Navegando por Palavras-chave "Hepatite viral humana"

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    Acesso aberto (Open Access)
    Desenvolvimento de técnica molecular para avaliação da carga viral do HGV/GBV-C em pacientes co-infectados pelo HIV-1
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008-01-30) Alves, Viviane Kelly [UNIFESP]; Granato, Celso Francisco Hernandes [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introduction: The HGV/GBV-C infection is frequent in humans and could last for years without evident clinical symptoms. HGV/GBV-C is a member of the Flaviviridae family strongly associated with the hepatitis C virus and composed by a single positive RNA strain. Recent studies suggest that HGV/GBV-C infection in HIV seropositive patients is associated with a delayed progression to AIDS, lower HIV viral load and a higher CD4 T-cell count, however, some studies failed to demonstrate such beneficial effects in these patients. Objectives: The aim of this study was to standardize a real time PCR to estimate the prevalence and HGV/GBV-C viral load among the HIV seropositive patients, comparing HIV monoinfected and co-infected in terms of T CD4 cell count and HIV viral load. Methods: To achieve this purpose, the 5’UTR genomic region of HGV/GBV-C was selected. A molecular cloning was needed in order to obtain a recombinant plasmid and a high production of this plasmid through a bacterial cloning in DH10B strain. The recombinant plasmid was linearized and submitted to in vitro transcription to obtain and to quantify synthetic RNA to construct the absolute quantification curve of the real time PCR system. The patient samples were submitted to the assay and the results were compared to the standard curve in order to obtain the HGV/GBV-C viral load. Results: A serial dilution of the synthetic RNA in factor 10 produced a quantification curve with 9 orders of magnitude, varying from 102 to 1010 genome equivalent/ìL. To the assay, the inclination of the straight line was -3.56, the intercept was 45.56, the Pearson correlation coefficient was r2=0.99 and the efficiency of the reaction was of 90.9%. The reproducibility of the assay was evaluated based on a quadruplicate reaction of the quantification curve with a mean coefficient of variation of 1.2%. 102 patients were included in the study, mean age of 42±9 years and 57.8% of them were man. From the total cohort, 21% were positive to HGV/GBV-C RNA in the plasma, with a mean viral load of 300.455 copies/mL and 26.4% were positive to anti-E2 antibodies. There were no statistical significance in regard to the CD4 T-cell count and HIV viral load when comparing HIV monoinfected patients with that co-infected with HGV/GBV-C (p=0,297)and a weak negative correlation was observed between HIV and HGV/GBV-C viral loads (Spearman’s= -0,237). Conclusions: The standardization of the real time PCR could be done and is in agreement with other published studies. According to the literature data, there is a high prevalence of the HGV/GBV-C infection among HIV seropositive patients. The weak negative correlation between HIV and HGV/GBV-C viral load is in agreement with previous publications, suggesting a beneficial effect regarding to AIDS progression, however, other factors can be associated and future studies are needed to better understand this viral interaction.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Determinação do perfil lipidômico de soro humano para rastreamentode potenciais biomarcadores de carcinoma hepatocelular associado às hepatites virais
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-08-27) Passos-Castilho, Ana Maria [UNIFESP]; Granato, Celso Francisco Hernandes [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7880516839350591; http://lattes.cnpq.br/0777557108092703; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introdução: A lipidômica é a ciência que visa identificar e quantificar o perfil global ou parcial de lipídios presentes em um sistema biológico em um determinado tempo. O carcinoma hepatocelular é o sexto câncer mais comum em todo o mundo e as hepatites crônicas B e C representam a sua principal causa. Biomarcadores para o diagnóstico do carcinoma hepatocelular ainda são escassos. Objetivos: Avaliar a aplicabilidade da lipidômica como ferramenta para rastreamento de biomarcadores de carcinoma hepatocelular, desenvolver e padronizar um método de lipidômica eficaz para detecção global e quantificação relativa de lipídios em amostras de sangue periférico humano, e determinar o perfil lipidômico de soro humano no carcinoma hepatocelular associado às hepatites virais B e C para rastrear biomarcadores com potencial diagnóstico. Métodos: Primeiramente realizou-se um estudo piloto em que o perfil lipidômico de 25 pacientes com carcinoma hepatocelular associado à hepatite C obtido por espectrometria de massas por dessorção/ionização a laser assistida por matriz foi comparado ao de 15 pacientes com cirrose hepática e 25 pacientes com hepatite crônica. Em seguida, desenvolveu-se e padronizou-se um método de lipidômica utilizando cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas por ionização por spray de elétrons. A seguir, realizou-se um estudo de aplicação do método padronizado com pacientes com hepatite B crônica em que foram incluídos 32 pacientes com carcinoma hepatocelular, 30 com cirrose hepática, 25 com hepatite B crônica e 34 controles saudáveis. Por fim, realizou-se um estudo de aplicação do método padronizado em pacientes com hepatite C crônica, com 56 pacientes com carcinoma hepatocelular, 59 com cirrose hepática, 62 com hepatite C xx crônica e 58 controles saudáveis. Candidatos a potenciais biomarcadores foram selecionados por análise estatística e curvas de característica de operação do receptor foram geradas para comparar a acurácia dos biomarcadores selecionados e níveis de alfafetoproteína no diagnóstico do carcinoma hepatocelular. As bases The Human Metabolome Database e The LIPID MAPS Lipidomics Gateway foram pesquisadas para a identificação dos candidatos por meio de sua relação massa/carga. Resultados: O estudo-piloto inicial resultou em um algoritmo de 7 picos que foi capaz de distinguir carcinoma hepatocelular de cirrose hepática com sensibilidade de 96% e especificidade de 87%. Em seguida, o método desenvolvido de cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas por ionização por spray de elétrons apresentou boa performance na separação de diferentes grupos estudados e na detecção de diferentes espécies de lipídios de várias ordens de grandeza. A seguir, o perfil lipidômico distinguiu os pacientes com câncer e forneceu um diagnóstico mais preciso para os pacientes com cirrose hepática que a detecção convencional de alfafetoproteína. Foi possível distinguir carcinoma hepatocelular associado à hepatite B com sensibilidade de 78% e especificidade de 64%. Por fim, pôde-se distinguir carcinoma hepatocelular associado à hepatite C de cirrose hepática com 100% de sensibilidade e especificidade utilizando 13 candidatos, incluindo a PC(32:1). Conclusões: O presente estudo confirmou a possibilidade de aplicação de um método lipidômico por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas para a distinção entre carcinoma hepatocelular e cirrose hepática e identificou a PC(32:1) como um potencial novo biomarcador eficaz para a detecção precoce do carcinoma hepatocelular associado à hepatite C crônica.
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    Acesso aberto (Open Access)
    O Impacto dos Vírus Hepatotrópicos no Paciente Infectado pelo HIV e o papel da elastometria transitória
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-02-24) Tuma, Paula [UNIFESP]; Diaz, Ricardo Sobhie [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A doença hepática foi um evento negligenciado no paciente infectado pelo HIV por muitos anos, principalmente em virtude da alta mortalidade por doenças oportunistas relacionadas á síndrome da imunodeficiência adquirida (aids). Com o advento da terapia antirretroviral de grande atividade (HAART), a mortalidade relacionada às doenças oportunistas caiu substancialmente e a mortalidade por doenças hepáticas emergiu como uma das principais causas de morte não relacionadas à aids. Desde o reconhecimento de seu impacto na morbidade, muitas modificações vêm ocorrendo. Atualmente, os antirretrovirais disponíveis são menos hepatotóxicos, há um melhor entendimento e busca de aperfeiçoamento no tratamento das hepatites virais, novas tecnologias estão disponíveis para seguimento e diagnóstico da doença hepática, bem como novas formas de avaliar a gravidade desses pacientes. Portanto, avaliar o paciente infectado pelo HIV nesse novo “ambiente” se faz necessário. A presente série de estudos revisa tópicos relacionados á doença hepática em pacientes infectados pelo HIV na atualidade. Primeiramente, comparam-se duas novas técnicas diagnósticas para determinação do grau da fibrose hepática: o Impulso Potente por Radiação Acústica comparado a Elastometria Transitória. Demonstra-se boa correlação diagnóstica entre as duas técnicas e utilizando a elastometria transitória, acessamos a incidência de cirrose em pacientes HIV positivos independente da etiologia. Não surpreendentemente, demonstra-se que atualmente os pacientes que atingem o estádio de cirrose hepática são portadores de hepatite C que não receberam tratamento para essa última ou não atingiram a cura quando tratados. Por último, avaliamos a mortalidade entre pacientes cirróticos infectados pelo HIV. Observa-se uma taxa de mortalidade relativamente elevada quando se compara com dados recentes de literatura que avaliam a mortalidade geral em pacientes HIV positivos. Interessantemente, os fatores associados a uma maior mortalidade foram CD4<200, HIV-RNA>50 cópias/mL, grau de fibrose hepática avaliado por elastometria transitória e o MELD. Sendo assim, nota-se que as inovações apresentadas no campo da coinfecção vêm beneficiando de forma importante os pacientes infectados pelo HIV. Contudo, a mortalidade entre pacientes que possuem cirrose estabelecida segue alta e novos caminhos para acessar a gravidade na cirrose hepática devem ser mais explorados no paciente infectado pelo HIV.