Estudo Da Ação Dos Inibidores Da 3-Hidroximetilglutaril Coa Redutase Sobre A Secreção De Citocinas Inflamatórias Em Células Endoteliais Estimuladas Com Soro Urêmico
Data
2017-06-29
Autores
Carmona, Silmara De Melo 
Orientadores
Batista, Marcelo Costa
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Introduction: Atherosclerosis, the anatomopathological basis of dyslipidemia, is associated with the occurrence of cardiovascular diseases (CVD), demonstrating a high prevalence in chronic renal disease (CKD). Non-traditional risk factors such as the uremic environment and inflammation promote metabolic alterations related with CVD. Uremic mileu has been considered preponderant issue for secretion of cytokines, as TNF-α and interleukins, which are associated with endothelial dysfunction. Statins, drugs that inhibit the enzyme 3-Hydroxymethylglutaryl CoA Reductase, preventing the formation of mevalonic acid and its precursors, have pleiotropic effects with potential benefit under such conditions of systemic inflammatory response. Objective: The aim of the present study was to characterize immortalized human umbilical vein cells by expressing constitutive and specific markers, as well as analyzing the impact of simvastatin on the secretion of TNF-α and IL-10 in endothelial cells stimulated with uremic serum. Methods: To validated the source of the cell line used as in vitro model in this study, cell culture was incubated with primary monoclonal antibodies and secondary antibodies conjugated to Allophycocyanin (APC) and Phycoerythrin (PE). After, the cells were submitted to flow cytometry and immunofluorescence methods to evaluate the expression of constitutive and specific markers. For the study of the impact of 3-Hydroxymethylglutaryl CoA reductase inhibitors on the expression and secretion of IL-10 and TNF-α, HUVEC cells were pretreated with simvastatin and insulted with uremic serum and serum from healthy subjects. Additionally, the cell supernatant was collected and analyzed by ELISA method. Results and Conclusions: Our findings confirm the endothelial origin of the cells used in this study by which expressing the constitutive markers CD31, CD146 and vWF, as well as the expression of the specific markers VCAM and ICAM in the cells incubated with TNF-α, mimicking the inflammatory scenario. We also demonstrate that 3-Hydroxymethylglutaryl CoA reductase inhibitors have a pleiotropic effect on endothelial tissue, reducing TNF-α secretion and increasing IL-10 secretion. These actions determine the partial reversal of the inflammatory response and consequently, the attenuation of endothelial dysfunction which is observed in the uremic environment. However, the elucidation of the mechanisms by which statins acts in the endothelium should be the object of future studies.
Introdução: A aterosclerose, base anatomopatológica da dislipidemia, está em íntima associação com a ocorrência de doenças cardiovasculares, apresentando alta prevalência na doença renal crônica (DRC). Fatores de risco não tradicionais como o ambiente urêmico e a inflamação, promovem alterações metabólicas, figurando como quesitos preponderantes para secreção de citocinas, como TNF-α e as Interleucinas, e para a gênese da disfunção endotelial no portador de doença renal. As estatinas, drogas que inibem a enzima 3-Hidroximetilglutaril CoA Redutase (HMG CoA redutase), impedindo a formação de ácido mevalônico e seus precursores, apresentam efeitos pleiotrópicos com potencial benefício em condições que perpetuem a resposta inflamatória sistêmica. Objetivo: O presente estudo tem por objetivo caracterizar células de veia do cordão umbilical humano imortalizadas, através da expressão de marcadores constitutivos e específicos, bem como analisar o impacto da sinvastatina na secreção de TNF-α e IL-10 em células endoteliais estimuladas com soro urêmico. Métodos: Para validar a origem da linhagem celular utilizada como modelo in vitro neste estudo, células em cultivo foram incubadas com anticorpos monoclonais primários e anticorpos secundários conjugados aos fluoróforos Allophycocyanin (APC) e Phycoerythrin (PE). Posteriormente as células foram submetidas a citometria de fluxo e imunofluorescência a fim de avaliar a expressão de marcadores constitutivos e específicos. Para o estudo do impacto dos inibidores da 3-Hidroximetilglutaril CoA redutase sobre a expressão e secreção de IL-10 e TNF-α, células HUVEC foram pré-tratadas com sinvastatina e posteriormente insultadas com soro urêmico e soro de indivíduos saudáveis. Sequentemente, o sobrenadante celular foi coletado e analisado através de ELISA. Resultados e Conclusões: Nossos achados confirmam que a linhagem celular utilizada como modelo in vitro neste estudo tem origem endotelial, por expressar os marcadores constitutivos CD31, CD146 e vWF, do mesmo modo que, ao mimetizar o estimulo inflamatório através da incubação com TNF-α, as células expressaram os marcadores específicos VCAM e ICAM. Demostramos também que os inibidores da 3-Hidroximetilglutaril CoA Redutase apresentam efeito pleiotrópico no tecido endotelial, reduzindo a secreção de TNF-α e aumentando a secreção de IL-10. Estas ações determinam a reversão parcial da resposta inflamatória e, consequentemente, atenuam a disfunção endotelial observada no ambiente urêmico. A elucidação dos mecanismos modulados pela ação das estatinas no endotélio deve ser objeto de estudos futuros.
Introdução: A aterosclerose, base anatomopatológica da dislipidemia, está em íntima associação com a ocorrência de doenças cardiovasculares, apresentando alta prevalência na doença renal crônica (DRC). Fatores de risco não tradicionais como o ambiente urêmico e a inflamação, promovem alterações metabólicas, figurando como quesitos preponderantes para secreção de citocinas, como TNF-α e as Interleucinas, e para a gênese da disfunção endotelial no portador de doença renal. As estatinas, drogas que inibem a enzima 3-Hidroximetilglutaril CoA Redutase (HMG CoA redutase), impedindo a formação de ácido mevalônico e seus precursores, apresentam efeitos pleiotrópicos com potencial benefício em condições que perpetuem a resposta inflamatória sistêmica. Objetivo: O presente estudo tem por objetivo caracterizar células de veia do cordão umbilical humano imortalizadas, através da expressão de marcadores constitutivos e específicos, bem como analisar o impacto da sinvastatina na secreção de TNF-α e IL-10 em células endoteliais estimuladas com soro urêmico. Métodos: Para validar a origem da linhagem celular utilizada como modelo in vitro neste estudo, células em cultivo foram incubadas com anticorpos monoclonais primários e anticorpos secundários conjugados aos fluoróforos Allophycocyanin (APC) e Phycoerythrin (PE). Posteriormente as células foram submetidas a citometria de fluxo e imunofluorescência a fim de avaliar a expressão de marcadores constitutivos e específicos. Para o estudo do impacto dos inibidores da 3-Hidroximetilglutaril CoA redutase sobre a expressão e secreção de IL-10 e TNF-α, células HUVEC foram pré-tratadas com sinvastatina e posteriormente insultadas com soro urêmico e soro de indivíduos saudáveis. Sequentemente, o sobrenadante celular foi coletado e analisado através de ELISA. Resultados e Conclusões: Nossos achados confirmam que a linhagem celular utilizada como modelo in vitro neste estudo tem origem endotelial, por expressar os marcadores constitutivos CD31, CD146 e vWF, do mesmo modo que, ao mimetizar o estimulo inflamatório através da incubação com TNF-α, as células expressaram os marcadores específicos VCAM e ICAM. Demostramos também que os inibidores da 3-Hidroximetilglutaril CoA Redutase apresentam efeito pleiotrópico no tecido endotelial, reduzindo a secreção de TNF-α e aumentando a secreção de IL-10. Estas ações determinam a reversão parcial da resposta inflamatória e, consequentemente, atenuam a disfunção endotelial observada no ambiente urêmico. A elucidação dos mecanismos modulados pela ação das estatinas no endotélio deve ser objeto de estudos futuros.