Navegando por Palavras-chave "Polimorfismo Conformacional de Fita Simples"

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    Analise molecular de genes de falencia ovariana prematura mapeados nos segmentos cromossomicos FOP1 e FOP2
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Hassun Filho, Pericles Assad [UNIFESP]
    RESUMO ARTIGO 1 - Fertilidade em mulheres e o resultado de uma serie de eventos moleculares complexos que se iniciam na vida intrauterina com a diferenciacao ovariana e a formacao dos foliculos primordiais e continua depois do nascimento por um processo altamente coordenado e sincronizado. A falencia ovariana pode se manifestar como amenorreia primaria ou secundaria caracterizada por elevados niveis de gonadotrofinas antes dos 40 anos de idade, cuja etiologia pode ser atribuida a varias causas, incluindo rearranjos do cromossomo Xq. Mutacoes no gene homologo humano do gene da Drosophila melanogaster diaphanous (DIAPH2), mapeado em Xq22, foram relacionados com falencia ovariana prematura (FOP) familiar. Alelos mutados deste gene afetam a espermatogenese e a ovogenese na Drosophila. Com o objetivo de investigar se o gene DIA humano tem papel definitivo na etiologia da FOP pesquisou-se por mutacoes no ultimo exon (l56) usando as tecnicas de SSCP (Polimorfismo conformacional em fita simples) e sequenciamento automatico do DNA de 27 pacientes com falencia ovariana prematura e 15 controles. RNA total foi extraido de celulas sanguineas das amostras. A sintese de cDNA foi feita por meio da reacao de transcricao reversa partindo-se do RNA mensageiro. Para amplificar o exon 156 do gene DIA, a estrategia do Nested-PCR' foi empregada para posterior analise de mutacao atraves do SSCP e sequenciamento automatico do DNA. Nenhuma mutacao foi encontrada no exon 156 do gene DIA nas amostras analisadas. Portanto, mutacoes nesse exon nao parecem ser causa comum da disfuncao ovariana. RESUMO ARTIGO 2 - Estudos citogeneticos do cromossomo X sugerem que principalmente o segmento Xql3 a Xq28 esteja envolvido na falencia ovariana prematura (FOP). Falencia ovariana prematura e uma sindrome heterogenia cuja origem permanece obscura na maioria dos casos. Varios genes, que estao envolvidos no desenvolvimento ovariano podem estar presentes nesta regiao e apresentar-se mutados. O gene QM que sintetiza a proteina ribossomal L10 (RPL10), mapeado na regiao Xq28, pertence a uma classe de proteinas regulatorias de transcricao. Este gene e altamente conservado atraves da evolucao dos eucariotos, sendo expresso em diversos tecidos. A RPL10 pode estar envolvida nos processos pos transcricionais que sao essenciais para a diferenciacao de tecidos especificos durante a embriogenese. A sua localizacao, expressao e funcoes levam a suposicao que o gene QM...(au)
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    Identificacao de polimorfismos de nucleotideos unicos (SNPS) no gene heat shock protein 90 (HSP90) em pacientes com azoospermia e oligozoospermias graves
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Yamamoto, Lidia [UNIFESP]
    A infertilidade masculina tem sido o objetivo de muitas pesquisas na area de reproducao humana, ja que na infertilidade conjugal, o homem e apontado como responsavel unico em 30 a 50 por cento dos casos. Alguns genes sao expressos exclusivamente em celulas espermatogenicas, enquanto outros sao expressos em ambas, somaticas e espermatogenicas. Dentre estes, o gene das Heat Shock Proteins (HSP), altamente conservadas desde bacteria ate ser humano. As HSPs 70 e 90, sao expressas em celulas germinativas, Sertoli e Leydig durante o periodo neonatal, em espermatocitos e espermatides redondas apos a puberdade; alem da expressao da HSP90 em espermatogonias. A expressao inadequada destes genes podem resultar em uma espermatogenese anormal. Funcionalmente, as HSP90, estao relacionadas aos receptores de esteroides e a varios tipos de proteinas tanto nucleares quanto citoplasmaticas formamdo complexos que auxiliam na resposta celular. A HSP90 esta envolvida com a motilidade espermatica, atraves da ativacao da oxido nitrico sintetase (NOS), estresse oxidativo e com o metabolismo de ATP, como tambem na espermatogenese. Para investigar se mutacoes no gene HSP90 estao associadas com a infertilidade masculina pesquisou-se a presenca de polimorfismos de nucleotideos unicos (SNPs) na sua regiao codificadora atraves da tecnica de SSCP (Polimorfismo conformacional de fita simples) e sequenciamento de DNA em 29 pacientes com azoospermias nao obstrutiva e oligozoospermia graves e 50 homens ferteis controles. DNA foi extraido de leucocitos para posterior amplificacao por PCR. Depois da desnaturacao do produto de PCR, o SSCP foi realizado. Amostras que apresentaram padrao de banda anormal no SSCP foram posteriormente analizadas com o objetivo de encontrar mutacoes, atraves do sequenciamento de DNA. De todas as amostras analisadas, identificou-se uma 3 alteracoes de base, 2 polimorfismos silenciosos e uma mutacao missense Arg552Lis, na regiao codificadora do gene HSP90 em pacientes com azoospermia. Este achado coloca o gene da HSP90 como candidato a infertilidade masculina, porem outros estudos serao necessarios para confirmar essa hipotese