Navegando por Palavras-chave "Ticks"

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    Caracterização cinética e funcional do inibidor recombinante de FXa da coagulação sanguínea, estraído a partir da glândula salivar do carrapato Amblyomma cajennense(Acari: Ixodidae) (Fabricius, 1787)
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Simons, Simone Michaela [UNIFESP]; Chudzinski-Tavassi, Ana Marisa [UNIFESP]
    Muitas substâncias anticoagulantes provenientes da secreção salivar e das glândulas salivares de diversas espécies de carrapatos têm sido relatadas. Através de métodos de bioquímica clássica, previamente foram isolados da saliva do carrapato Amb!Jomma eqjenneme 2 inibidores de FXa, um de trombina e outro da agregação plaquetária. No presente trabalho, um inibidor de FXa foi isolado da saliva através de uma cromatografia de troca iônica em resina Resource -Q (Sistema FPLC- GE), o qual foi denominado INFXa, é capaz de inibir a atividade amidolítica do FXa sobre o substrato cromogênico específico S-2765 (IC50 = 0,2 /-lg) de maneira dose-resposta além de prolongar o tempo de tromboplastina parcial ativada do plasma humano. A inibição do FXa não é alterada pelo INFXa na presença do zimogênio (FX). Através de um gel bidirnensional da saliva 110 spots foram revelados, sendo que suas massas moleculares variaram de 110 a 9 kDa e o pl entre 3.5 a 9.6. Entretanto, uma maior quantidade de proteínas se localizaram entre pl de 4.0 a 7.0 sugerindo um caráter mais ácido à saliva. As seqüências de aminoácidos de oito spots foram obtidas através da espectrometria de massa (MALDI-TOF e Q-TOF), as quais apresentaram similaridade com hemoglobina de manúferos, mas não com inibidores já conhecidos. A partir de uma biblioteca de cDNA das glândulas salivares do carrapato Amb!Jomma cajennense foi previamente clonado e expresso um importante inibidor denominado Amblyomin­ X, que inibe o FXa da coagulação como induz a remissão de tumor de melanoma implantado em camundongo, sem contudo afetar células normais. O Amblyomin-X foi inicialmente expresso em E.eoli transformada com o vetor de pAE o qual insere uma cauda de 6 resíduos de histidina à molécula. Como o Amblyomin-X foi obtido contendo cauda de poli histidina o que dificulta a validação do sistema para testes pré-clínicos. Neste trabalho avaliou a expressão de Amblyomin-X expresso em PÚhia pastoris. O inibidor foi então expresso em sistema de levedura utilizando a Piehia pastoris tendo como vetor o pPIC9K. Este sistema oferece a vantagem de produzir o inibidor sem a cauda de histidina e ser um processo escalonável. Foram produzidos 5,0 litros do inibidor em um fermentador. O Amblyomin-X foi separado do meio de cultura por dois processos distintos de clarificação, por membranas de fibra oca e por centrifugação, ambos os materiais foram parcialmente purificados através de uma cromatografia de troca iônica em resina Source Q (Sistema AKTA purifier - GE) em sistema rastreável e validado. O Amblyomin-X expresso em de levedura inibiu a atividade amidolítica do FXa sobre o substrato cromogênico S-2765 (Ki= 0,6 uM), e prolongou o tempo de tromboplastina parcial ativada de maneira dose-dependente, a inibição do FXa foi alterada pelo Amblyomin-X na presença do zimogênio (FX) na reação, reproduzindo as atividades encontradas no Amblyomin-X expresso...(au).
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    Caracterização de inibidores da coagulação sanguínea e da agregação plaquetária presentes na saliva do carrapato Amblyomma cajennense (Acari: Ixodidae) (Fabricius, 1787)
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Simons, Simone Michaela [UNIFESP]; Chudzinski-Tavassi, Ana Marisa [UNIFESP]
    Os carrapatos constituem um dos mais importantes grupos de artropode parasitas hematofagos de animais domesticos, silvestres e do homem. 0 Amblyomma cajennese constitui uma das principais especies de vetores de varios patogenos causadores de doencas como a babesiose, febre maculosa e Lyme simile. Objetivo: Avaliar a atividade da saliva do carrapato Amalyomma cajennese sobre os mecanismos de coagulacao, agregacao de plaquetas e fibrinolise, alem de isolar e caracterizar um inibidor de Fator Xa, um inibidor de trombina e um inibidor de agregacao plaquetaria. Metodos: A obtencao da saliva bruta foi realizada seguindo o metodo de Tatchell modificado. A atividade inibitoria sobre FXa e trombina, tanto da saliva bruta quanto das fracoes obtidas apos cromatografia foram avaliadas utilizando-se os substratos cromogenicos S-2765 e S-2238 respectivamente; a atividade fibrinolitica foi verificada em placas de fibrina humana, contendo plasminogenio e a inibicao da agregacao plaquetaria foi verificada tanto em PRP (induzida por ADP, colageno, ristocetina e acido araquidonico) quanto em plaquetas lavadas (induzida por colageno. Tanto o p1 quanto as massas moleculares das proteinas da saliva foram determinados por eletroforese bi-dimensional. 0 fracionamento das proteinas da saliva foi realizado atraves de cromatografia de troca ionica (Resource Q) eluida com um gradiente linear de NaCI (0-500mM), as fracoes com atividade inibitoria sobre FXa, trombina e agregacao plaquetaria foram separadas em pools, sendo que o Plli que apresentava atividade inibitoria sobre o FXa foi submetido a uma gel filtracao (TSK gel 2000 sw) e o material obtido denominado Amblyomim-X. A capacidade inibitoria do Amblyomin-X foi analisada frente diferentes condicoes (efeito de ions calcio, presenca de deferentes concentracoes do inibidor, diferentes tempos de incubacao e na presenca de componentes do complexo protrombinase). Resultados: A saliva bruta inibiu o FXa, a trombina e a agregacao plaquetaria, e um inibidor de FXa de cerca de 67kDa, denominado Amblyomin-X foi isolado. 0 Ambiyomin-X inibiu de forma eficiente e rapida o FXa isolado (IC50 de 4,7gg) e tambem inibiu a geracao de trombina no complexo protrombinase de forma dose...(au)
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    Acesso aberto (Open Access)
    Interaction between saliva's adenosine and tick parasitism: effects on feeding and reproduction
    (Biomed Central Ltd, 2017) Anatriello, Elen [UNIFESP]; Freire Oliveira, Carlo Jose; Oliveira, Nathalia Baptista; Fisch, Andressa; Milanezi, Cristiane Maria; da Silva, Joao Santana; Ferreira de Miranda-Santos, Isabel Kinney; Ferreira, Beatriz Rossetti
    Background: It has recently been demonstrated that saliva from Rhipicephalus sanguineus ticks contains adenosine (ADO) and prostaglandin E2 (PGE2), two non-protein molecules that have significant immunomodulatory properties. These molecules can inhibit cytokine production by dendritic cells (DCs), while also reducing the expression of CD40 in these cells. However, more studies are needed for a better understanding of their participation in the feeding of ticks in vivo. This work, therefore, evaluated the importance of ADO during tick infestations. Mice were infested with adult ticks (3 couples/mouse), and their skin was collected at the tick-infested site (3rd and 7th day), and mRNA for receptors of ADO was quantified by real-time PCR. Results: Tick infestation increased by four and two times the expression of the A2b and A3v1 receptors on day 3, respectively, while expression of other ADO receptors was unaltered. In addition, we treated mice (n = 10/group) daily with 8-(p-Sulfophenyl) theophylline, 8-pSPT, 20 mg/kg, i.p.), a non-selective antagonist of ADO receptors, and evaluated the performance of ticks during infestations. Female ticks fed on 8-pSPT-treated mice presented a reduction in their engorgement, weight and hatching rates of egg masses, and survival times of larvae compared to the same parameters presented by ticks in the control group. To investigate if these 8-pSPT-treated mice presented altered immune responses, we performed three tick infestations and collected their lymph node cells to determine the percentages and activation state of DCs and cytokine production by lymphocytes by flow cytometry (Cytometric Bead Array technique, CBA). Our data showed that 8-pSPT-treated mice presented an increase in the percentage of DCs as well as of their stimulatory and co-stimulatory molecules (CD40, CD80 and MHCII). Regarding production of T cell cytokines, we observed a significant increase in the levels of IL-2 and a significant decrease in IL-10, IL-17, TNF-alpha and IFN-gamma cytokines. Conclusions: These results suggest that ADO produced by ticks helps them feed and reproduce and that this effect may be due to modulation of host DCs and T cells.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Rmcystatin3, a cysteine protease inhibitor from Rhipicephalus microplus hemocytes involved in immune response
    (Elsevier B.V., 2014-11-01) Lu, Stephen [UNIFESP]; Soares, Tatiane Sanches [UNIFESP]; Vaz Junior, Itabajara S.; Lovato, Diogo Ventura [UNIFESP]; Tanaka, Aparecida Sadae [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Univ Fed Rio Grande do Sul
    The Rhipicephalus microplus tick is responsible for losses in the livestock production estimated in 2 billions USD. Despite its economical importance the knowledge in tick's physiology is sparse. in order to contribute to this scenario we describe the characterization of a cysteine proteinase inhibitor named Rmcystatin-3. Purified recombinant Rmcystatin-3 was able to inhibit cathepsin L (Ki = 2.5 nM), BmCl1 (Ki = 1.8 nM) and cathepsin B (Ki = 136 nM). Western blot and quantitative PCR analysis revealed the presence of Rmcystatin-3 in fat body, salivary gland but mainly in hemocytes. the mRNA levels of Rmcystatin-3 during bacterial challenge are drastically down-regulated. in order to define the Rmcystatin-3 possible role in tick immunity, the cystatin gene was knockdown by RNA interference with and without Escherichia coli infection. Our results showed that the Rmcystatin-3 silenced group was more immune competent to control bacterial infection than the group injected with non-related dsRNA. Taking together, our data strongly suggested an important role of Rmcystatin-3 in tick immunity. (C) 2014 Elsevier B.V. and Societe francaise de biochimie et biologie Moleculaire (SFBBM). All rights reserved.