Papel do inflamassoma NLRC4 na indução e secreção de IL-1alpha em resposta à flagelina

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dc.contributor.advisorBortoluci, Karina Ramalho [UNIFESP]pt
dc.contributor.authorFreitas, Carla Longo de [UNIFESP]
dc.contributor.institutionUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)pt
dc.date.accessioned2018-07-27T15:51:17Z
dc.date.available2018-07-27T15:51:17Z
dc.date.issued2014-08-29
dc.description.abstractThe flagellin monomer, structural protein that composes a subunit of bacterial flagellum, is recognized by the innate immune system by TLR5, but is transported to cytosol by secretion system of pathogenic bacterias where it is capable to active the NAIP5/NLRC4 inflammasome. The NAIP5/NLRC4 inflammasome can also contain the adaptor molecule ASC, inducing particular responses according to the formed complex. NLRC4 inflammasomes that recruit the adaptor molecule ASC induce autoproteolytic cleavege of caspase-1 and IL-1β and IL-18 pro-cytokines processing. In a different manner, NLRC4 ASC-independent inflammasomes activate caspase-1 but do not induce an autoproteolytic cleavage, leading to a rapid cell death by pyroptosis. In the last years, our group has been studying new effector mechanisms triggered by cytosolic flagellin, such as the release of the damage associated molecular pattern, IL-1α. Recent data suggest inflammasomes are involved in IL-1α secretion, however, little is known about this cytokine regulation. In this work, we demonstrate that cytosolic flagellin is capable of induce IL-1α secretion in a NLRC4, ASC and caspase-1 partially dependent manner. Interestingly, cytosolic flagellin also was capable of induce IL-1α production in cells lysates. However, this effect was not altered in the absence of NLRC4. Furthermore the induction of IL-1α secretion in response to cytosolic flagellin was inhibited in the presence of CA074-Me, pharmacological inhibitor of cathepsin B,a lysossomal enzyme, suggesting that more than one pathway can be triggered by cytosolic flagellin to induce production of IL-1α. Finally, we performed an assay that allowed us to evaluate secretion of IL-1α and cellular viability all together. Our data suggest that induction of IL-1α secretion in response to cytosolic flagellin envolves different molecular machineries. Still, secretion of IL-1α seems to preceed cell detah or occurs in a cell death independent manner, a fact that defy previous data tha indicate passive release of this cytokine by dead cells.en
dc.description.abstractO monômero da flagelina, proteína estrutural que compõe uma subunidade do flagelo de bactérias móveis, é reconhecida extracelularmente pelo TLR5, mas é levada para o citosol celular por sistemas de secreção presentes em bactérias patogênicas, onde é capaz de ativar o inflamassoma NAIP5/NLRC4. O inflamassoma NAIP5/NLRC4 pode ainda conter a molécula adaptadora ASC, induzindo dessa maneira, respostas particulares dependendo do complexo formado. Inflamassomas NLRC4 que recrutam a molécula adaptadora ASC induzem a clivagem auto-proteolítica da caspase-1 e processamento das pró-citocinas IL-1β e IL-18. Em contraste, inflamassomas NLRC4 ASC-independentes ativam a caspase-1, mas não induzem sua clivagem auto-proteolítica, promovendo uma morte celular rápida por piroptose. Além desses mecanismos convencionais, nosso grupo e outros vêm estudando novos mecanismos efetores induzidos a partir do reconhecimento citosólico da flagelina, os quais incluem liberação de fatores de dano celular, como a IL-1. Dados recentes da literatura sugerem um envolvimento de inflamassomas na secreção de IL-1, no entanto, pouco se conhece a respeito da regulação desta citocina. No presente trabalho, demonstramos que a flagelina citosólica é capaz de induzir a secreção de IL-1 de maneira parcialmente dependente das moléculas NLRC4, ASC e caspase-1. Interessante, a flagelina citosólica também foi capaz de estimular a produção de IL-1 nos lisados celulares. No entanto, este efeito não foi alterado na ausência de NLRC4. Ainda, a indução e secreção de IL-1 em resposta à flagelina citosólica foi inibida na presença de CA074-Me, inibidor farmacológico da catepsina B, enzima lisossomal, sugerindo que vias diversas podem interagir a partir do estímulo com flagelina citosólica para induzir a produção de IL-1. Finalmente, em um ensaio que permite a análise concomitante da secreção de IL-1 e viabilidade celular, verificamos que a secreção desta citocina está relacionada com células viáveis. Os dados, em conjunto, sugerem que a indução e secreção de IL-1 em resposta à flagelina citosólica envolve diferentes maquinarias moleculares. Ainda, a secreção de IL-1 parece preceder ou acontecer de maneira independente da morte celular, fato que desafia conceitos prévios da literatura que indicam a liberação passiva da IL-1 por células mortas.pt
dc.description.sourceDados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2013 a 2016)
dc.format.extent67 p.
dc.identifierhttps://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=1324962pt
dc.identifier.citationFREITAS, Carla Longo de. Papel do inflamassoma NLRC4 na indução e secreção de IL-1alpha em resposta à flagelina. 2014. 67 f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Ciências Ambientais, Químicas e Farmacêuticas, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Diadema, 2014.
dc.identifier.file2014-0027.pdf
dc.identifier.urihttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47057
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/restrictedAccess
dc.subjectInflammasomeen
dc.subjectCaspase-1en
dc.subjectFlagellinen
dc.subjectIL-1alphaen
dc.subjectCathepsinsen
dc.subjectInflamassomapt
dc.subjectCaspase-1pt
dc.subjectFlagelinapt
dc.subjectIL-1alphapt
dc.subjectCatepsinaspt
dc.titlePapel do inflamassoma NLRC4 na indução e secreção de IL-1alpha em resposta à flagelinapt
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesis
unifesp.campusInstituto de Ciências Ambientais, Químicas e Farmacêuticas (ICAQF)pt
unifesp.graduateProgramBiologia Químicapt
unifesp.knowledgeAreaBiologia Químicapt
unifesp.researchAreaBiologia de Microorganismos e das Interações Celularespt
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