Navegando por Palavras-chave "Neuraminidase"

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    Estrutura e função de trans-sialidase e dos aceptores de ácido siálico do Trypanosoma cruzi e apêndice A
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1995) Schenkman, Sergio [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo [UNIFESP]
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    Acesso aberto (Open Access)
    Estudo molecular dos genes da hemaglutinina e neuraminidase de cepas de vírus influenza A circulantes no período de 2001 a 2013
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-07-28) Perosa, Ana Helena [UNIFESP]; Bellei, Nancy Cristina Junqueira [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1571196803842272; http://lattes.cnpq.br/5048403340040739; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introdução: O vírus influenza A é responsável por epidemias anuais e pandemias, associadas a níveis variados de morbidade e mortalidade. As glicoproteínas de superfície, hemaglutinina (HA) e neuraminidase (NA), desempenham papel importante na infecção e disseminação da doença e apresentam altas taxas de mutações, por serem o principal alvo da resposta imune humoral e o sítio de atuação das drogas mais utilizadas para tratamento de influenza. Objetivos: Caracterizar por métodos moleculares a HA e NA das cepas de influenza A que circularam durante a pandemia e nos períodos pré e pós-pandêmico e avaliar a presença de mutações em diferentes grupos de pacientes atendidos em um hospital terciário de São Paulo. Material e Métodos: Realizamos um estudo transversal com 2992 amostras respiratórias coletadas entre Junho de 2001 e Outubro de 2013 de adultos e crianças com diferentes co-morbidades, atendidos em diversas unidades de assistência à saúde do Complexo Hospital São Paulo/UNIFESP. Foi realizado RT-PCR em tempo real para detecção de influenza A, utilizando o protocolo do CDC para H1N1pdm09. As amostras positivas foram submetidas a um RT-PCR em tempo real com primers específicos para a subtipagem da HA, e posteriormente a RT-PCRs convencionais para amplificação e sequenciamento dos genes completos da HA e NA pelo método de Sanger. Foram construídas as árvores filogenéticas para cada gene de cada subtipo. Resultados: A positividade geral para influenza A foi 15,4% (462/2992), sendo 15,8% (176/1111) no período pré-pandêmico, 20,9% (184/879) durante a pandemia e 10,2% (102/1002) no período pós-pandêmico; a frequencia anual de influenza variou de 4 a 34% e foi mais alta em crianças (17,5% vs 14,2% - p<0,05). Antes da pandemia de 2009, o H1N1 sazonal e o H3N2 co-circularam, variando sua prevalência em cada temporada. O H1N1 sazonal foi o subtipo mais frequente em 2001 e 2008; a partir de 2008, apresentaram as mutações permissivas e em 2009, 100% das amostras possuíam a mutação H275Y. O H3N2 apresentou variações genéticas nas 12 temporadas analisadas, muitas vezes precedendo a cepa vacinal em 1-2 anos. As substituições D222G/N na HA do H1N1pdm09 foi identificada em apenas 2 pacientes. A mutação H275Y na NA, associada à resistência ao oseltamivir, foi identificada em uma amostra de H1N1pdm09, coletada em 2012 de um transplantado renal que veio a vii óbito mesmo após tratamento de 21 dias com oseltamivir e foi considerado o provável caso índice de um surto de H1N1pdm09 na unidade de transplante renal. Os outros pacientes deste surto não apresentaram a mutação de resistência, mas todos tinham as mutações permissivas V241I e N369K, presentes em todas as cepas de H1N1pdm09 a partir de 2012. Conclusões: Variações nos sítios antigênicos da HA são frequentes nos três subtipos de influenza A. O H1N1pdm09 com mutações permissivas na NA predominam desde 2012, o que poderia contribuir para a emergência de cepas resistentes com alto potencial de transmissibilidade nos humanos.
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    Isolamento e caracterização de genes II da superfamília gp85/sialidases expressos nas formas amastigotas de Trypanosoma cruzi
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Verbisck, Newton Valério [UNIFESP]; Franco da Silveira, José [UNIFESP]
    O Trypanosoma cruzi e o protozoario flagelado causador da Doenca de Chagas ou tripanosomiase americana, que atinge milhoes de pessoas na America Latina. Esse microorganismo apresenta um ciclo de vida complexo e o estagio evolutivo amastigota e a forma de replicacao do parasita encontrada no hospedeiro mamifero. Os amastigotas se caracterizam pela presenca cie um flagelo curto e forma oval, e sao fundamentais para a persistencia da infeccao pelo T. cruzi no hospedeiro vertebrado. Pouco se sabe sobre a constituicao bioquimica das formas amastigotas, tendo sido poucos os genes isolados e caracterizados ate o presente. No entanto sabe-se que a superfamilia genica das gp85/sialidases, que codificam para antigenos de superficie com papel importante na adesao e invasao do parasita, possui membros que sao expressos tambem nas formas amastigotas do T. cruzi. No presente trabalho e feita a caracterizacao de cDNAs de formas amastigotas intracelulares da cepa Sylvio (clone X10/4) do Trypanosoma cruzi. Esses cDNAs foram denominados TcSx e foram isolados com sonda de um gene que codifica uma glicoproteina de superficie de 85 kilodaltons das formas tripomastigotas do parasita, descrito anteriormente na literatura. Os dados mostram que o gene TcSx23 e seus similares (TcSx2, TcSx7, TcSxl8, TcSx19 e TcSx32) constituem novos genes que podem ser inseridos na familia 11 das gp85/sialidases. A analise das sequencias de nucleotideos e de aminoacidos revela diferencas significativas entre TcSx23 e as proteinas SA85 -1, ASP-1 e ASP-2 que sao expressas nas formas amastigotas. O gene TcSx23 e transcrito e traduzido nas formas tripomastigotas e amastigotas gerando peptideos de -80 e 50 kDa e anticorpos anti-TcSx23 mostram que a localizacao celular dos epitopos reconhecidos por esses anticorpos difere nas duas formas do parasita, sendo de superficie em tripomastigotas e intracelular nos amastigotas. Alguns motivos peptidicos presentes em membros da familia 11 das gp85/sialidases e que desempenham papel de adesinas, por exemplo Tc85 e gp82, estao ausentes em TcSx23. E possivel que o polipeptideo TcSx23 e...(au)
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    Organizacao dos genes que codificam a trans-sialidase do Trypanosoma cruzi
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1995) Egima, Claudia Massako [UNIFESP]
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    Papel da resposta imune a Trans-sialidade na infeccao por Trypanosoma cruzi
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998) Pereira-Chioccola, Vera Lucia [UNIFESP]
    O primeiro objetivo deste trabalho foi o de determinar as propriedades imunogenicas de uma proteina recombinante que contem o dominio catalitico da trans-sialidase (TS) de Trypanosoma cruzi. Observou-se que a imunizacao com esta proteina recombinante induziu a formacao de anticorpos capazes de inibir a atividade enzimatica da TS e de linfocitos T especificos. Camundongos A/Sn imunizados com a TS apresentaram uma reducao significativa na parasitemia e na mortalidade causada pela infeccao aguda por tripomastigotas. Esta imunidade conferida pela imunizacao com a TS foi revertida pelo tratamento dos animais com anticorpos anti-CD4 ou com inibidores da producao de oxido nitrico, sugerindo a participacao destes no controle da parasitemia e mortalidade. A reducao na parasitemia parece nao ser dependente da presenca de anticorpos inibidores da atividade enzimatica pois animais imunizados com a enzima desnaturada, nao produzem estes anticorpos e mesmo assim apresentam significativa reducao na parasitemia. A transferencia passiva de anticorpos de animais imunizados com a enzima integra tambem nao reduz a parasitemia, entretanto retarda a mortalidade indicando um papel para os anticorpos especificos na fase tardia da infeccao aguda. Na segunda parte deste trabalho estudou-se o papel protetor do acido sialico da superficie dos tripomastigotas contra a acao de anticorpos liticos chagasicos especificos paras residuos a-Gai (Ch-anti-a-Gai). Observou-se que parasitas sem acido sialico sao extremamente suscetiveis a acao litica dos anticorpos Ch-anti-a-Gal quando comparados aos tripomastigotas que contem acido siaiico na superficie. Esta protecao, causada pelo acido siaiico, e dependente da carga negativa exercida por este, pois a adicao de ions Mg 2+ favorece a acao dos anticorpos Ch-anti-a-Gal. O efeito protetor do acido siaiico na superficie dos tripomastigotas pode, eventualmente, ser generalizado na acao de outros ligantes e conferir uma vantagem para a sobrevivencia dos parasitas, principalmente nos momentos iniciais da infeccao. No soro de individuos com doenca de Chagas ha anticorpos Ch-anti-a-Gai e anticorpos que inibem a atividade TS. Neste caso, foi demonstrado que a inibicao da adicao de acido sialico por anticorpos anti-TS favorecem o efeito aglutinante e citotoxico dos anticorpos Ch-anti-a-Gal
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    Acesso aberto (Open Access)
    Papel de miRNAs na regulação da expressão do complexo multienzimático lisossômico
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-04-28) Queiroz, Matheus Trovão de [UNIFESP]; D'Almeida, Vania [UNIFESP]; Pereira, Vanessa Gonçalves [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4126672233843478; http://lattes.cnpq.br/7220411418339421; http://lattes.cnpq.br/2833936812464737; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Mucopolysaccharidosis type I (MPS I) is a genetic disease in which there is a deficiency in the expression of the lysosomal enzyme α-L-iduronidase (IDUA gene), which culminates in a generalized lysosomal disturbance. Thus, in addition to the storage of direct substrates of α-L-iduronidase, it is observed the involvement of secondary pathways such as the increase of simple gangliosides levels in the central nervous system, implicated in the neurodegenerative process observed in this disease. Recent studies have shown that Neu1 gene (neuraminidase 1 enzyme), a member of the lysosomal multienzyme complex (CML) involved in ganglioside metabolism, is significantly reduced in the cerebellum and hippocampus of the murine MPS I model. Recently, alterations in the levels of three miRNAs from miR-17 family were reported, which only miR-20b-5p presents as predicted direct targets Neu1 and Ctsa genes, the latter encoding cathepsin A enzyme, another important member of CML. Aiming the functional characterization of miR-20b-5p, the involvement of this miRNA with the regulation of neuraminidase 1 expression and the observed effects on gene and protein expression of CML members in a context of miR-20b- 5p overexpression in cell culture were evaluated. It was observed miR-20b- 5p is not involved with the regulation of Neu1 expression by its 3' untranslated region. In addition, obtained data suggest that this miRNA is involved in fine tuning RNAm levels of the CLM members, but it has no implications for the level of protein expression. Thus, these results suggest the existence of a complex genetic regulation circuit of CML and that miR-20b-5p may represent an important piece in this context.