Navegando por Palavras-chave "Nanopartículas superparamagnéticas"

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    Terapia celular e regeneração endotelial induzida farmacologicamente: estratégias para otimizar o uso de córneas doadas
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-12-29) Silva, Francisco Bandeira e [UNIFESP]; Gomes, José Álvaro Pereira [UNIFESP]; Casaroli-Marano, Ricardo Pedro; http://lattes.cnpq.br/2506247984223015; http://lattes.cnpq.br/6707528583430765; http://lattes.cnpq.br/5859139495415976
    Objetivos: Esta tese de doutorado teve como objetivo explorar os efeitos dos inibidores da Rho-quinase (iROCK) em células endoteliais primárias da córnea humana (CECH) e sua aplicação potencial em doenças endoteliais da córnea. Os objetivos específicos foram: (1) avaliar inibidores da Rho-quinase alternativos com melhor acessibilidade, mantendo ou superando a eficácia e segurança das moléculas já investigadas (Y27632 e ripasudil) para uso em cultura endotelial e aplicação clínica na regeneração autóloga do endotélio disfuncional; (2) investigar a capacidade de crescimento e funcionalidade CECH expandidas de córneas de doadores mais velhos que 60 anos, usando cultura organotípica; e (3) estabelecer um procedimento de cultura padronizado para CECH a serem usadas em terapia de injeção celular com um novo método de adesão e rastreamento celular. Métodos: 1. Simulação de ligação in sílico: Várias classes de inibidores ROCK foram comparadas a ROCK-I e ROCK-II para determinar sua força de ligação; Avaliação dos inibidores ROCK em CECH primárias: nove inibidores ROCK foram avaliados quanto a seus efeitos na proliferação celular e aderência in vitro usando CECs primárias; Modelo ex vivo de fechamento de feridas corneanas: O impacto do AR-13324 no fechamento de feridas corneanas foi avaliado, usando um modelo ex vivo e análises comparativas foram realizadas, usando o Y-27632 como controle; 2. Capacidade de crescimento e funcionalidade de CECH de doadores > 60 anos: CECH foram expandidas a partir de córneas de doadores idosos, usando cultura organotípica e várias análises foram realizadas, incluindo avaliação morfométrica; 3. Procedimento de cultura padronizado para CECH: dois métodos de adesão (gravitacional e magnético) foram comparados para a terapia celular em um modelo ex vivo com córneas humanas e com injeção de CECH em coelhos; imunocitoquímica e medição da resistência elétrica transendotelial (RETE). Resultados: 1. Simulação in silico: A maioria dos inibidores ROCK avaliados apresentou maior força de ligação do que Y-27632; Avaliação dos inibidores ROCK em CECH primárias: AR-13324 e seu metabólito ativo, AR-13503, apresentaram melhor aderência celular e taxas de proliferação em comparação com Y-27632; Modelo ex vivo de fechamento de feridas corneanas: AR-13324 mostrou taxas comparáveis de cicatrização de feridas ao Y-27632, sugerindo seu potencial como candidato terapêutico; 2. Capacidade de crescimento e funcionalidade de CECH de doadores > 60 anos: Culturas funcionais de CECH foram obtidas com sucesso a partir de córneas de doadores idosos usando protocolos simplificados e padronizados; 3. Procedimento de cultura padronizado para CECH: A adesão de CECH com ambos os métodos foi comparável no modelo ex vivo e in vivo, com restauração da transparência das córneas dos animais. Conclusões: Foi demonstrado o potencial de vários inibidores ROCK, particularmente o AR-13324, para as estratégias de terapia celular ou regeneração farmacologicamente induzida no tratamento de doenças endoteliais da córnea. Os resultados sugerem que o AR-13324 poderia servir como um candidato promissor para tratamento regenerativo em doenças endoteliais da córnea. Ademais, também observamos que procedimentos de cultura padronizados oferecem uma abordagem viável para obter culturas funcionais de CECH a partir de córneas de doadores idosos, apresentando uma possível fonte de células para transplantes. Além disso, ambos os métodos de injeção de CECH cultivadas foram capazes de reverter a disfunção endotelial em coelhos. Ademais, esses resultados têm implicações significativas para os campos da oftalmologia, transplante de córnea e medicina regenerativa.