Papel do inflamassoma NAIP/NLRC4 na infecção por Trypanosoma cruzi
Data
2022-11-10
Autores
Amaral, Marcelo Pires 
Orientadores
Bortoluci, Karina Ramalho
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Resumo
Inflamassomas são plataformas citosólicas multiproteicas recrutadoras da protease caspase-1 capaz de induzir a maturação das citocinas inflamatórias IL-1b e IL-18 e também da proteína efetora de morte celular programada por piroptose denominada gasdermina-D (GSDM-D). Os inflamassomas NLRP3 e NAIP/NLRC4 estão entre os mais estudados em contextos infecciosos. O inflamassoma NLRP3 parece ser ativado indiretamente por distúrbios citosólicos comuns induzidos por um amplo espectro de estímulos estéreis e infecciosos, enquanto a ativação do inflamassoma NAIP/NLRC4 em infecções bacterianas se inicia com a interação direta entre NAIP e seus agonistas, como flagelina ou proteínas do sistema de secreção. No entanto, a participação de NLRC4 em resposta a estímulos estéreis e em infecções não-bacterianas vem ganhando destaque na literatura, porém o mecanismo de ativação nesses contextos ainda não é conhecido. Neste trabalho, verificamos que a produção de IL-1b em resposta ao Trypanosoma cruzi (mas não em resposta ao Toxoplasma gondii)
depende de NAIP e NLRC4. Maior carga parasitária foi observada em macrófagos Naip1-7-/- e Nlrc4-/-, indicando a participação dessas moléculas na capacidade tripanocida dessas células. A indução transcricional do gene da enzima iNOS e produção de NO parecem ser o mecanismo efetor pelo qual NAIP/NLRC4 controla a replicação de T. cruzi. Antígenos solúveis e vesículas extracelulares de T. cruzi não foram capazes de ativar os inflamassomas, ao contrário dos tripomastigotas vivos, sugerindo o envolvimento de distúrbios citosólicos induzidos por eles nesse processo. De acordo, a produção de IL-1b e NO foi completamente dependente de catepsinas lisossomais, mas não de efluxo de K+ e produção de ROS. A inibição de catepsinas não interferiu com a indução de pro-IL-1b e nem com a formação de punctas de ASC, indicando sua atividade downstream à montagem do inflamassoma. De fato, a inibição farmacológica das catepsinas reduziu significativamente a maturação de caspase-1 durante a infecção por T. cruzi. Finalmente, a produção de IL-1b e NO foram compativelmente prejudicadas nos macrófagos Nlrp3-/-, Nlrc4-/- e Nlrc4-/- /Nlrp3-/- frente a isolados de T. cruzi da cepa Y de alta e baixa virulência, mostrando que NAIP/NLRC4 e NLRP3 apresentam respostas efetoras não-compensatórias e não-redundantes, e inclusive sugerindo que possam atuar na mesma via. Em conjunto, os resultados apresentados aqui demonstram o papel não-convencional do inflamassoma NAIP/NLRC4 no controle da infecção por T. cruzi e indicam a dependência de sinais provenientes da célula hospedeira (catepsinas) para sua ativação, promovendo novas perspectivas em como esta plataforma imune atua além de infecções bacterianas.
Descrição
Citação
AMARAL, M. P. Papel do inflamassoma NAIP/NLRC4 na infecção por Trypanosoma cruzi. São Paulo, 2022. 122 f. Tese ( Doutorado em Microbiologia e Imunologia) - Escola Paulista de Medicina (EPM), Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). São Paulo, 2022.