Imunização intranasal com adenovírus contendo o gene da ASP-2 de Trypanosoma cruzi

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dc.contributor.advisorVasconcelos, Jose Ronnie Carvalho de [UNIFESP]
dc.contributor.advisor-coNoronha, Isau Henrique [UNIFESP]
dc.contributor.advisor-coLatteshttp://lattes.cnpq.br/1454835868106892pt_BR
dc.contributor.advisorLatteshttp://lattes.cnpq.br/2376141137368343pt_BR
dc.contributor.authorWada, Liana Nanako [UNIFESP]
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/9173004044048354pt_BR
dc.contributor.institutionUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.coverage.spatialSantospt_BR
dc.date.accessioned2022-10-19T16:46:19Z
dc.date.available2022-10-19T16:46:19Z
dc.date.issued2022-08-31
dc.description.abstractA doença de Chagas é uma infecção causada pelo protozoário intracelular T. cruzi, que, estima-se, é responsável por cerca de 7.000 mortes anualmente. A doença é caracterizada por um curso clínico bifásico, apresentando poucos ou nenhum sintoma, podendo evoluir até a morte do hospedeiro. O conhecimento sobre a capacidade das células T CD8+ na lise das células hospedeiras infectadas pelo T. cruzi, possibilitou o desenvolvimento de vacinas que estimulam esse processo, a fim de gerar uma imunização eficaz. A vacinação genética consiste na expressão do gene do antígeno na célula do hospedeiro gerando uma resposta protetora, que, durante a infecção, com a ativação da resposta imune adaptativa, ocasiona o controle da replicação do parasito. Neste processo, os linfócitos T CD8+ são fundamentais no controle da infecção por patógenos intracelulares, como o T. cruzi. É fato consabido que a administração de vacinas por vias mucosas é eficiente em respostas imunes humorais mediadas por células, tanto em tecidos de mucosa quanto em âmbito sistêmico, mas os mecanismos acerca deste tipo de vacinação ainda permanecem em desenvolvimento. Tendo em vista a escassez de fármacos no tratamento da doença, torna-se essencial o desenvolvimento de tecnologias, como, estratégias vacinais contra o T. cruzi que sejam capazes de induzir uma resposta protetora. Considerando as múltiplas vantagens de uma vacinação intranasal, foi elaborado um protocolo de imunização adenoviral contendo o gene ASP-2 para avaliar a proteção de animais desafiados experimentalmente com o T. cruzi. Foi utilizada a linhagem A/Sn descrita como altamente suscetível à infecção para avaliar a proteção ao desafio experimental e resposta imune de células T CD8+ específicas geradas após a imunização. Até o sexagésimo dia de infecção, observamos que todos os animais imunizados via intranasal e via intramuscular com o AdASP-2 tiveram um percentual de sobrevivência completo, ao contrário dos animais que receberam o controle vacinal Adβgal, que sucumbiram à infecção no vigésimo dia. A imunização intranasal com o AdASP-2 protegeu os animais completamente, e, para a nossa surpresa, houve baixa resposta de células T CD8+ específicas em células do baço. Ergue-se, assim, a hipótese da ativação de células T CD8+ em outros compartimentos, como no linfonodo e tecidos de mucosa, ou a possível ativação de outras células presentes no sistema imunológico adaptativo, complementando a resposta contra o T. cruzi. A imunização pela inoculação intranasal foi capaz de proteger os animais do desafio experimental, diminuir a carga parasitária em diferentes tecidos e gerar anticorpos IgG e IgA. Em conjunto com esses resultados, em nossas análises, observamos um aumento no número de células secretoras de anticorpo nos grupos imunizados, indicando que células B estariam contribuindo na resposta imune após a vacinação com o AdASP-2.pt_BR
dc.description.abstractChagas disease is an infection caused by the intracellular protozoan Trypanosoma cruzi, which is estimated to be responsible for about 7.000 deaths. The disease is characterized by a biphasic clinical course, with few or no symptoms and capable to progress to the death of the host. The knowledge about the capacity of CD8 + T cells in the lysis of host cells infected by T. cruzi, enables the development of vaccines that estimulate this process in order to generate sufficient immunization. Genetic vaccination consists of inducing a long-term protective immune response, which, with the activation of the adaptive immune response during infection, causes the control of the parasite's replication. In this process, CD8+ T cells are essential in controlling infection by intracellular pathogens, such as T. cruzi. It is known that the administration of vaccines via mucosal routes is efficient in cell-mediated humoral immune responses, both in mucosal and systemic compartments, but the mechanisms regarding this type of vaccination are still under development. Considering a few drugs in the treatment of the disease, it is essential to develop technologies, such as vacines against T. cruzi, which can induce a protective response. Considering the multiple advantages of an intranasal vaccination, an adenoviral immunization protocol containing the ASP-2 protein was designed to assess the protection of animals experimentally challenged with T. cruzi. Mice described as highly susceptible to infection was used to assess protection from experimental challenge and immune response of specific CD8+ T cells generated after immunization. Until the sixtieth day of infection we observed that all animals intranasally immunized with AdASP-2 had a complete survival percentage, unlike the animals that received the Adβgal vaccine control which succumbed to the infection on the twentieth day. Intranasal immunization with AdASP-2 protected the animals completely, and, to our surprise, there was a low specific CD8+ T cell response so far. Thus, this raises the hypothesis of activation of CD8 T cells in other compartments, such as the lymph node, or the possible activation of other cells present in the adaptive immune system, complementing the response against T. cruzi. Immunization by intranasal inoculation was able to protect the animals from the experimental challenge, decrease the parasite load in different tissues and generate IgG and IgA antibodies. Together, we observed an increase in the number of antibody secreting cells in the immunized groups, indicating that B cells would be contributing to the immune response after vaccination with AdASP-2.en
dc.description.sponsorshipConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)pt_BR
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)pt_BR
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)pt_BR
dc.emailadvisor.customjrcvasconcelos@gmail.compt_BR
dc.format.extent82 f.pt_BR
dc.identifier.citationWADA, Liana Nanako. Imunização intranasal com adenovírus contendo o gene da ASP-2 de Trypanosoma cruzi. 2022. 82 f. Dissertação (Mestrado em Bioprodutos e Bioprocessos) - Instituto de Saúde e Sociedade, Universidade Federal de São Paulo, Santos, 2022.pt
dc.identifier.otherProcesso SEI 23089.025908/2022-12pt
dc.identifier.urihttps://repositorio.unifesp.br/handle/11600/65776
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulopt_BR
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/restrictedAccesspt_BR
dc.subjectImunologiapt_BR
dc.subjectVacinaspt_BR
dc.subjectASP-2pt_BR
dc.subjectMucosapt_BR
dc.subjectAdenovíruspt_BR
dc.subjectVaccineen
dc.subjectAdenovirusen
dc.subjectMucosaen
dc.subjectTrypanosoma cruzien
dc.titleImunização intranasal com adenovírus contendo o gene da ASP-2 de Trypanosoma cruzipt_BR
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesispt_BR
unifesp.campusInstituto de Saúde e Sociedade (ISS)pt_BR
unifesp.graduateProgramBioprodutos e Bioprocessospt_BR
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