Mecanismos envolvidos no efeito do tratamento com Deidrodieugenol em modelo de asma mista
Data
2020-03-05
Autores
Silva, Rafael Cossi Da 
Orientadores
Prado, Carla Maximo
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Asthma is a disease characterized by bronchial inflammation and it still a public health problem even with the existence of a standard treatment consisting of corticosteroids and bronchodilators. Previously, our laboratory studies had shown that dehydrodieugenol, a dimer of the anti-inflammatory eugenol molecules, appears to be promising in reducing the neutrophil inflammatory response, with less toxicity than eugenol. Objectives. The present project aims to understand mechanisms involved in this model of mixed asthma and to test if the treatment with dehydrodieugenol will be effective in reducing inflammation. Materials and methods. Balb/c male mice, aged from 6 to 8 weeks, underwent to 24-day sensitization protocol, with ovalbumin and Freud's Adjuvant, for induction of mixed asthma. The dehydrodieugenol treatment were administered in the last four days, and the animals were euthanized on the last day of treatment. It was used animals sensitized with ovalbumin associated with Freud's adjuvant lungs, where essential cytokines in the pathophysiology of mixed asthma were evaluated, such as IL-1β, IL-8, IL-13, IL-4, IL-17, INF-γ, CXCL9 , CD68, TGF-β and IL-6; in addition to assessing the MAPK pathway in the lung. Finally, in histological sections, the pulmonary remodeling process was evaluated. Results. Compared to the ovoalbumin group, 10mg/kg dehydrodieugenol group decreased the levels of total cells (P <0.001), neutrophils (P <0.05), eosinophil (P <0.01), macrophages (P <0.01), lymphocytes (P <0.05), ERK1/2 phosphorylation (P <0.01), IL-1β cytokine levels (P <0.01), messenger RNA levels (P <0.05) and cytokines (P <0.01) of KC, levels of IL-6 messenger RNA (P <0.05), levels of INF-γ (P <0.01), levels of IL-13 cytokine (P <0.01), the levels of IL-4 messenger RNA (P <0.05), and a decrease in bronchoconstriction (P <0.001), smooth muscle thickness (P <0.01) and collagen deposition (P <0.05) in the airway. Conclusion. The results showed that the 10mg/kg dehydrodieugenol group decreased the inflammation more than 20mg/kg group. In addition, it was possible to perceive that in mixed asthma the most common inflammatory response is via Th1, justifying the resistance to standard treatment described in literature. Dehydrodieugenol has been shown to be efficient both in the inflammatory response and in the improvement of pulmonary remodeling, being an interesting molecule to be studied as an alternative treatment for patient diagnosed with mixed asthma.
A asma é uma doença caracterizada pela inflamação das vias aéreas e persiste em ser um problema de saúde público mesmo com a existência do tratamento padrão composto por corticosteroides e bronco dilatadores. A partir de estudos realizados no laboratório anteriormente, o deidrodieugenol, um dímero da molécula anti-inflamatória eugenol, apresentou ser promissor na redução da resposta inflamatória neutrofílica, fenótipo da asma em que o tratamento padrão não é eficaz. Objetivo. O presente projeto tem como objetivo entender os mecanismos envolvidos neste modelo de asma mista e testar se o tratamento com deidrodieugenol será efetivo na redução das alterações obtidas. Materiais e Métodos. Camundongos machos da linhagem Balb/c, de idade entre 6 a 8 semanas, foram submetidos ao protocolo de sensibilização de 24 dias, com ovoalbumina mais Adjuvante de Freud, para indução da asma mista. Os tratamentos com deidrodieugenol foram administrados nos últimos quatro dias, e os animais foram eutanásiados no último dia de tratamento. Utilizou-se pulmões de tais animais, onde foram avaliadas RNA mensageiros, citocinas e proteínas essenciais na fisiopatologia da asma mista, como IL-1, IL-8, IL-13, IL-4, IL-17, INF-γ, CXCL9, CD68, TGF-β e IL-6; além de avaliar a via da MAPK no pulmão. Por fim, em cortes histológicos foram avaliados processo de remodelamento pulmonar. Resultados. Comparado ao grupo ovoalbumina, o deidrodieugenol em 10mg/kg diminuiu os níveis de células totais (P<0,001), neutrófilos (P<0,05), eosinófilo (P<0,01), macrófagos (P<0,01), linfócitos (P<0,05), fosforilação ERK1/2 (P<0,01), níveis de citocina IL-1 (P<0,01), níveis de RNA mensageiro (P<0,05) e de citocinas (P<0,01) KC, os níveis de transcritos da citocina IL-6 (P<0,05), os níveis de INF-γ (P<0,01), os níveis de citocina IL-13 (P<0,01), os níveis de RNA mensageiro de IL-4 (P<0,05), e também uma diminuição da bronco constrição (P<0,001), da espessura da musculatura lisa (P<0,01) e da deposição de colágeno (P<0,05) na via aérea. Já na dosagem de 20mg/kg, houve uma diminuição, quando comparado ao grupo ovoalbumina, das células totais (P<0,001), neutrófilos (P<0,05), eosinófilo (P<0,01), linfócitos (P<0,01) e a fosforilação ERK1/2 (P<0,05). Conclusão. Os resultados demonstraram que o grupo deidrodieugenol 10mg/kg apresentou uma maior diminuição na inflamação quando comparada a dosagem de 20mg/kg. Além disso, foi possível perceber que na asma mista a resposta inflamatória mais presente é por via Th1, justificando desta forma a resistência ao tratamento padrão descrita na literatura. O deidrodieugenol demonstrou ser eficiente tanto na resposta inflamatória quando na melhoria do remodelamento pulmonar, sendo uma molécula interessante para ser estudada como tratamento alternativo para pacientes diagnosticados com asma mista.
A asma é uma doença caracterizada pela inflamação das vias aéreas e persiste em ser um problema de saúde público mesmo com a existência do tratamento padrão composto por corticosteroides e bronco dilatadores. A partir de estudos realizados no laboratório anteriormente, o deidrodieugenol, um dímero da molécula anti-inflamatória eugenol, apresentou ser promissor na redução da resposta inflamatória neutrofílica, fenótipo da asma em que o tratamento padrão não é eficaz. Objetivo. O presente projeto tem como objetivo entender os mecanismos envolvidos neste modelo de asma mista e testar se o tratamento com deidrodieugenol será efetivo na redução das alterações obtidas. Materiais e Métodos. Camundongos machos da linhagem Balb/c, de idade entre 6 a 8 semanas, foram submetidos ao protocolo de sensibilização de 24 dias, com ovoalbumina mais Adjuvante de Freud, para indução da asma mista. Os tratamentos com deidrodieugenol foram administrados nos últimos quatro dias, e os animais foram eutanásiados no último dia de tratamento. Utilizou-se pulmões de tais animais, onde foram avaliadas RNA mensageiros, citocinas e proteínas essenciais na fisiopatologia da asma mista, como IL-1, IL-8, IL-13, IL-4, IL-17, INF-γ, CXCL9, CD68, TGF-β e IL-6; além de avaliar a via da MAPK no pulmão. Por fim, em cortes histológicos foram avaliados processo de remodelamento pulmonar. Resultados. Comparado ao grupo ovoalbumina, o deidrodieugenol em 10mg/kg diminuiu os níveis de células totais (P<0,001), neutrófilos (P<0,05), eosinófilo (P<0,01), macrófagos (P<0,01), linfócitos (P<0,05), fosforilação ERK1/2 (P<0,01), níveis de citocina IL-1 (P<0,01), níveis de RNA mensageiro (P<0,05) e de citocinas (P<0,01) KC, os níveis de transcritos da citocina IL-6 (P<0,05), os níveis de INF-γ (P<0,01), os níveis de citocina IL-13 (P<0,01), os níveis de RNA mensageiro de IL-4 (P<0,05), e também uma diminuição da bronco constrição (P<0,001), da espessura da musculatura lisa (P<0,01) e da deposição de colágeno (P<0,05) na via aérea. Já na dosagem de 20mg/kg, houve uma diminuição, quando comparado ao grupo ovoalbumina, das células totais (P<0,001), neutrófilos (P<0,05), eosinófilo (P<0,01), linfócitos (P<0,01) e a fosforilação ERK1/2 (P<0,05). Conclusão. Os resultados demonstraram que o grupo deidrodieugenol 10mg/kg apresentou uma maior diminuição na inflamação quando comparada a dosagem de 20mg/kg. Além disso, foi possível perceber que na asma mista a resposta inflamatória mais presente é por via Th1, justificando desta forma a resistência ao tratamento padrão descrita na literatura. O deidrodieugenol demonstrou ser eficiente tanto na resposta inflamatória quando na melhoria do remodelamento pulmonar, sendo uma molécula interessante para ser estudada como tratamento alternativo para pacientes diagnosticados com asma mista.