Produção e Caracterização in silico da Proteína Inibidora de elastase de neutrófilos (NEI) recombinante do carrapato Rhipicephalus microplus: uma candidata para tratamento de desordens inflamatórias

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dc.contributor.advisorCampos, Claudia Barbosa Ladeira de [UNIFESP]
dc.contributor.advisor-coAnatriello, Elen
dc.contributor.advisor-coLatteshttp://lattes.cnpq.br/6295907986341326pt_BR
dc.contributor.advisorLatteshttp://lattes.cnpq.br/8867737169235839pt_BR
dc.contributor.authorLeite, Gabriela Karen [UNIFESP]
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/4772381910969440pt_BR
dc.coverage.spatialSão José dos Campos, SPpt_BR
dc.date.accessioned2021-06-29T17:00:04Z
dc.date.available2021-06-29T17:00:04Z
dc.date.issued2021-06-02
dc.description.abstractOs carrapatos, tais quais o Rhipicephalus microplus, são artrópodes ectoparasitas hematófagos, que precisam permanecer fixos aos seus hospedeiros durante todo o tempo de vida para se alimentarem. Para tal, secretam diversas moléculas em sua saliva a fim de evadir a resposta imune do hospedeiro. Ao estudar essas diferentes moléculas, observa-se uma grande gama de potenciais imunobiológicos que podem atuar como efetores farmacológicos contra desordens inflamatórias causadas ou não por patógenos. Um dos desafios está em estabelecer formas de produção destas moléculas com baixo custo e grande rendimento. O objetivo do trabalho foi a produção da proteína inibidora de elastase de neutrófilo (NEI) recombinante em Escherichia coli e em Pichia pastoris, cuja sequência primária foi derivada do sialotranscriptoma do carrapato R. microplus, e a sua caracterização in silico. Conduzimos esse projeto, comparando os dois sistemas de produção de proteínas recombinantes, em pequena e larga escala em laboratório. Também foram realizados métodos de purificação como a cromatografia por afinidade e por gel filtração, para posteriormente ser utilizada na investigação do seu potencial farmacológico em modelos experimentais murinos. Para validar esse potencial, comparamos a nossa proteína de interesse com proteínas já caracterizadas como Inibidoras de elastase de carrapatos como R. microplus, A. monolakensis, I. scapularis, H. asiaticum, I. persulcatus, O. parkeri, H. dromedarii H. marginatum rufipe, A. delacruzi, A. triste, e A. cajennense e A. parvvum assim como do mosquito C. tarsalis. Esse comparativo foi feito via comparações filogenéticas e estruturais em vários níveis (verificando estruturas primarias, secundarias e tridimensionais). Nesse projeto, revistando os principais processos biotecnológicos de produção de proteínas recombinantes usando técnicas como crescimento em meio LB, usando a via do OperonLac e para concentração de proteínas por diálise usado no processo de produção via E. coli competentes, assim como crescendo em meios específicos com protocolos de produção proteica otimizados, ativando a produção da proteína de interesse usando metanol e usando instrumentos como NanoDrop para garantir a concentração a proteína produzida conseguiu-se definir o protocolo de P. pastoris como o de melhor rendimento e fácil purificação para utilização em modelos in vivo. Os resultados deste trabalho podem contribuir com um potencial candidata para tratamento de doenças inflamatórias com exacerbação da ação neutrofílica.pt_BR
dc.description.sponsorshipNão recebi financiamentopt_BR
dc.format.extent100 f.pt_BR
dc.identifier.citationLeite, G. K. Produção e Caracterização in silico da Proteína Inibidora de elastase de neutrófilos (NEI) recombinante do carrapato Rhipicephalus microplus: uma candidata para tratamento de desordens inflamatórias. Dissertação de mestrado. 2021.pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.unifesp.br/handle/11600/61230
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulopt_BR
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccesspt_BR
dc.subjectRhipicephalus micropluspt_BR
dc.subjectPichia pastorispt_BR
dc.subjectcarrapatopt_BR
dc.subjectinibidora de elastase de neutrófilopt_BR
dc.subjectEscherichia colipt_BR
dc.titleProdução e Caracterização in silico da Proteína Inibidora de elastase de neutrófilos (NEI) recombinante do carrapato Rhipicephalus microplus: uma candidata para tratamento de desordens inflamatóriaspt_BR
dc.title.alternativeProduction and in silico characterization of a neutrophil elastase inhibitor recombinant protein (NEI) from tick Rhipicephalus microplus: a target for treatment of inflammatory disorderspt_BR
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesispt_BR
unifesp.campusInstituto de Ciência e Tecnologia (ICT)pt_BR
unifesp.graduateProgramBiotecnologiapt_BR
unifesp.knowledgeAreaImunologiapt_BR
unifesp.researchAreaProdução de proteínas recombinantes para uso em disturbios imunológicospt_BR
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