Navegando por Palavras-chave "PI3K/AKT"

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    Acesso aberto (Open Access)
    ABI3, a component of the WAVE2 complex, is potentially regulated by PI3K/AKT pathway
    (Impact Journals Llc, 2017) Moraes, Lais [UNIFESP]; Zanchin, Nilson I. T.; Cerutti, Janete M. [UNIFESP]
    We previously reported that ABI3 expression is lost in follicular thyroid carcinomas and its restoration significantly inhibited cell growth, invasiveness, migration, and reduced tumor growth in vivo. The mechanistic basis by which ABI3 exerts its tumor suppressive effects is not fully understood. In this study, we show that ABI3 is a phosphoprotein. Using proteomic array analysis, we showed that ABI3 modulated distinct cancer-related pathways in thyroid cancer cells. The KEA analysis found that PI3K substrates were enriched and forced expression of ABI3 markedly decreased the phosphorylation of AKT and the downstream-targeted protein pGSK3 beta. We next used immunoprecipitation combined with mass spectrometry to identify ABI3-interacting proteins that may be involved in modulating/integrating signaling pathways. We identified 37 ABI3 partners, including several components of the canonical WAVE regulatory complex (WRC) such as WAVE2/CYF1P1/NAP1, suggesting that ABI3 function might be regulated through WRC. Both, pharmacological inhibition of the PI3K/AKT pathway and mutation at residue S342 of ABI3, which is predicted to be phosphorylated by AKT, provided evidences that the non-phosphorylated form of ABI3 is preferentially present in the WRC protein complex. Collectively, our findings suggest that ABI3 might be a downstream mediator of the PI3K/AKT pathway that might disrupt WRC via ABI3 phosphorylation.
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    Intracellular signaling pathways involved in the relaxin-induced proliferation of rat Sertoli cells
    (Elsevier B.V., 2012-09-15) Nascimento, Aline Rosa [UNIFESP]; Pimenta, Maristela Taliari [UNIFESP]; Lucas, Thais Fabiana Gameiro [UNIFESP]; Royer, Carine [UNIFESP]; Porto, Catarina Segreti [UNIFESP]; Lazari, Maria de Fatima Magalhaes [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Regulation of Sertoli cell number is a key event to determine normal spermatogenesis. We have previously shown that relaxin and its G-protein coupled receptor RXFP1 are expressed in rat Sertoli cells, and that relaxin stimulates Sertoli cell proliferation. This study examined the mechanisms underlying the mitogenic effect of relaxin in a primary culture of Sertoli cells removed from testes of immature rats. Stimulation with exogenous relaxin increased Sertoli cell number and the expression of the proliferating cell nuclear antigen (PCNA), but did not affect them RNA level of the differentiation markers cadherins 1 and 2. Relaxin-induced Sertoli cell proliferation was blocked by inhibition of MEK/ERK1/2 or PI3K/AKT pathways, but not by inhibition of PKC or EGFR activity. Relaxin induced a rapid and transient activation of ERK1/2 phosphorylation, which was MEK and SRC-dependent, and involved upstream activation of G(i). AKT activation could be detected 5 min after relaxin stimulation, and was still detected after 24 h of stimulation with relaxin. Relaxin-induced AKT phosphorylation was G(i)- but not PKA-dependent, and it was blocked by both PI3K and MEK inhibitors. in conclusion, the mitogenic effect of relaxin in Sertoli cell involves coupling to G(i) and activation of both MEK/ERK1/2 and PI3K/AKT pathways. (c) 2012 Elsevier B.V. All rights reserved.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Papel do Sindecam-4 na sinalização de células endoteliais resistentes ao anoikis
    (Universidade Federal de São Paulo, 2023-04-19) Machado, Ranyelison Silva [UNIFESP]; Lopes, Carla Cristina [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6280504619546509; http://lattes.cnpq.br/1207583472762150
    A morte celular programada por falta de adesão da célula à matriz extracelular é denominada anoikis. Muitas células tumorais são resistentes ao anoikis, o que facilita a invasão dessas células em outros tecidos, assim favorecendo a metástase tumoral. Dados anteriores do nosso laboratório demonstraram que células endoteliais resistentes ao anoikis apresentam alterações morfológicas, alta taxa de proliferação, baixa adesão à fibronectina, laminina e colágeno IV, desregulação do ciclo celular, além de elevado potencial invasivo, baixa taxa de apoptose, aumento na expressão de sindecam-4 e aumento na expressão de PI3K, ERK e H-Ras. Foi demonstrado que o silenciamento gênico do sindecam-4 reverteu o comportamento tumoral das células endoteliais resistentes ao anoikis, diminuindo a capacidade proliferativa, invasiva e angiogênica e aumentando a adesão celular. Esses processos celulares são mediados por vias de sinalização, onde as células estão constantemente enviando e recebendo sinais ao seu redor. Embora alguns estudos tenham demonstrado o papel do sindecam-4 na regulação desses processos biológicos, poucos definiram o papel específico dessa macromolécula na sinalização celular. O objetivo desse trabalho é estudar a expressão das proteínas envolvidas nas vias de sinalização PI3K/AKT e Ras/ERK em células endoteliais da aorta de coelho resistentes ao anoikis, buscando um melhor entendimento do papel do sindecam-4 na regulação da sinalização celular. Para isso, estudamos comparativamente células endoteliais de aorta de coelho (EC), EC transfectadas com oncogene EJ-ras (EJ-ras-EC), células endoteliais de aorta de coelho resistente ao anoikis (Adh-EC) e células endoteliais resistentes ao anoikis (Adh1-EC) que foram transfectadas com micro RNA de interferência para o sindecam-4 (miR-Syn-4-1-Adh1-EC e miR-Syn-4-2-Adh1-EC). Para o estudo da expressão gênica foi realizada a técnica de qPCR em tempo real (RT-qPCR) e para a expressão proteica foi realizado o ensaio de Western Blotting. A determinação da localização dessas proteínas foi realizada utilizando a técnica de imunofluorescência. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente utilizando o programa GraphPad Prism 6, com valor de significância p<0,05. Os resultados demonstraram que as linhagens silenciadas miR-Syn-4-1-Adh-EC e mir-Syn-4-2-Adh-EC apresentaram diminuição na expressão gênica de PI3K, PTEN, AKT, mTOR, H-Ras e ERK em relação às células anoikis resistentes (Adh1-EC). O silenciamento do sindecam-4 levou a uma diminuição na expressão proteica de PI3K total, PI3K (p85), AKT total, mTOR total, H-Ras e p 44/42 MAPK (ERK1/2). E as proteínas PTEN e PI3K (p110α) tiveram aumento na sua expressão nas linhagens silenciadas do estudo. Nas imagens obtidas pela técnica de imunofluorescência foi possível observar uma diminuição da expressão proteica de PI3K, mTOR, H-Ras e ERK nas linhagens miR-Syn-4-1-Adh-EC e miR-Syn-4-2-Adh-EC em relação a Adh1-EC, corroborando com os dados obtidos nos ensaios de Western Blotting. Assim, este estudo revelou que regulação negativa da expressão de SDC4 induziu a modulação das vias PI3K/AKT e Ras/ERK, promovendo a reversão do fenótipo alterado das células resistentes ao anoikis, levando-as a características semelhantes as células EC selvagens. Este estudo identificou o sindecam-4 como um regulador importante da sinalização celular em células resistentes ao anoikis e sugere que sua regulação negativa pode ser uma estratégia promissora para o tratamento do câncer.