O efeito da lesão induzida pelo exercício físico agudo downhill sobre a mudança fenotípica de macrófagos, diferenciação e proliferação de células satélites no músculo tríceps de ratos wistar
Data
2013-06-26
Autores
Minari, André Luis Araújo 
Orientadores
Santos, Ronaldo Vagner Thomatieli dos
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Macrophages (Mϕs) and satellite cells (S.C) are closely related to muscular injury and regeneration. After injury (1 to 2 days) Mϕs type 1 (M1) provide the clearance of injured cells by phagocytosis and impair myogenesis. During regeneration (4 to 7 days), phagocytosis is concluded and Mϕs are simultaneously converted to Mϕs type 2 (M2), which restore the process of myogenesis and enable the development of new structures. OBJECTIVE: identify the moment of Mϕs phenotypic change, the modulation of myogenesis and evaluate the implication of cytokines in triceps brachii long head (TLH) and triceps brachii medial head (TB) of Wistar rats after induced injury. METHODS: Appliance of exercise-induced injury protocol by downhill running; measurement of serum injury markers (CK and LDH), evaluation of gene expression of Mϕs (CD68 + , CD163 and SLPI) and S.C. (MYOD and MYOGENIN) by RT –PCR and cytokine quantification (IL-6, IL-10 and TNF-α). All procedures were evaluated 0h, 24h, 48h and 72h after exercise, both in TLH and TB. Animals were distributed in four experimental groups (G0, G24, G48 and G72) and one control group (CTRL). RESULTS: 48h after induced injury we observed decrease in LDH (G48 vs CTRL and G72, P≤ 0.05). In TLH, the expression of CD68 + was increased in G24 compared to G72 (P≤ 0.05) while the expression of CD163 + was increased in G48 compared to G24 (P≤ 0.05), which demonstrates an inverse correlation of these markers (r=0.61; P≤ 0.001). In TB, the expression of CD68 + was increased 24h after induced injury, compared to G0 (P≤ 0.05) while expression of CD163 + was decreased in G72, compared to G0 (P≤ 0.05). MYOD was more expressed in TLH of G72, compared to G0 (P≤ 0.05) and this parameter presented a positive correlation with levels of TNF-α (r=0.69; P≤ 0.001). Additionally, in the same muscle (TLH) we observed an inhibition of MYOGENIN in G24 compared to CTRL (P≤ 0.05) and its restoration in G72, compared to G24 (P≤ 0.05). In TB, the expression of MYOD was increased 24h after induced injury (G0 VS G24; P≤ 0.05) and no change was observed in the expression of MYOGENIN, which was positively correlated to IL-10 (r=0.56; P≤ 0.002). In TLH, TNF-α was increased in G48 (G48 vs CTRL; G48 vs G0; P≤ 0.001) and in G72 (G72 vs CTRL; G72 vs G0 P≤ 0.001), what influenced IL-10 and IL-6 levels (TNF/IL-10; r= 0.68; P≤ 0.001 e TNF/IL-6 r=0.65; P≤ 0.001). It was also observed a positive correlation among IL-6 and IL-10 in TB (r=0.70; P≤ 0. 001). CONCLUSION: We showed diference behavior between fiber type analized, were TCL is most sensible compare to TB. It is denoted by elevation of TNF-α, with exerts important role in processes of myogenesis in period between 24 to 48h after downhill exercise, wich envolve with Mϕs phenotypic changes. Beside that, we evaluated important evidence among genetic expression of CD163 + immediately after downhill exercise in TB.
Macrófagos e células satélites (C.S) possuem importante comunicação nos processos de lesão e regeneração muscular. Após lesão (1 a 2 dias) Mϕs do tipo 1 (M1) são responsáveis pela remoção de células lesadas mediante fagocitose, inibindo os processos de miogênese. Nas fases de regeneração (3 a 7 dias), ocorre a finalização dos processos fagocíticos, com concomitante mudança fenotípica de Mϕs (fenótipo M2), que restabelecem os processos de miogênese, culminando na formação de novas estruturas. Objetivo: identificar o momento da mudança fenotípica de Mϕs, a modulação nos processos de miogênese e o envolvimento de citocinas no músculo tríceps cabeça longa e tríceps braquial medial de ratos Wistar após lesão induzida. Métodos: indução de lesão muscular através do protocolo de E.F downhil; análise sérica de marcadores de lesão (CK e LDH), expressão gênica de Mϕs (CD68 +, CD163 + e SLPI) e de C.S (MYOD e MIOGENINA) por RT-PCR e quantificação de citocinas (IL-6, IL-10 e TNF-α). Todos os procedimentos foram avaliados nos tempos 0, 24, 48 e 72 horas após o exercício, nos músculos tríceps braquial medial (TB) e tríceps cabeça longa (TCL). Os animais foram distribuídos em quatro grupos experimentais (G0, G24, G48 and G72) e um grupo controle (CTRL). Resultados: Diminuição de LDH foi identificada 48 horas após a lesão induzida (G48 vs CTRL e G72, P≤ 0,05). No TCL observamos aumento de CD68 + no G24 (G24 vs G72; P≤ 0,05) e aumento de CD163 + no G48 (G24 vs G48;P≤ 0,05), mostrando importante correlação inversa destes marcadores (r=0,61; P≤ 0,001). No TB foi observado apenas aumento de CD68 + 24 horas após o E.F (G0 vs G24; P≤ 0,05) e inibição de CD163 + 72 horas após (G0 vs G72, P≤ 0,05). No TCL, ocorreu aumento de MYOD no G72 (G72 vs G0; P≤ 0,05), que apresentou correlação positiva com as concentrações de TNF-α (r=0,69; P≤ 0,001). Além disso, foi observada a inibição de MIOGENINA no G24 (CTRL vs G24; P≤ 0,05) e o seu restabelecimento no G72 (G24 VS G72; P≤ 0,05). No TB somente foi observada a elevação de MYOD 24 horas após (G0 VS G24; P≤ 0,05), sem alteração da expressão gênica de MIOGENINA, correlacionada positivamente com IL-10 (r=0,56; P≤ 0,002). No TCL, observou-se aumento de TNF-α nos grupos G48 (G48 vs CTRL; G48 vs G0; P≤ 0,001) e G72 (G72 vs CTRL; G72 vs G0 P≤ 0,001), que influenciou o comportamento de IL-10 e IL-6 (TNF/IL-10; r= 0,68; P≤ 0,001 e TNF/IL-6 r=0,65; P≤ 0,001). Observou-se correlação positiva entre IL-6 e IL-10 (IL-6/IL-10 r=0,70; P≤ 0, 001) no TB. Conclusão: Evidenciamos diferente comportamento entre as fibras musculares analisadas, onde TCL sofreu maiores alterações se comparado ao TB, denotado pelo aumento de TNF-α e mudança fenotípica de Macrófagos entre 24 e 48 horas após o E.F. Também observamos possível modulação do E.F sobre a expressão de CD163 + no TB.
Macrófagos e células satélites (C.S) possuem importante comunicação nos processos de lesão e regeneração muscular. Após lesão (1 a 2 dias) Mϕs do tipo 1 (M1) são responsáveis pela remoção de células lesadas mediante fagocitose, inibindo os processos de miogênese. Nas fases de regeneração (3 a 7 dias), ocorre a finalização dos processos fagocíticos, com concomitante mudança fenotípica de Mϕs (fenótipo M2), que restabelecem os processos de miogênese, culminando na formação de novas estruturas. Objetivo: identificar o momento da mudança fenotípica de Mϕs, a modulação nos processos de miogênese e o envolvimento de citocinas no músculo tríceps cabeça longa e tríceps braquial medial de ratos Wistar após lesão induzida. Métodos: indução de lesão muscular através do protocolo de E.F downhil; análise sérica de marcadores de lesão (CK e LDH), expressão gênica de Mϕs (CD68 +, CD163 + e SLPI) e de C.S (MYOD e MIOGENINA) por RT-PCR e quantificação de citocinas (IL-6, IL-10 e TNF-α). Todos os procedimentos foram avaliados nos tempos 0, 24, 48 e 72 horas após o exercício, nos músculos tríceps braquial medial (TB) e tríceps cabeça longa (TCL). Os animais foram distribuídos em quatro grupos experimentais (G0, G24, G48 and G72) e um grupo controle (CTRL). Resultados: Diminuição de LDH foi identificada 48 horas após a lesão induzida (G48 vs CTRL e G72, P≤ 0,05). No TCL observamos aumento de CD68 + no G24 (G24 vs G72; P≤ 0,05) e aumento de CD163 + no G48 (G24 vs G48;P≤ 0,05), mostrando importante correlação inversa destes marcadores (r=0,61; P≤ 0,001). No TB foi observado apenas aumento de CD68 + 24 horas após o E.F (G0 vs G24; P≤ 0,05) e inibição de CD163 + 72 horas após (G0 vs G72, P≤ 0,05). No TCL, ocorreu aumento de MYOD no G72 (G72 vs G0; P≤ 0,05), que apresentou correlação positiva com as concentrações de TNF-α (r=0,69; P≤ 0,001). Além disso, foi observada a inibição de MIOGENINA no G24 (CTRL vs G24; P≤ 0,05) e o seu restabelecimento no G72 (G24 VS G72; P≤ 0,05). No TB somente foi observada a elevação de MYOD 24 horas após (G0 VS G24; P≤ 0,05), sem alteração da expressão gênica de MIOGENINA, correlacionada positivamente com IL-10 (r=0,56; P≤ 0,002). No TCL, observou-se aumento de TNF-α nos grupos G48 (G48 vs CTRL; G48 vs G0; P≤ 0,001) e G72 (G72 vs CTRL; G72 vs G0 P≤ 0,001), que influenciou o comportamento de IL-10 e IL-6 (TNF/IL-10; r= 0,68; P≤ 0,001 e TNF/IL-6 r=0,65; P≤ 0,001). Observou-se correlação positiva entre IL-6 e IL-10 (IL-6/IL-10 r=0,70; P≤ 0, 001) no TB. Conclusão: Evidenciamos diferente comportamento entre as fibras musculares analisadas, onde TCL sofreu maiores alterações se comparado ao TB, denotado pelo aumento de TNF-α e mudança fenotípica de Macrófagos entre 24 e 48 horas após o E.F. Também observamos possível modulação do E.F sobre a expressão de CD163 + no TB.
Descrição
Citação
MINARI, Andre Luis Araujo. O efeito da lesão induzida pelo exercício físico agudo downhill sobre a mudança fenotípica de macrófagos, diferenciação e proliferação de células satélites no músculo tríceps de ratos wistar. 2013. 93f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Saúde e Sociedade, Universidade Federal de São Paulo, Santos, 2013.