Navegando por Palavras-chave "Canais de cálcio"

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    NAADP: um novo segundo mensageiro mobilizador de Ca2+ regulador da autofagia
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-04-30) Pereira, Gustavo José da Silva [UNIFESP]; Smaili, Soraya Soubhi [UNIFESP]; Hirata, Hanako [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7792303042828018; http://lattes.cnpq.br/6368730022418127; http://lattes.cnpq.br/7125107888186769; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    O ácido nicotínico adenina dinucleotídeo fosfato (NAADP) tem sido reportado como um importante mobilizador de Ca2+ intracelular, porém seu modo de ação e seu papel na autofagia ainda estão sob discussão. Estudos mais recentes mostraram que as proteínas da família dos canais Two-Pore Channels (TPCs) podem estar em membranas endolisossomais atuando como possíveis receptores do NAADP. Além disso, mostrou-se que o neurotransmissor glutamato é um agonista dos receptores do NAADP pois apresentou potencial liberativo de Ca2+ dos lisossomos e foi capaz de aumentar os níveis citosólicos de NAADP. Sendo a autofagia uma via de degradação dependente dos lisossomos, o objetivo do nosso trabalho foi estudar a sinalização de Ca2+ mediada pelo NAADP e a sua correlação com a via autofágica regulada por ele e pelo glutamato. No presente trabalho, foi mostrado que NAADP ativa os canais TPCs localizados em membranas endolisossomais, principalmente a isoforma TPC2. A interação de NAADP com os TPCs levou à liberação de Ca2+ estocado em organelas ácidas, que foi bloqueada pelo antagonista de seus receptores, Ned-19. O NAADP-AM, análogo permeante do NAADP, (1 µM e 100 nM) e o glutamato (10 µM) regularam a autofagia, uma vez que os níveis de LC3II foram dependentes do tempo e potencializados pelos tratamentos com inibidores lisossomais (E64d/Pepstatina A). No entanto, Ned-19 (1 µM) não foi capaz de promover um acúmulo de LC3II após o tratamento com E64d/Pepstatina A. Além disso, o NAADP-AM, o Ned-19 e o glutamato induziram o aumento do número de pontuações de LC3 em vermelho (autolisossomos). Adicionalmente, demonstrou-se que o NAADP-AM e o glutamato modularam a autofagia independentemente da mTOR, via sinalização Ca2+/AMPK/ACC, enquanto o Ned-19 inibiu a via autofágica no estágio final, a degradação. O Ned-19, por si só, induziu o acúmulo de LC3II, e foi capaz de bloquear a formação de LC3II mediada pelo glutamato, sendo acompanhado pela inibição da via da AMPK. Pelo fato dos receptores TPCs serem canais sensíveis ao NAADP localizados nos lisossomos, os seus efeitos foram examinados sob ativação do NAADP-AM ou glutamato na formação de autofagossomos em células superexpressando TPC1 ou TPC2. Assim, o NAADP-AM e o glutamato, de fato, induziram o acúmulo de LC3II em células TPC1 ou TPC2, o que não foi evidenciado para o p62. A fim de confirmar essa regulação dos TPCs na via autofágica, o fluxo autofágico foi estudado em astrócitos ou em células SHSY5Y silenciadas para cada uma da isoforma TPC. Esses silenciamentos foram capazes de diminuir a formação de LC3II induzidas tanto pelo NAADP como pelo glutamato, e evitou a elevação da expressão de p62. Portanto, nossos dados demonstraram que a ativação da sinalização NAADP/TPCs/Ca2+ modula a autofagia induzida pelo glutamato em duas etapas da autofagia, a primeira, na formação do LC3, seguido de degradação de p62. Essas evidências sugerem que as vias de sinalização do NAADP e glutamato na autofagia contribuirão para a compreensão dos mecanismos mediados pelo recrutamento de estoques de Ca2+ sensíveis ao NAADP pelo glutamato sugerindo um possível papel fisiológico da sinalização NAADP/TPCs no sistema nervoso central.
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    Participação dos canais de k+ na neurotransmissão simpática em músculo liso de animais hipertensos genéticos
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Borges, Fernanda Teixeira [UNIFESP]; Caricati-Neto, Afonso [UNIFESP]
    Os objetivos principais do presente estudo eram verificar o papel dos canais de K+ na neurotransmissao simpatica e estudar alteracoes nesta neurotransmissao no ducto deferente de animais hipertensos. Assim sendo as principais observacoes verificadas no presente estudo no ducto deferente de S H R foram: 1) Alteracao do componente purinergico possivelmente associado a hiperreatividade dos P2x-purinoceptores pos-sinapticos. 2) Aumento do componente adrenergico, com aumento da liberacao de Na na fenda sinaptica, associado a hiperreatividade dos ai-adrenoceptores possinapticos. 3) Nao foi observada alteracao dos (X2-adrenoceptores pre-sinapticos. 4) Subsensibilidade dos receptores purinergicos P, pre-sinapticos inibitorios. 5) Hiperreatividade dos canais de K- KA, BKca, e SKca e diminuicao na atividade dos canais KATP em ducto deferente de animais hipertensos. Estas observacoes indicam que a neurotransmissao e os canais de K+ estao alterados no ducto deferente de SHR. Uma vez que estes canais exercem importantes funcoes na modulacao da neurotransmissao no ducto deferente rato, alteracoes destes canais podem contribuir no desenvolvimento da hipertensao
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    Regulação dos canais de cálcio voltagem-dependentes pelo tratamento crônico com nifedipina no ducto deferente de rato e no fundus de estômago
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Verde, Luciana Ferreira [UNIFESP]; Jurkiewicz, Neide Hyppolito [UNIFESP]
    Nosso objetivo foi estudar os efeitos decorrentes do tratamento cronico com um antagonista dos canais de calcio voltagem-dependentes do tipo L, no caso a nifedipina, sobre a expressao e a funcao destes canais apos a suspensao do tratamento. Para isto utilizamos dois tipos de musculatura lisa: o ducto deferente e o fundus de estomago provenientes de ratos tratados com nifedipina durante o periodo de vida infantil (do 7§ ao 28§ dia de vida pos-natal) e adulto (por 5 ou 15 dias). Os experimentos foram realizados em animais com 40, 60 e 120 dias de idade tratados durante o periodo infantil, ou seja, 10, 30 e 60 dias apos a suspensao da medicacao, ou entre o 10 e 60 dia de suspensao, quando o tratamento foi feito em animais adultos. A expressao dos VDCCs foi avaliada atraves da ligacao da 3H-isradipina, antagonista dos canais, pela metodologia de receptor-binding enquanto a funcao dos canais foi estudada atraves de experimentos funcionais usando agonistas que contraem a musculatura por mecanismos diferentes. Os principais resultados obtidos foram: 1. O tratamento com nifedipina durante o periodo de vida infantil (entre o 7§ e 28§ dia de vida) produziu, nos DDRS, um aumento da densidade de VDCCs do tipo L, de 34 e 40 por cento, medidos respectivamente 10 e 30 dias apos a suspensao do tratamento. Nos DDRs 90 dias apos a cessacao do tratamento, (animais com 120 dias de idade), este aumento nao foi mais visualizado. 2. Nos DDRS, 10 e 30 dias apos a suspensao do tratamento dos ratos infantis com nifedipina, houve aumento de resposta aos agonistas BaCl2, KCl (animais com 40 e 60 dias) e MeCh (so animais com 60 dias). A isradipina bloqueou completamente estas respostas sugerindo uma relacao direta entre o aumento na densidade dos canais e nas resposta contrateis. 3. A resposta da NOR no DDR nao foi modificada pelo tratamento com nifedipina apesar de ter sido abolida pela isradipina. A existencia de alguma alteracao compensatoria pode estar envolvida. 4. Um aumento na atividade simpatica, por aumento da concentracao de noradrenalina liberada ou no processo de liberacao, fica excluido uma vez que o tratamento de ratos infantis com nifedipina nao alterou a resposta do agonista de acao indireta, tiramina. 5. No fundus de estomago, cerca de 20 a 40 por cento da resposta contratil ao BaCl2 e ao KCI independe da entrada de Ca++ pelos VDCCs do tipo L porque nao e abolida pela isradipina. Entretanto, da mesma forma que ocorreu no DDR, verificou-se um ...(au)