Navegando por Palavras-chave "Caspase-1"

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    Papel do inflamassoma NAIP/NLRC4 na infecção por Trypanosoma cruzi
    (Universidade Federal de São Paulo, 2022-11-10) Amaral, Marcelo Pires [UNIFESP]; Bortoluci, Karina Ramalho [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/0159648961678651; http://lattes.cnpq.br/1246712263704416
    Inflamassomas são plataformas citosólicas multiproteicas recrutadoras da protease caspase-1 capaz de induzir a maturação das citocinas inflamatórias IL-1b e IL-18 e também da proteína efetora de morte celular programada por piroptose denominada gasdermina-D (GSDM-D). Os inflamassomas NLRP3 e NAIP/NLRC4 estão entre os mais estudados em contextos infecciosos. O inflamassoma NLRP3 parece ser ativado indiretamente por distúrbios citosólicos comuns induzidos por um amplo espectro de estímulos estéreis e infecciosos, enquanto a ativação do inflamassoma NAIP/NLRC4 em infecções bacterianas se inicia com a interação direta entre NAIP e seus agonistas, como flagelina ou proteínas do sistema de secreção. No entanto, a participação de NLRC4 em resposta a estímulos estéreis e em infecções não-bacterianas vem ganhando destaque na literatura, porém o mecanismo de ativação nesses contextos ainda não é conhecido. Neste trabalho, verificamos que a produção de IL-1b em resposta ao Trypanosoma cruzi (mas não em resposta ao Toxoplasma gondii) depende de NAIP e NLRC4. Maior carga parasitária foi observada em macrófagos Naip1-7-/- e Nlrc4-/-, indicando a participação dessas moléculas na capacidade tripanocida dessas células. A indução transcricional do gene da enzima iNOS e produção de NO parecem ser o mecanismo efetor pelo qual NAIP/NLRC4 controla a replicação de T. cruzi. Antígenos solúveis e vesículas extracelulares de T. cruzi não foram capazes de ativar os inflamassomas, ao contrário dos tripomastigotas vivos, sugerindo o envolvimento de distúrbios citosólicos induzidos por eles nesse processo. De acordo, a produção de IL-1b e NO foi completamente dependente de catepsinas lisossomais, mas não de efluxo de K+ e produção de ROS. A inibição de catepsinas não interferiu com a indução de pro-IL-1b e nem com a formação de punctas de ASC, indicando sua atividade downstream à montagem do inflamassoma. De fato, a inibição farmacológica das catepsinas reduziu significativamente a maturação de caspase-1 durante a infecção por T. cruzi. Finalmente, a produção de IL-1b e NO foram compativelmente prejudicadas nos macrófagos Nlrp3-/-, Nlrc4-/- e Nlrc4-/- /Nlrp3-/- frente a isolados de T. cruzi da cepa Y de alta e baixa virulência, mostrando que NAIP/NLRC4 e NLRP3 apresentam respostas efetoras não-compensatórias e não-redundantes, e inclusive sugerindo que possam atuar na mesma via. Em conjunto, os resultados apresentados aqui demonstram o papel não-convencional do inflamassoma NAIP/NLRC4 no controle da infecção por T. cruzi e indicam a dependência de sinais provenientes da célula hospedeira (catepsinas) para sua ativação, promovendo novas perspectivas em como esta plataforma imune atua além de infecções bacterianas.
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    Papel do inflamassoma NLRC4 na indução e secreção de IL-1alpha em resposta à flagelina
    (Universidade Federal de São Paulo, 2014-08-29) Freitas, Carla Longo de [UNIFESP]; Bortoluci, Karina Ramalho [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The flagellin monomer, structural protein that composes a subunit of bacterial flagellum, is recognized by the innate immune system by TLR5, but is transported to cytosol by secretion system of pathogenic bacterias where it is capable to active the NAIP5/NLRC4 inflammasome. The NAIP5/NLRC4 inflammasome can also contain the adaptor molecule ASC, inducing particular responses according to the formed complex. NLRC4 inflammasomes that recruit the adaptor molecule ASC induce autoproteolytic cleavege of caspase-1 and IL-1β and IL-18 pro-cytokines processing. In a different manner, NLRC4 ASC-independent inflammasomes activate caspase-1 but do not induce an autoproteolytic cleavage, leading to a rapid cell death by pyroptosis. In the last years, our group has been studying new effector mechanisms triggered by cytosolic flagellin, such as the release of the damage associated molecular pattern, IL-1α. Recent data suggest inflammasomes are involved in IL-1α secretion, however, little is known about this cytokine regulation. In this work, we demonstrate that cytosolic flagellin is capable of induce IL-1α secretion in a NLRC4, ASC and caspase-1 partially dependent manner. Interestingly, cytosolic flagellin also was capable of induce IL-1α production in cells lysates. However, this effect was not altered in the absence of NLRC4. Furthermore the induction of IL-1α secretion in response to cytosolic flagellin was inhibited in the presence of CA074-Me, pharmacological inhibitor of cathepsin B,a lysossomal enzyme, suggesting that more than one pathway can be triggered by cytosolic flagellin to induce production of IL-1α. Finally, we performed an assay that allowed us to evaluate secretion of IL-1α and cellular viability all together. Our data suggest that induction of IL-1α secretion in response to cytosolic flagellin envolves different molecular machineries. Still, secretion of IL-1α seems to preceed cell detah or occurs in a cell death independent manner, a fact that defy previous data tha indicate passive release of this cytokine by dead cells.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Papel dos inflamassomas no controle da infecção por Trypanosoma cruzi
    (Universidade Federal de São Paulo, 2013-07-30) Gonçalves, Virginia Mendes [UNIFESP]; Bortoluci, Karina Ramalho [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Demonstramos pela primeira vez que a infecção pelo T. cruzi induz a produção de IL-1β de uma forma dependente NLRP3 e caspase-1. Camundongos NLRP3-/- e caspase1-/-apresentaram um elevado número de parasitas, apresentando picos de parasitemia mais altos do que animais MyD88-/-, indicando o envolvimento do inflamassoma NLRP3 no controle da fase aguda da infecção pelo T. cruzi. As citocinas inflamatórias IL-6 e IFN-γ foram encontradas nas culturas de esplenócitos de NLRP3-/- e caspase1-/- infectados com T. cruzi. Porém essas células apresentaram uma deficiência na produção de óxido nítrico (NO), que reflete na permissividade de seus macrófagos à replicação do T. cruzi. Curiosamente, a inibição da caspase-1, z-YVAD-fmk, mas não a presença do antagonista de IL-1R (IL-1Ra) aboliram a produção de NO em macrófagos WT e MyD88-/ - e os tornaram mais susceptíveis como as células do NLRP3-/ - e caspase-1-/-. Além disso, a catepsina B parece ser necessária para a ativação de NLRP3 em resposta ao T. cruzi, uma vez que a sua inibição farmacológica aboliu a secreção de IL-1β e NO. Tomados em conjunto os nossos resultados demonstram o papel do inflamassoma NLRP3 no controle da infecção pelo T. cruzi, demonstrando que NLRP3, por uma via dependente de caspase-1 e independente de IL-1R, induz a produção de NO, atribuindo um novo mecanismo efetor para estes receptores.