BbCI, inibidor de cruzipaína de Bauhinia bauhinioides: isolamento do cDNA e expressão heteróloga

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dc.contributor.advisorSampaio, Misako Uemura [UNIFESP]
dc.contributor.authorHansen, Daiane [UNIFESP]
dc.date.accessioned2015-12-06T23:03:11Z
dc.date.available2015-12-06T23:03:11Z
dc.date.issued2004
dc.description.abstractO BbCI (Bauhinia bauhinioides Cruzipain Inhibitor) e um inibidor de cisteinoproteinase que mostra alta identidade sequencial com inibidores de planta do tipo Kunitz, porem nao apresenta nenhum residuo de cisteina. A inibicao da cruzipaina faz do BbCI um instrumento biotecnologico interessante no desenvolvimento de uma nova geracao de drogas para o combate a infeccoes causadas pelo Trypanossoma crua 0 BbCI tambem apresenta uma atividade inibitoria para HNE (Human Neutrophillus Elastase) enzima envolvida em varios processos fisiopatologicos. 0 gene codificante para BbCI foi clonado por RT-PCR usando oligonucleotideos degenerados, os quais foram sintetizados a partir da sequencia proteica previamente descrita. 0 produto amplificado foi inserido no vetor pGEM-T para sequenciamento. Uma vez confirmada a sequencia, oligonucleotideos internos foram sintetizados para a realizacao do RACE 5' e 3'(Rapid Amplification of cDNA Ends). A informacao gerada mostrou que o BbCI e inicialmente sintetizado como uma pre-pro-proteina apresentando a seguinte estrutura: 19 residuos de aminoacidos na regiao N-terminal, 164 residuos correspondentes a proteina nativa e 10 residuos na regiao C-terminal. A sequencia correspondente a cadeia madura foi subclonada no vetor de expressao pET-28a (Novagen). 0 BbCI foi produzido por expressao heterologa fusionado a uma sequencia de 6 residuos de histidinas com um sitio de clivagem de trombina entre eles. A expressao em E. coli BL21 (DE3) produziu o inibidor em grande escala o qual foi purificado por cromatografia de afinidade em resina Ni-NTA SuperFlow. A proteina de fusao foi submetida a clivagem com trombina e posteriormente purificada em gel filtracao Superdex 75a(au)pt
dc.description.sourceBV UNIFESP: Teses e dissertações
dc.format.extent91 p.
dc.identifier.citationSão Paulo: [s.n.], 2004. 91 p.
dc.identifier.fileepm-019598.pdf
dc.identifier.urihttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18804
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/restrictedAccess
dc.subjectInibidores de proteasespt
dc.subjectCisteína endopeptidasespt
dc.subjectClonagem molecularpt
dc.subjectBauhiniapt
dc.titleBbCI, inibidor de cruzipaína de Bauhinia bauhinioides: isolamento do cDNA e expressão heterólogapt
dc.title.alternativeBbCI, a cruzipain inhibitor of the Bauhinia baujinoides: isolation of it's cDNA an heterrologous expressionen
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesis
unifesp.campusSão Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM)pt
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