Navegando por Palavras-chave "structure-activity relationship"

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    Relação estrutura-atividade entre os receptores AT1 e AT2 da angiotensina II à luz da estrutura do receptor CXCR4 da quimiocina
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014) Martin, Renan Paulo [UNIFESP]; Shimuta, Suma Imura [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A angiotensina II (AngII) e um potente agente do sistema renina-angiotensina participando da regulacao da pressao arterial e na homeostase hidromineral. Seu efeitos fisiologicos sao mediados pelos receptores tipo 1 (AT1) e tipo 2 (AT2) que possuem respostas contrarias nas suas vias de sinalizacao. Alguns modelos de interacao agonista-receptor vem sendo propostos onde e possivel destacar alguns residuos importantes para interacao do agonista ao receptor como Asp1, Arg2 e Tyr4 alem das extremidades N e C-terminais. Numa etapa inicial foi proposta para avaliar a possiblidade da substituicao do metodo de estudo de ligacao tradicional baseado em uso de radioligantes por um nao radioativo (fluoroforo). Foi entao utilizado o lantanideo Europio (Eu3+) como marcador do ligante nos ensaios de competicao pelo sitio de ligacao comparando ao uso do 3H. Depois disso, o projeto foi dividido em duas etapas, sendo a primeira, uma abordagem pratica, onde diferentes ligantes foram testados e as afinidades de ligacao de cada um comparada com aquelas dos receptores AT1 e AT2. Posteriormente foram obtidas 3 mutacoes sitio dirigidas no receptor AT2 onde a primeira causou o rompimento da segunda ponte SS (C35S), a segunda a substituicao das Asn127 por Gly no meio da helice III (N127G) e a terceira a substituicao da Asp297 por Ala (D297A). Alem disso foi proposto um metodo teorico de estudo usando modelagem molecular dos receptores AT1 e AT2 por homologia ao CXCR4. Os testes de ligacao usando os dois metodos propostos mostraram resultados equivalentes, razao pela qual se adotou o metodo fluorimetrico para o prosseguimento dos experimentos. E interessante destacar que a substituicao da Tyr4 por Ile provocou uma queda de afinidade de cerca de 100 vezes enquanto o uso da Phe na mesma posicao quase nao afetou a afinidade do ligante ao receptor AT1. Por outro lado o mesmo experimento conduzido com o receptor AT2 mostrou nao haver diferenca significativa. Esses resultados estao de acordo com os da literatura, uma vez que o residuo Asn111 do AT1 parece funcionar como botao que controla as mudancas do estado nao ativado para um estado propicio a ativacao que e um estado essencial para a correta acomodacao do ligante no receptor. Entretanto o receptor AT2 parece ja estar nesse estado independentemente da presenca desse residuo. Alem disso, o receptor AT2 possui um sitio de interacao mais flexivel do que o do AT1 que parece ser mais critico as mudancas no ligante. Na analise mutacional abordada, tanto o mutante C35S quanto o N127G nao apresentaram mudancas significativas no perfil de resposta aos ligantes estudados. Por outro lado o receptor AT2 carregando a mutacao D297A sofreu uma queda drastica na capacidade de ligacao com todos os analogos testados, indicando assim que esse residuo e crucial para a interacao com o segmento N-terminal da AngII. Os resultados de dinamica corroboram com os dados experimentais reforcando a melhor acomodacao da molecula de AngII ao receptor AT2 quando comparada ao receptor AT1
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    Truncation of amidated fragment 33-61 of bovine alpha-hemoglobin: Effects on the structure and anticandidal activity
    (Wiley-Blackwell, 2007-01-01) Machado, Alessandra; Sforca, Mauricio L.; Miranda, Antonio; Daffre, Sirlei; Pertinhez, Thelma A.; Spisni, Alberto; Miranda, M. Teresa M.; Universidade de São Paulo (USP); Ctr Struct Mol Biol; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Univ Parma
    Peptides derived from endogenous hemoglobin play important biological roles in a variety of living systems. in previous works we showed that the fragment 33-61 of bovine alpha=hemoglobin (Hb33-61) and its C-terminus amidated analogue (Hb33-61a) exhibit antimicrobial activity and we determined the 3D structure of HB33-61a bound to sodium dodecyl sulfate micelles. Here we report that Hb33-61a is lethal to Candida albicans at 625 mu M probably through disruption of its plasma membrane. in addition, we show that, even when used at 50 mu M, Hb33-61a produces low hemolysis (16% +/- 3.0%). Recognizing that one of the key steps to study new compounds with potential pharmaceutical application is to identify the structural elements essential to express biological activity, we also investigated the anticandidal activity of HB33-61a fragments. the results indicated that Hb40-61a exhibits the same minimal inhibitory concentration as Hb33-61a, whereas HB33-52a and Hb48-61a are significantly less astive. Noteworthy, for all the peptides tested, we observed that C-terminus amidation produces a potentiation of their anticandidal activity and we associate that increased biological activity and we associate that increased biological activity to a preferred structural and spatial organization of the C-terminal region favored by amidation. Finally, the data show that the most active peptides (Hb33-61a and Hb40-61a) are characterized by a central hinge joining the C-terminal region (containing a beta-turn followed by a helical element) to the N-terminal region (that presents only a beta-turn). We hypothesize that these two structured regions, by fluctuating independently in the lipid environment, may act in a coordinated fashion disrupting the yeast plasma membrane. (c) 2007 Wiley Periodicals, Inc.