Navegando por Palavras-chave "Polimorfismo de Nucleotídeo Único"
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- ItemSomente MetadadadosAnalise de polimorfismos de nucleotideo unico (SNP) no receptor de estrogenio alfa em pacientes com leiomioma uterino(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Villanova, Fabiola Elizabeth [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosAnalise do polimorfismo C>514T do gene da lipase hepatica em mulheres sob reposicao estrogenica(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Pulchinelli Junior, Alvaro [UNIFESP]A lipase hepatica (HL) e uma enzima presente nos sinusoides hepaticos,responsavel pela lipolise de lipoproteinas. Contem quatro sitios polimorficos: G-250A, T-710C, 763G-A, e C-514T single-nucleotide polymorphism (SNPs). O ultimo polimorfismo e o foco do presente estudo. Os genotipos associados com o polimorfismo C-514T sao CC (homozigoto normal - W), CT (heterozigoto - H) e TT (alelo homozigoto menor - M). A atividade da HL e, significativamente, diminuida nos individuos dos genotipos TT e CT. Um total de 58 mulheres pos-menopausas foi estudado. As participantes eram histerectomizadas e submetidas a terapia de reposicao hormonal, consistindo de 0,625 mg de estrogenio equino conjugado, uma vez ao dia. Os criterios de inclusao foram: menopausa de ate ha tres anos, resultados de exames de sangue, radiografias, citologia cervico-vaginal e densitometria ossea normais. O DNA foi extraido a partir de celulas da mucosa bucal e de celulas de sangue periferico de todas as pacientes, utilizando-se um conjunto comercialmente disponivel (GFX ® - Amersham-Pharmacia, EUA). Resultados: foram encontradas reducoes estatisticamente significativas nos triglicerides (t = 2,16; n = 58, p = 0,03), mas nao nos niveis de colesterol total (t = 0,14; n = 58, p = 0,89) apos o tratamento. Este grupo de bons respondedores eram portadores do alelo T; os genotipos CT e TT estavam presentes com frequencia significativamente maior do que no grupo de nao respondedores (p = 0,02 ou p = 0,07, respectivamente). No entanto, nenhuma diferenca significativa nos niveis de HDL-C (t = 0,94; n = 58, p = 0,35) ou LDL-C (t = 0,83; n = 58, p = 0,41) foi encontrada nestas pacientes. Conclusoes: as variacoes no perfil lipidico associadas ao polimorfismo C-514T sao significativas e o alelo T e associado a melhor resposta a TRE
- ItemAcesso aberto (Open Access)Associação do fator de crescimento vásculo-endotelial e de polimorfismos do seu gene com a gravidez ectópica(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-03-31) Silva, Marcelo Octavio Fernandes da [UNIFESP]; Elito Junior, Julio [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Objetivo: Analise do fator de crescimento vasculo-endotelial (VEGF) como marcador sorologico no diagnostico da gravidez ectopica. Outrossim, e desiderato deste projeto avaliar se as variantes polimorficas -460 T/C (rs833061), -634 C/G (rs2010963) e +936 C/T (rs3025039) do gene do VEGF podem estar associadas a ocorrencia da gravidez ectopica (GE). Alem disso, procuramos avaliar se os niveis sericos de VEGF estavam correlacionados com o genotipo. Metodo: estudo caso-controle, onde foram selecionadas 35 pacientes com diagnostico de gravidez ectopica, 15 abortamentos e 22 gestacoes intra-uterinas normais. Foram coletados 10 mL de sangue em tubo seco, centrifugados a 2000 rpm e o sobrenadante foi separado em cinco aliquotas de 200 £gL e armazenados a -80 o C, para posterior avaliacao. A dosagem serica do VEGF foi realizada por metodo de ELISA - (human VEGF; R&D systems, Minneapolis). Para a avaliacao dos polimorfismos do gene do VEGF foram incluidas 74 pacientes com historia previa ou em vigencia de GE, em acompanhamento no Ambulatorio de GE da UNIFESP. O grupo controle foi constituido de 134 mulheres na menopausa, com pelo menos duas gestacoes normais, sem abortos ou GE durante a menacme, em seguimento no Ambulatorio de Climaterio da UNIFESP. Foram coletados 10 mL de sangue periferico, retirado buffy-coat, do qual e extraido DNA genomico pela tecnica de DTAB / CTAB. A genotipagem foi realizada digerindo os produtos de PCR com as enzimas de restricao especificas para os polimorfismos do gene de VEGF +936 C/T, -634 C/G e -460 C/T. Os dados foram analisados pelo teste ƒÓ2 ou teste exato de Fisher, sendo considerado significante p<0,05. Resultados: Nos casos estudados a media dos valores sericos do VEGF foi de 297,5 pg/mL na gravidez ectopica, 299,6 pg/mL no abortamento e de 39,9 pg/mL nas gestacoes intra-uterinas normais (p<0,0001). Nao foram identificadas diferencas significantes quanto as frequencias genotipicas e alelicas para os polimorfismos do gene do VEGF +936 C/T (p=0,28), -460 C/T (p=0,70) e -634 G/C (p=0,17). Nao foi identificada relacao entre os valores sericos de VEGF e os genotipos para nenhum dos polimorfismos de VEGF testados. Conclusao: Nossos resultados sugerem que na gravidez ectopica sejam detectados valores sericos mais elevados de VEGF do que na gravidez intra-uterina viável. Por outro lado, quando comparamos os valores de VEGF na gravidez ectópica com os casos de abortamento, não encontramos diferença estatisticamente significante. Não foi identificada associação entre a expressão de polimorfismo +936 C/T, -634 C/G e -460 C/T do gene do VEGF e nem de seus alelos com a ocorrência de gravidez ectópica. Não foi identificada relação entre os níveis séricos de VEGF e os genótipos para nenhum dos polimorfismos de VEGF testados. A produção de VEGF sérico parece não ter correlação com o genótipo.
- ItemSomente MetadadadosAvaliacao de desequilibrios genomicos em rearranjos cromossomicos aparentemente equilibrados(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Mancini, Tatiane Iris [UNIFESP]Os rearranjos aparentemente equilibrados em geral estao associados a fenotipo normal. Entretanto, em alguns casos sao verificadas alteracoes fenotipicas, as quais tem sido atribuidas a diferentes mecanismos patogenicos incluindo ruptura intragenica, delecoes, duplicacoes, efeito de posicao ou podendo ser ainda, uma associacao casual. Objetivo: Investigar pacientes portadores de rearranjos aparentemente equilibrados com fenotipo alterado a fim de identificar desequilibrios genomicos, a funcao dos genes presentes nestes e sua correlacao com o fenotipo dos pacientes. Metodos: Estudo de 12 pacientes com alteracoes cromossomicas previamente identificadas por bandamento G, sendo nove translocacoes de novo, duas inversoes herdadas e um rearranjo complexo de novo. Tecnicas citogeneticas e moleculares, incluindo SNP-array, hibridacao in situ por fluorescencia (FISH) e amplificacao de multiplas sondas dependente de ligacao (MLPA), foram utilizadas para investigar e caracterizar desequilibrios genomicos. Resultados: Em tres dos pacientes estudados, foram identificados desequilibrios genomicos, sob resolucao de 200 kb. O estudo citogenetico e molecular revelou que um dos pacientes, encaminhado como sendo portador de uma translocacao equilibrada, apresentava na realidade uma delecao de 24 Mb no braco longo do cromossomo 4 associada a um isodicentrico de Yp. Em uma paciente com translocacao aparentemente equilibrada, entre os cromossomos 6 e 14, foi revelada uma delecao de 1,1 Mb no braco curto do cromossomo 6. Em outra paciente que apresentava um rearranjo complexo, foram verificadas duas delecoes no braco longo do cromossomo 10, uma delas proxima ao ponto de quebra com tamanho de 1 Mb e uma delecao mais distal, de aproximadamente 7 Mb, provavelmente relacionada ao fenotipo. Dois dos pacientes apresentaram desequilibrios genomicos menores do que 200 kb envolvendo genes que podem estar relacionados ao fenotipo. Conclusoes: As tecnologias moleculares, como os arrays, associadas as tecnicas citogeneticas auxiliam na deteccao de desequilibrios genomicos nao visiveis ao microscopio e no delineamento do papel dos genes envolvidos na variabilidade fenotipica em pacientes com rearranjos aparentemente equilibrados. Alem disso, a caracterizacao molecular das alteracoes encontradas fornece subsidios para um seguimento dos pacientes e para o aconselhamento genetico familiar.
- ItemSomente MetadadadosEstudo da associação genética de polimorfismos nos genes do receptor de angiotensina II tipos 1 (A168G) e 2 (T1247G e A5235G) ao carcinoma mamário em uma amostra da população de mulheres brasileiras.(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Wolgien, Maria Del Carmen Garcia Molina [UNIFESP]; Facina, Gil [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Varios canceres tem sido associados aos polimorfismos do sistema reninaangiotensina (SRA). No nosso estudo, objetivamos avaliar uma possivel associacao entre os polimorfismos nos genes do receptor de Angiotensina II tipo 1 denominado de AGTR1 (A168G) e tipo 2 denominado de AGTR2 (T1247G e A5235G) ao carcinoma mamario. Foram genotipadas 444 mulheres no total (N=234 mulheres do grupo de estudo portadoras de cancer de mama; N= 210 mulheres saudaveis do grupo controle) para a analise da distribuicao genotipica. As participantes tinham entre 26 e 90 anos e nao houve diferenca nos resultados quanto as variaveis menopausa e raca. Foram obtidas as seguintes distribuicoes genotipicas (em %): AGTR1 (A168G) - AA, AG, GG = 63; 23; 14 (grupo de estudo) e 63; 17; 20 (grupo controle) respectivamente (p= 0,29); AGTR2 (T1247G) - TT, TG, GG = 84; 13; 03 (grupo de estudo) e 81; 18; 01 (grupo controle) respectivamente (p = 0,39); AGTR2 (A5235G) - AA, AG, GG = 21; 44; 35 (grupo de estudo) e 20; 27; 53 (grupo controle) respectivamente (p = 0,021*). As portadoras do genotipo AA/AG apresentaram risco de 2,1 vezes maior de desenvolver o cancer de mama em comparacao com as portadoras do GG [O.R.= 2,1 com 95% C.I. (1,19-3,69); p=0,0152*. O genotipo GG pareceu ser protetor contra o cancer de mama. Todos os polimorfismos avaliados estavam condicionados com associacao a variaveis clinicas estudadas, sendo que estes SNPs poderiam estar correlacionados com o prognostico. Alem disso, o estudo do polimorfismo do gene do receptor de Angiotensina II tipo 2 (AGTR2; A5235G) como potencial marcador genetico de risco de cancer de mama deveria ser considerado em populacao de mulheres brasileiras
- ItemSomente MetadadadosIdentificacao de polimorfismos de nucleotideos unicos (SNPS) no gene heat shock protein 90 (HSP90) em pacientes com azoospermia e oligozoospermias graves(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Yamamoto, Lidia [UNIFESP]A infertilidade masculina tem sido o objetivo de muitas pesquisas na area de reproducao humana, ja que na infertilidade conjugal, o homem e apontado como responsavel unico em 30 a 50 por cento dos casos. Alguns genes sao expressos exclusivamente em celulas espermatogenicas, enquanto outros sao expressos em ambas, somaticas e espermatogenicas. Dentre estes, o gene das Heat Shock Proteins (HSP), altamente conservadas desde bacteria ate ser humano. As HSPs 70 e 90, sao expressas em celulas germinativas, Sertoli e Leydig durante o periodo neonatal, em espermatocitos e espermatides redondas apos a puberdade; alem da expressao da HSP90 em espermatogonias. A expressao inadequada destes genes podem resultar em uma espermatogenese anormal. Funcionalmente, as HSP90, estao relacionadas aos receptores de esteroides e a varios tipos de proteinas tanto nucleares quanto citoplasmaticas formamdo complexos que auxiliam na resposta celular. A HSP90 esta envolvida com a motilidade espermatica, atraves da ativacao da oxido nitrico sintetase (NOS), estresse oxidativo e com o metabolismo de ATP, como tambem na espermatogenese. Para investigar se mutacoes no gene HSP90 estao associadas com a infertilidade masculina pesquisou-se a presenca de polimorfismos de nucleotideos unicos (SNPs) na sua regiao codificadora atraves da tecnica de SSCP (Polimorfismo conformacional de fita simples) e sequenciamento de DNA em 29 pacientes com azoospermias nao obstrutiva e oligozoospermia graves e 50 homens ferteis controles. DNA foi extraido de leucocitos para posterior amplificacao por PCR. Depois da desnaturacao do produto de PCR, o SSCP foi realizado. Amostras que apresentaram padrao de banda anormal no SSCP foram posteriormente analizadas com o objetivo de encontrar mutacoes, atraves do sequenciamento de DNA. De todas as amostras analisadas, identificou-se uma 3 alteracoes de base, 2 polimorfismos silenciosos e uma mutacao missense Arg552Lis, na regiao codificadora do gene HSP90 em pacientes com azoospermia. Este achado coloca o gene da HSP90 como candidato a infertilidade masculina, porem outros estudos serao necessarios para confirmar essa hipotese
- ItemSomente MetadadadosPesquisa de mutacoes do gene PINK1 em pacientes com doenca de Parkinson de inicio precoce(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011) Godeiro Junior, Clecio de Oliveira [UNIFESP]
- ItemAcesso aberto (Open Access)Quantificação de blastos por citometria de fluxo no oitavo dia de prednisona e avaliação do perfil de polimorfismos do gene receptor de glicocorticoide NR3C1 em crianças com Leucemia Linfoblástica Aguda(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014) Sousa, Ana Virginia Lopes de [UNIFESP]; Petrilli, Antonio Sérgio [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Objetivos: Avaliar em pacientes com leucemia linfoide aguda (LLA), tratados de acordo com o protocolo do Grupo Cooperativo Brasileiro de Tratamento de Leucemia Linfoide Aguda na Infancia (GBTLI LLA-2009) no oitavo dia da inducao, a reprodutibilidade da contagem de blastos perifericos intra e interobservadores; a concordancia entre citometria de fluxo e morfologia e descrever a distribuicao genotipica dos SNP intron 2 +646C/G e 9βT/C do gene receptor de glicocorticoide NR3C1. Metodos: Foram analisadas prospectivamente, amostras de sangue periferico e/ou medula ossea de 54 pacientes, dos quais 53 foram genotipados para os polimorfismos estudados. Em 31 pacientes, no oitavo dia da inducao, foi realizada a contagem de blastos no SP, em 200 e 100 celulas, com e sem EDTA, por tres observadores fixos, diferentes, com contagens independentes. A imunofenotipagem foi realizada com a tecnica de lise de hemacias e as amostras foram adquiridas e analisadas em citometro de fluxo BD FACSCalibur, com 15.000 eventos totais. Resultados: 59,3% dos pacientes foram do sexo masculino, com idade media de 7,9 anos, leucometria inferior a 50.000/ mm³ em 79,6% e fenotipo LLA comum em 48,1%. Na avaliacao isolada de cada observador, nao houve diferenca na contagem percentual de blastos em 100 ou 200 celulas, com ICC proximo de 1 (p<0,001), independente do anticoagulante. Houve uma concordancia excelente entre as contagens de blastos no SP interobservadores com e sem EDTA, ICC=0,889 (p<0,001) e ICC=0,960 (p<0,001), respectivamente. Nas 27/31(87%) amostras avaliaveis, houve concordancia de 100% entre morfologia e citometria de fluxo quando considerada a categorizacao em maior ou igual a 1.000 ou inferior a 1000 blastos/mm³. Em 4/31(13%) dos pacientes, nao foi possivel essa avaliacao por leucometria inferior a 1.000/mm3 no D8. Observou-se concordancia satisfatoria (rs=0,465; p=0,014) entre morfologia e citometria de fluxo na quantificacao dos blastos. Em 14,8% dos casos ocorreu discordancia entre os metodos; com ausencia de blastos pela CF, e pela morfologia com contagens que variaram de 41 a 925 blastos/mm³. Nos 53 pacientes genotipados para o SNP intron 2 +646C/G, 62,3% apresentaram o genotipo CC, 30,2% CG e 7,5% genotipo GG e, para SNP 9βT/C, 71,7% dos pacientes apresentaram genotipo TT e 28,3% CT. Nao houve associacao entre os perfis genotipicos e sexo, idade, leucometria inicial, linhagem celular e contagem de blastos no D8. Conclusoes: A contagem de linfoblastos, no D8 da inducao, foi altamente reprodutivel entre os diferentes observadores independente da presenca do EDTA; com concordancia satisfatoria entre morfologia e citometria de fluxo na quantificacao dos blastos. Esses dados sugerem a aplicabilidade desse metodo como uma ferramenta livre de subjetividade na avaliacao da contagem de blastos. Em nossa amostra o alelo polimorfico G foi menos prevalente para o SNP intron 2 +646C/G; e o genotipo TT para o SNP 9βT/C foi o mais prevalente, inclusive nos pacientes que apresentaram recaida e obito.