Navegando por Palavras-chave "SH-SY5Y"

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    Estudo da neurotoxicidade de células SHSY-5Y expostas ao expostas à cetamina, ao etanol e à associação de ambas as substâncias por meio da análise de fluorescência após marcação com laranja de acridina e iodeto de propídeo
    (Universidade Federal de São Paulo, 2021-02-08) Almeida, Rafaela Yolanda Silvino de [UNIFESP]; Garcia, Raphael Caio Tamborelli [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7921656182943609
    O consumo de drogas faz parte da história da humanidade, e o uso recreativo dessas substâncias vem crescendo entre adolescentes, que em festas rave e boates consomem as club drugs em busca de ampliação de sentidos. A cetamina, um exemplo dessa classe de droga de abuso, também é utilizada por profissionais de saúde devido à facilidade de obtenção, com objetivo de aliviar a jornada estressante de trabalho. O etanol, bebida presente em muitos contextos por seu uso legal, também registra elevado consumo no Brasil, podendo ser associado com outras drogas, como a cetamina. O uso dessa associação pode levar à danos irreversíveis ao sistema nervoso central, causando neurodegeneração. Assim, esse estudo avaliou a viabilidade de células SH-SY5Y expostas à cetamina, ao etanol e à associação de ambas as substâncias por meio da análise de fluorescência após marcação com laranja de acridina e iodeto de propídeo, utilizando o contador de células automatizado (LUNA). As células foram mantidas em placas de 24 poços (105 células/poço) e incubadas com concentrações variadas de cetamina (0,001; 0,01; 0,1; 1; 2,5; 5; 7,5 e 10 mM) ou etanol (0,1; 1; 10; 100; 250; 500; 750 e 1000 mM), por 24 e 48 horas, para a realização das curvas concentração-resposta (CCR) das substâncias utilizando o ensaio de viabilidade celular de MTT. Cloreto de potássio (250 mM) foi utilizado como controle positivo de morte celular e o meio de cultura como controle negativo. As curvas foram realizadas para se determinar a maior concentração sem efeito tóxico (NOAEL) e a menor concentração em que há efeito tóxico (LOAEL) para cada substância, ou seja, NOAEL do etanol (ETN = 10 mM) e da cetamina (KTN = 0,1 mM), e LOAEL do etanol (ETL = 100 mM) e da cetamina (KTL = 1 mM). Posteriormente, o efeito decorrente da associação das substâncias, após 24h de exposição, foi estudado por meio dos ensaios de MTT, da quantificação da atividade enzimática da lactato desidrogenase (LDH) e da análise de fluorescência após marcação com laranja de acridina e iodeto de propídeo, para os grupos isolados e associados, a saber: KTN+ETN, KTL+ETN, KTN+ETL e KTL+ETL. Os resultados obtidos no ensaio de MTT, mostraram que houve uma diminuição na viabilidade celular após 24 horas de exposição aos grupos: ETL; KTN + ETL; KTL + ETN (p<0,05 para cada grupo) e KTL + ETL (p <0,0001). O mesmo período de exposição não apresentou alterações na atividade da LDH. Os resultados obtidos no LUNA corroboram os do MTT. Por não apresentar variações na atividade da LDH, indicativo de necrose, sugere-se que os mecanismos subjacentes à morte celular induzida por KT, ET e KT + ET parecem envolver apoptose e/ou autofagia.
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    Peptidomic Analysis of Human Cell Lines
    (Amer Chemical Soc, 2011-04-01) Gelman, Julia S.; Sironi, Juan; Castro, Leandro M. [UNIFESP]; Ferro, Emer S.; Fricker, Lloyd D.; Albert Einstein Coll Med; Universidade de São Paulo (USP); Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Peptides have been proposed to function in intracellular signaling within the cytosol. Although cytosolic peptides are considered to be highly unstable, a large number of peptides have been detected in mouse brain and other biological samples. in the present study, we evaluated the peptidome of three diverse cell lines: SH-SY5Y, MCF7, and HEIC293 cells. A comparison of the peptidomes revealed considerable overlap in the identity of the peptides found in each cell line. the majority of the observed peptides are not derived from the most abundant or least stable proteins in the cell, and approximately half of the cellular peptides correspond to the N- or C- termini of the precursor proteins. Cleavage site analysis revealed a preference for hydrophobic residues in the PI position. Quantitative peptidomic analysis indicated that the levels of most cellular peptides are not altered in response to elevated intracellular calcium, suggesting that calpain is not responsible for their production. the similarity of the peptidomes of the three cell lines and the lack of correlation with the predicted cellular degradome implies the selective formation or retention of these peptides, consistent with the hypothesis that they are functional in the cells.