Navegando por Palavras-chave "Aderência Bacteriana"
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- ItemSomente MetadadadosClonagem e caracterização da adesina envolvida no padrão ALL de Escherichia coli enteropatogênica atípica (EPEC atípica)(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Dulguer, Michelle Vanzella [UNIFESP]; Scaletsky, Isabel Cristina Affonso [UNIFESP]A adesao da bacteria a mucosa do intestino delgado e uma etapa importante na inducao de diarreia por amostras de E. coli. Tres padroes de adesao tem sido descritos em amostras de E. coli causadoras de diarreia: adesao localizada (AL), adesao agregativa (AA) e adesao difusa (AD). Recentemente, foi descrita uma nova classe de E. coli causadora de diarreia, caracterizada como E. coli enteropatogenica atipica (EPEC atipica), para designar amostras de EPEC que nao hibridizam com a sonda EAF. Amostras de EPEC atipica apresentam um padrao de adesao denominado adesao localizada-like (ALL) em testes de cultura de celulas que empregam 6 horas de incubacao. O padrao ALL das amostras de EPEC atipica demonstra ser uma adesina geneticamente diferente da codificada pelo bfpA. Este trabalho teve como objetivo identificar os genes responsaveis pelo fenotipo da adesao ALL, apresentado pela amostra 22 pertencente ao sorotipo 026:H11 isolado de um caso de diarreia infantil na cidade de São Paulo. O DNA genomico dessa amostra foi extraido, parcialmente digerido com Sau 3A e clonado no vetor cosmidio pHC79. A biblioteca genomica foi transformada na E. coli Kl2 DH5a e os clones recombinantes foram testados quanto a adesao as celulas HeLa. Um clone denominado de V-B-6 apresentou o padrao ALL em celulas HeLa de maneira semelhante a amostra 026:Hll. Este clone cosmidio apresenta um inserto de aproximadamente 32 kb Atraves do estudo da integridade da regiao LEE, utilizando sondas geneticas (A, B, C e D), verificamos que o clone nao apresenta nenhuma homologia com as 4 sondas geneticas e sendo negativo tambem para o teste de FAS. Utilizando tecnica de PCR para determinarmos outros fatores de virulencia que poderiam estar envolvidos, observamos que o clone cosmidio nao contem os genes para b-intimina, receptor Tir e locus efal. O soro anti-ALL produzido em coelho, apresentou efeito inibitorio da adesao tanto da amostra selvagem quanto do clone cosmidio. A analise atraves de Western blotting revelou uma proteina de membrana externa de aproximadamente 60 kDa no clone cosmidio V-B-6. A partir desses resultados, isolamos o anticorpo monoespecifico contra a proteina de 60 kDa e testamos quanto a capacidade de inibicao da adesao a celula HeLa onde observamos inibicao da adesao. Com este trabalho pudemos demonstrar que o padrao ALL apresentado pela EPEC atipica amostra 22, nao e mediado pela intimina e que a proteina de 60 kDa e uma das principais candidatas a ser mediadora da adesao
- ItemSomente MetadadadosDiversidades fenotipica e genotipica em amostras de Escherichia coli enteroagregativa com variacors no padrao de aderencia e/ou na reatividade com a sonda EAEC(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Santos, Sergio Suzart dos [UNIFESP]Amostras de Escberichia coli enteroagregativa (EAEC) tem sido epidemiologicamente associada com diarreia persistente em diversos paises em desenvolvimento e sao identificadas por sua habilidade de produzir um padrao de aderencia agregativo (AA) na superficie de celulas HEp-2 e HeLa e na regiao intercelular de suporte. A maioria dos estudos ate o momento enfocaram na virulencia da categoria EAEC tem analisado amostras que produziam padrao AA tipico e reagiam com a sonda EAEC (pCVD 432). Desta forma, poucas informacoes relativo a presenca de potenciais fatores de virulencia em amostras de E. coli apresentando variacoes no padrao de aderencia AA e/ou defectivo para a sequencia EAEC tem sido reportado. Neste estudo, nos analisamos 26 amostras de E. coli classificadas em 6 grupos distintos, de acordo com variacoes no padrao de aderencia AA e/ou na reatividade com a sonda EAEC. Estes grupos foram classificados como: AA/+ (AA tipico/sonda positiva), AA/- (AA tipico/sonda negativa), D/+ (destacantes/sonda positiva), AAcs/+ (AA preferencialmente na laminula/sonda positiva), AAcs/- (AA preferencialmente na laminula/sonda negativa) e NA/+ (nao aderentes/sonda positiva). Diversas propriedades fenotipicas e genotipicas foram pesquisadas com o proposito de caraterizar e comparar as amostras dentro e entre estes grupos. A habilidade de produzir uma agregado bacteriano (pelicula) na superficie de meio de cultura liquido foi investigado. Esta propriedade foi observada na maioria das amostras EAEC e variantes, entretanto parece que esta caracteristica fenotipica esta principalmente relacionada com amostras que abergam a sequencia EAEC (88,8 por cento versus 55,5 por cento, respectivamente). A reatividade com a sonda pVAP foi avaliada como um metodo alternativo para identificacao de amostras de E. coli pertencentes a categoria EAEC, mas a sensibilidade desta sonda genetica foi similar a da sonda EAEC (l7 por cento). A habilidade de aglutinar diferentes tipos de eritrocitos (humano do grupo sanguineo A, bovino, carneiro, galinha e cobaia) na presenca ou ausencia de D-manose foi tambem investigada. Metade das amostras EAEC deste estudo apresentou atividade hemaglutinante manose-resistente ) pelo menos a um dos 5 tipos de eritrocitos. E interessante destacar que a atividade foi mais frequentemente encontrada entre as amostras que reagiram com a sonda EAEC (64,7 por cento vs. 22,2 por cento nas amostras sonda EAEC negativas), um achado...(au)
- ItemSomente MetadadadosEscherichia coli enteroaderente e diarréia aguda e persistente em crianças: um estudo prospectivo de casos e controles em São Paulo(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Carvalho, Rozane de Lima Bigelli [UNIFESP]; Scaletsky, Isabel Cristina Affonso [UNIFESP]Quatro padroes de adesao a celulas epiteliais tem sido descritos em amostras de Escherichia coli causadoras de diarreia: adesao localizada (AL), adesao difusa (AD), adesao agregativa (AA) e adesao localizada like (ALL). A maioria dos trabalhos descritos na literatura e concordante em que somente as amostras apresentando o padrao AL (EPEC tipica) estao associadas com diarreia. Tem sido tambem demonstrado que a adesao do tipo AL e especifica dos sorotipos de EPEC associados a diarreia infantil. Amostras apresentando o padrao AD (DAEC) ou o padrao ALL (EPEC atipica), podem estar ou nao associados a diarreia. Amostras de EAEC poderiam estar relacionadas a diarreia persistente, embora em alguns estudos essas amostras tenham sido encontradas em portadores assimptomaticos. Este estudo teve como objetivo analisar a associacao entre os diferentes padroes de adesao de E. coli as celulas HEp-2 com diarreia aguda e persistente. Foram analisadas 40 criancas com diarreia, abaixo de 2 anos de idade, internadas para terapia de reidratacao nos hospitais São Paulo e Darcy Vargas, em São Paulo / SP. Como controles, foram utilizadas fezes de quarenta criancas pareadas por faixa etaria, internadas nestes mesmos hospitais, sem apresentarem quaisquer sintomas gastrointestinais nos trinta dias que precederam a coleta de suas fezes. Foram pesquisados os seguintes enteropatogenos: E. coli causadora de diarreia, Shigella, Salmonella, Yersinia enterocolitica, Campylobacter, Rotavirus, Adenovirus enterico e protoparasitas. Nas amostras de E. coli isoladas foram pesquisados os padroes de adesao (AL, AD, AA, ALL) as celulas HEp-2 e a homologia de seu DNA com as sondas de DNA para AL (EAF, eaeA), AA (sonda EAEC) e AD (sondas Fl845 e AIDA-I). Dos 40 casos de diarreia estudados, 28 apresentaram diarreia aguda (tempo maximo de duracao: 14 dias) e 12, diarreia persistente (tempo de duracao: acima de 14 dias). Os padroes AL e AA foram detectados em amostras de E. coli isoladas de casos de diarreia aguda e persistente com frequencia semelhante, nao tendo sido observados nos controles. Um total de 11,2 por cento amostras de E. coli isoladas foram EPEC tipicas (AL+, eaeA+, EAF+); 5,0 por cento foram EAEC (AA+) e hibridizaram com a sonda genetica EAEC. As amostras de E. coli que apresentaram adesao do tipo AD (DAEC) nao hibridizaram com as sondas geneticas para AD e sua frequencia foi semelhante tanto em casos (1O,O por cento), quanto em controles (7,5 por cento). Amostras ...(au)
- ItemSomente MetadadadosEscherichia coli enteroagregativa desprovida da sequencia da sonda EAEC: caracterizacao genetica e fenotipica e analise do reconhecimento de fracoes antigenicas por soro de criancas com diarreia(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Tomita, Sandra Kimie [UNIFESP]A categoria de Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) compreende amostras de E. coli que aderem a celulas HEp-2 e HeLa em um padrac caracteristico denominado adesao agregativa (AA). Um segmento criptico, obtidc de um plasmidio de alto peso molecular associado com AA na amostra prototipo 17-2, tem sido utilizado como sonda genetica (sonda EAEC) para a deteccao de amostras com o fenotipo. Entretanto, amostras produtoras de AA nao portadoras da sequencia EAEC (AA/-), tem sido descritas e seu significado epidemiologico em relacao as amostras sonda EAEC positivas (AA/+) ainda nao foi determinado. Por outro lado, em um estudo sobre a etiologia e a epidemiologia da diarreia persistente, foi verificado que amostras AA/- tem a mesma importancia na etiologia da doenca diarreica que amostras AA/+; alem disto, amostras AA/- foram responsaveis por alguns surtos de diarreia. Pouco se conhece sobre a producao de adesinas e toxinas em amostras AA/-, pois a maioria dos estudos envolvendo a pesquisa de fatores de virulencia potenciais de EAEC nao inclui amostras dessa natureza ou as inclui em numeros pouco significativos. Para contribuir para o conhecimento do potencial enteropatogenico das amostras AA/- e da categoria EAEC como um todo, foi analisada uma colecao de amostras AA/- isoladas na cidade de São Paulo, quanto a presenca de potenciais genes de virulencia (7 presentes em amostras prototipos de EAEC -17-2 e 042- e 5, em amostras de E. coli relacionadas a infeccoes extra-intestinais, aos sorotipos e aos perfis de resistencia a...(au)
- ItemSomente MetadadadosEstrutura clonal, antígenos O e H e fatores de virulência de amostras de Escherichia coli do sorogrupo 0111(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1994) Campos, Leila Carvalho [UNIFESP]; Trabulsi, Luiz Rachid [UNIFESP]
- ItemAcesso aberto (Open Access)Estudo da influência de fatores ambientais na interação de células epiteliais por uma amostra de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) atípica.(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Romao, Fabiano Teodoro [UNIFESP]; Gomes, Tania Aparecida Tardelli [UNIFESP]; Hernandes, Rodrigo Tavanelli [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/8376974115598584; http://lattes.cnpq.br/1704285823923729; http://lattes.cnpq.br/5572231018398705; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)As Escherichia coli enteropatogenicas (EPEC) sao agentes de diarreia humana, que produzem lesao denominada attaching/effacing (AE), a qual e caracterizada pelo apagamento das microvilosidades e aderencia intima bacteriana aos enterocitos. Essa lesao ocorre apos a interacao entre intimina (proteina de membrana externa bacteriana) e o seu receptor, Tir, que e translocado para celulas eucarioticas atraves do Sistema de Secrecao Tipo 3 (SST3). EPEC sao divididas em tipicas (tEPEC) e atipicas (aEPEC). tEPEC produz Bundle forming pilus (BFP), uma fimbria que medeia o padrao de aderencia localizada, que e caracterizado pela formacao de microcolonias bacterianas compactas sobre a superficie celular. Embora aEPEC sejam desprovidas de BFP, e portanto produzam microcolonias frouxas, nosso grupo identificou anteriormente algumas cepas de aEPEC produtoras do padrao AL compacto. Estudos anteriores da literatura mostraram que fatores ambientais podem regular genes que codificam fatores de virulencia, como por exemplo: producao de adesinas e proteinas do SST3. Neste estudo, foi avaliada a influencia de pH, glicose, concentracao de CO2 e presenca de sais biliares na interacao da aEPEC 1551-2 com celulas HeLa. Os resultados mostraram que sua efiCiência em aderir a celulas HeLa e maior entre os pH 7,2 e 8,0. Uma maior concentracao de CO2 promoveu aumento no numero de bacterias aderidas independentemente do pH. A taxa de crescimento bacteriano nao foi afetada pelas diferencas de pH e CO2. O padrao AL foi mantido no DMEM com 5 mM de glicose, independentemente da concentracao de CO2. A presenca de sais biliares nao promoveu alteracoes na interacao bacteriana na concentracao usada. Alem disso, com o aumento da concentracao de glicose, aEPEC 1551-2 aderiu com um padrao de aderencia hibrido: AL e agregativo-like. Este padrao e provavelmente associado com a producao de fimbria tipo 1 (T1P), ja que o mutante isogenico em T1P nao adere mais de forma hibrida, mantendo somente o padrao AL anteriormente descrito. Neste estudo, foi demonstrado que o numero de bacterias aderidas sobre as celulas HeLa foi influenciado pelas variacoes de pH e CO2, mas nao pela concentracao de glicose ou presenca de sais biliares. Alem disso, o padrao AL de aEPEC 1551-2 pode ser alterado para um padrao hibrido AL e AA-like com o aumento da concentracao de glicose, e este evento ocorre devido a presenca de T1P
- ItemSomente MetadadadosEstudo de fatores de virulencia em amotras de Providencia sp. isoladas de fezes humanas(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1994) Perrella, Edilene [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosPesquisa de fatores de virulencia em amostras de enterobacter spp(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1995) Keller, Rogeria [UNIFESP]