicrobial susceptibility profile was determined by agar dilution and broth microdilution methodologies. The research of resistance and virulence genes were performed by PCR followed by DNA sequencing. OMPs characterization was evaluated by PCR, sequencing and SDS-PAGE techniques. For the in vitro evaluation of virulence factors, phenotypic tests were performed, such as the presence of hypermucoviscosity, biofilm formation, heat resistance, resistance to human serum, hemolysin production and phagocytosis by macrophages. The infection models using C. elegans and G. mellonella were performed for the evaluation of the in vivo virulence factors. The bacterial fitness was evaluated by measuring the growth rate of the isolates. Results: The genetic relationships evaluation showed the presence of 26 distinct PFGE patterns (A-Z) and 24 different STs distributed among 30 clinical isolates. High resistance rates to the antimicrobials agents tested were observed among KPC and ES?L groups. The resistance genes blaKPC, blaCTX-M, blaTEM, blaSHV, and blaOKP were found in KPC and ES?L groups, while only the blaSHV and blaLEN genes were found in the community group. All isolates showed alterations in OmpK36. The PCR revealed the presence of virulence genes clpK, rmpA, mrkD, fimH, kpn, ycfm, kfu, Aero1, Aero2, iutA, entB, ybtS, fyuA and traT in all groups of this study. The hypermucoviscosity phenotype was found in only three isolates. All isolates were resistant to the factors present in human serum and able to form biofilms. All clpk carrying isolates survived the thermal shock, excepted isolated A23177. None of the isolates was able to produce hemolysin. Significant susceptibility differences in phagocytosis were observed in the KPC-2 and ES?L groups. In C. elegans model, the KPC-2, ES?L and community groups showed an LT50 of 9.65, 10.2 and 10.4 days, respectively. In G. mellonella model, there was no significant difference among the three groups evaluated, as observed in the bacterial fitness assay. Conclusion: This study demonstrated that the multi-drug resistant K. pneumoniae clinical isolates producing KPC-2 and ES?L were as virulent as those isolates recovered from the community, without significant loss in bacterial fitness, which contributed with their persistance in the hospital environment.
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    Evaluation of the Anti‑biofilm Efficacy of Kyotorphin Derivatives and Biosafety Assessment: In Vitro and In Vivo Investigations Targeting Bacterial and Fungal Pathogens
    (Springer, 2024) Carvalho, Isabel Chaves Silva [UNIFESP]; Simões, Fernanda da Silva Seiffert [UNIFESP]; de Andrade, Vitor Martins [UNIFESP]; Tada, Dayane Batista [UNIFESP]; Heras, Montserrat; Bardají, Eduard; Lopes-Ferreira, Mônica; Castanho, Miguel Augusto Rico Botas; Conceição, Katia [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5360223612968931
    Kyotorphin (KTP) dipeptide (l-Tyrosine-l-Arginine) and their derivatives possess a multitude of functions, qualifying them as "multifunctional peptides." Considering the escalating bacterial resistance to antibiotics, antimicrobial peptides offer a promising road, forming the central focus of this current investigation. The effectiveness of KTP derivatives, GABA-KTPNH2 and Indol-KTP-NH2, were assessed for biofilm inhibition in bacterial and fungal strains. The viability of these derivatives was tested in fibroblasts and B16-F10-Nex2 cells. In vivo toxicity was evaluated using the model organisms Galleria mellonella and Danio rerio. Notably, both GABA-KTP-NH2 and Indol-KTP-NH2 derivatives effectively hindered biofilm formation in E. coli, S. pneumoniae, and C. krusei. In the G. mellonella model, the derivatives exhibited significant larval survival rates in toxicity tests, while in infection tests, they demonstrated efficient treatment against the evaluated microorganisms. Conversely, zebrafish assays revealed that Indol-KTP-NH2 induced substantial mortality rates in embryos after 72 and 96 h of exposure. Similarly, the GABA-KTP-NH2 derivative exhibited heightened lethality, noticeable at the 100 μM concentration after the same exposure periods. Importantly, toxicity assessments unveiled a relatively lower toxicity profile, coupled with a reduced potential for inducing abnormalities. These results highlight the necessity of employing a comprehensive approach that integrates diverse techniques to thoroughly assess toxicity implications.
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    Identificação e análise da atividade antimicrobiana dos peptídeos sintéticos Tn CRT derivados da sequência CART isolada de Thalassophryne nattereri
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-02-09) Silva, Verônica Andrade [UNIFESP]; Conceição, Katia [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5360223612968931; http://lattes.cnpq.br/8368562378017150
    O surgimento de resistência bacteriana pelo uso indiscriminado de antibióticos justifica a necessidade do desenvolvimento de novos agentes bioativos. Nesse contexto, os peptídeos antimicrobianos são altamente úteis para o gerenciamento de cepas microbianas resistentes. Neste estudo, relatamos o isolamento e a caracterização de peptídeos obtidos do veneno do peixe-sapo Thalassophryne nattereri. Esses peptídeos foram ativos contra bactérias Gram-positivas,Gram-negativas e fungos. As sequências de aminoácidos primários mostraram semelhança com os peptídeos de transcrição regulada por cocaína e anfetamina (CART), e dois análogos de peptídeo - Tn CRT2 e Tn CRT3 - foram projetados usando o algoritmo AMPA baseado nessas sequências. Os análogos foram submetidos a ensaios antimicrobianos e foram biologicamente ativos em concentrações variando de 2,1 a 13 µM. A toxicidade de Tn CRT2 e Tn CRT3 foi analisada in vitro usando um ensaio hemolítico e redução de sal de tetrazólio em fibroblastos e foi considerada significativa apenas em altas concentrações (até 40 µM). Os testes de infecção in vivo demonstraram a eficácia dos peptídeos para inibição da infecção causada por E. coli e P. aeruginosa. Nossos dados sugerem que a abordagem metodológica é eficiente para projetar candidatos para estudos posteriores sobre o desenvolvimento de novos antibióticos peptídicos que poderiam ajudar a combater infecções bacterianas e também representa uma descoberta nova e interessante para os venenos de peixes.