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    Análises morfofuncionais, bioquímicas e moleculares de modelo experimental de miopatia associada à estatina
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-03-06) Andrade, Pamela Vieira de [UNIFESP]; Silva, Helga Cristina Almeida da [UNIFESP]; Silva, Ismael Dale Cotrim Guerreiro da [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7917312029683516; http://lattes.cnpq.br/0844918862241102; http://lattes.cnpq.br/3536599065009604; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introdução: As estatinas atualmente são consideradas os agentes mais úteis para o tratamento da hipercolesterolemia. Nos últimos anos, aumentaram os relatos sobre efeitos colaterais importantes no músculo esquelético, com mialgia, aumento dos valores séricos de creatinoquinase (CK) e até rabdomiólise após uso de altas doses dessas medicações. O reconhecimento precoce da miopatia induzida pelas estatinas e a descontinuação das estatinas é fundamental na prevenção da miopatia e diminuição de possíveis sequelas. Objetivos: 1. Estudar o efeito da estatina sobre a contração e contratura muscular em ratos expostos a baixas e altas concentrações da sinvastatina 2. Correlacionar essas alterações com a morfologia, bioquímica e proteômica da fibra muscular e 3. Analisar o uso do bloqueador de canal de liberação de cálcio (dantrolene) no presente modelo. Material e Métodos: O estudo foi realizado com 50 ratos machos Wistar, divididos em 5 grupos: A - Controle; B - Estatina baixa dose (5 mg/kg/dia); C - Estatina alta dose (20 mg/kg/dia); D – Sem estatina, com dantrolene (5 mg/Kg); E – Estatina alta dose (20 mg/kg/dia) e dantrolene (5 mg/Kg). Os animais dos grupos B, C e E receberam a sinvastatina diariamente, diluída com carboximetilcelulose (CMC) 0,5%, via gavagem, por dois meses; os do grupo A e D receberam apenas o veículo (CMC), via gavagem, por dois meses; os dos grupos D e E receberam ainda dantrolene (5 mg/Kg) via subcutânea por dois meses. Os animais foram pesados semanalmente, sendo anotado o consumo da dieta líquida e sólida diariamente; a cada sete dias foram realizados exames físico e neurológico. Após dois meses, os animais foram anestesiados para a retirada dos músculos vastos laterais, gastrocnêmios e sóleos. Com os vastos laterais foram realizados testes de estimulação elétrica in vitro em presença de halotano e cafeína - nos quais as curvas de contração e contratura de cada teste foram analisadas - e teste de estimulação tetânica pré e pós-isquemia - referido como grau de contração após cada estímulo elétrico. Com os gastrocnêmios e os sóleos foi realizado estudo morfológico (histologia e morfometria). O gastrocnêmio foi empregado ainda para estudo bioquímico, feito pela quantificação do malonaldeído (MDA), e análise proteômica por espectrometria de massas. Resultados: Na estimulação elétrica in vitro na presença de cafeína, houve aumento significativo nos valores de contração nas concentrações de 1; 1,5; 2; 3, 4 e 32 mM de cafeína do grupo C em relação aos outros grupos. Não houve diferença significativa da contração em resposta a diferentes concentrações de halotano e a diferentes estimulações tetânicas pré e pós-isquemia, bem como não houve diferença no grau de contratura após vários estímulos. Houve aumento significativo na produção de MDA no grupo C em relação ao grupo B. O estudo morfológico qualitativo mostrou, na reação do Tricrômico de Gomori, pequenos aglomerados fucsinofílicos grosseiros na periferia das fibras musculares, vistos mais uniformemente no grupo C. Na análise morfométrica do músculo gastrocnêmio, pela coloração de hematoxilina/eosina, houve diminuição significante da área transversa das fibras musculares no grupo C em relação aos grupos D e E. Na análise proteômica houve aumento significativo da expressão das proteínas glicolíticas nos grupos tratados com estatina. Conclusão: Nossos dados mostraram que, apesar dos animais não apresentarem miopatia clínica evidente, doses de estatina de 20 mg/Kg/dia aumentaram a contração muscular após estímulo com cafeína, provocaram alterações morfológicas mitocondriais com atrofia do músculo gastrocnêmio e aumentaram a peroxidação lipídica no músculo.
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    Caracterização de Aspergillus spp. no cenário clínico brasileiro, modelos experimentais de aspergilose invasiva e avaliação farmacológica dos novos compostos F901318 e APX001A
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-12-11) Negri, Clara Ezequiel [UNIFESP]; Colombo, Arnaldo Lopes [UNIFESP]; Hope, William; http://lattes.cnpq.br/4512261018429681; http://lattes.cnpq.br/9300997857265211; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Aspergillus is a mould genus frequently isolated in cases of fungal infections among patients at tertiary hospitals worldwide. Currently, the genus is composed of about 350 species, being more than 40 already described as a human pathogen in diverse clinical syndromes. In general, A. fumigatus is the most prevalent species causing invasive aspergillosis (IA) in Brazil and worldwide. The Brazilian scenario regarding cryptic and rare Aspergillus species presenting intrinsical resistance to antifungal drugs, as well as A.fumigatus resistance to triazoles is not known. Due antifungal resistance reported in some countries, multiple drug-drug interactions and considerable toxicity of Amphotericin B, new compounds, with new therapeutical targets are urgently required. In addition, there is also interest for experimental models standardization that allows the determination of pharmacokinetics (PK) and pharmacodynamics (PD) parameters associating efficiency of the drug in different therapeutic regimens. Therefore the articles presented in the present study aims to characterize Aspergillus species distribution and susceptibility profile in the Brazilian clinical scenario, verify the presence of acquired triazole resistance, developed new experimental IA models applied to analyses of therapeutic response and evaluate PD of two new compounds, F901318 (F2G Ltd) and the active moiety APX001A (APX001 pro-drug) (Amplyx Ltd) using a diversity of IA experimental models. Article 1: The purpose of this study was to analyse the distribution of cryptic and rare Aspergillus species among clinical samples from 133 patients admitted in 12 medical centres in Brazil and to analyse the in vitro activity of different antifungal drugs. The identification of Aspergillus species was performed based on a polyphasic approach, as well as sequencing analysis of the ITS region, calmodulin and β-tubulin genes and phylogenetic analysis when necessary. The in vitro susceptibility tests with voriconazole, posaconazole and itraconazole were performed according to the CLSI M38-A2 document (2008). We were able to demonstrate a high prevalence of cryptic species (19%) causing human infection, and three isolates represented by species A. thermomutatus, A. ochraceus and A. calidoustus showed less in vitro susceptibility to at least one of the triazoles tested. Article 2: Here we evaluated the in vitro antifungal susceptibility of 221 clinical A. fumigatus isolate, from 6 medical centres in Brazil according to CLSI M38 A-2 guidelines. Sixty-one isolates (27%) exhibiting MIC xix at the epidemiological cut-off value (ECV) for itraconazole or above ECV for any triazole were checked for CYP51A mutations. No mutations were documented, indicating that triazoles may be safely used to treat aspergillosis in Brazil. Article 3: F901318 (F2G Ltd) is the leading representative of a novel class of drug, the orotomides, is an antifungal drug in clinical development. Novel experimental in vitro (static and dynamic) and in vivo (murine) models of sinopulmonary infections caused by A. flavus were developed to evaluate F901318 PD using galactomannan (GM) and histopathology as models’ readout. Mathematical models were used to correlate F901318 exposure-response. All novel experimental models demonstrated to be an efficient tool for pharmacological analyses of antifungal drugs. F901318 is a potential new agent for the treatment of invasive infections caused by Aspergillus flavus with PDs that are comparable to other first-line triazole agents. Article 4: APX001A (Amplyx Ltd) is the active moiety of the new compound APX001, with action in the fungus cell wall. The pharmacodynamic of APX001A was analysed according to EUCAST susceptibility tests and in a static in vitro model of IPA caused by an A. fumigatus wild-type strain as well as strains carrying mutations related to triazole resistance. Galactomannan index (GMI) was used as PD readout. The Minimal effective concentration of 0.03 mg/L was obtained for all isolates and the concentration-dependent decline was observed in a static model, which ≤ 0.5 mg/L caused near maximal GMI suppression in the endothelial compartment of the static model for all isolates tested, showing a potential use of APX001 for IPA treatment.
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    Polycomb & Trithorax uma análise da expressão gênica do cérebro de camundongos fêmeas obesos transplantados com tecido adiposo gonadal de fêmeas magros
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-05-30) Freitas, Eduardo Henrique da Silva [UNIFESP]; Silva, Ivaldo da [UNIFESP]; Silva, Ismael Dale Cotrim Guerreiro da [UNIFESP]; Noronha, Samuel Marcos Ribeiro de; http://lattes.cnpq.br/7917312029683516; http://lattes.cnpq.br/0133865875414003; http://lattes.cnpq.br/9948402316193744; http://lattes.cnpq.br/4325121483090112; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    The Polycystic Ovary Syndrome (PCOS) is the most common androgenic disorder in women during reproductive life. PCOS may also be accompanied by metabolic syndrome and recent studies points to leptin as playing a role in disrupting infertility and in changing the energy balance in obese mice through its action on the hypothalamus. The aim is to assess the expression of the Polycomb & Trithorax Complexes genes in the brain of mice, transplanted with fat tissue from normal mice, to better understand the neuronal molecular mechanisms underlying the reversion of PCOS. Brain material of four B6 V-Lepob/J mouse groups is used: norma! weight, obese (control), 7 days treated obese and 45 days treaded obese. AH have their brain RNA extracted and submitted to an 84 Polycomb & Trithorax complexes genes PCR array plate and MetaCore™ software for canonical pathways localization. Genomic profiles obtained are compared to the ones of the control group and presented differentially expressed genes of 25% and 10,7% at 7 and 45 days, respectively, after the treatment. At 7 days, 90,5% presented hyper-regulated and 9,5% hypo-regulated and, finally, at 45 days 100% presented hyper-regulated. The major changes occur in genes: Snail l 36,1; Smarcal l -14,3; Ctbp2 l 5,7; Ezh1 i 5,65; Rnasel l 5,51 and Dnml3b l 5,50. Expressly-altered genes are associated to canonical pathways and provide three networks related to epigenetics. Underlying neuronal changes caused by íeptin in obese-mice brain, there is an important role played by the histone code. Here is shown evidence that leptin drives the chromatin packing to a more condensed pattern. Upregulation of methyltransferase genes, like Ezh1, favors this thought. In summary, the Polycomb & Trithorax complexes might answer for the silencing of some downregulated genes in the obese mice brain when exposed to leptin.
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    Terapia intravenosa com células-tronco derivadas de tecido adiposo (ADSC) de ratas com trauma vaginal : uma avaliação da musculatura uretral quanto aos aspectos histopatológicos e à expressão imunohistoquímica de MYH11, MYH2 e desmina
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017) Sé, Alexandre Brandão [UNIFESP]; Castro, Rodrigo de Aquino [UNIFESP]; Bortolini, Maria Augusta Tezelli; http://lattes.cnpq.br/1150368284144393; http://lattes.cnpq.br/6590913930590292; http://lattes.cnpq.br/4355231135859354; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objetivo: Analisar, no trigésimo dia pós-trauma, o efeito da injeção intravenosa de ADSC na uretra de ratas 72 horas após a realização de trauma por distensão vaginal. A análise foi realizada por meio de avaliação histopatológica e da expressão imunohistoquímica das proteínas MYH11, MYH2 e Desmina. Métodos: As ratas foram divididas em grupos Controle, distensão vaginal (VD) sem tratamento (trauma) e distensão vaginal seguido por uma injeção de ADSCs na veia da cauda da rata (trauma + ADSC). Os grupos com VD foram sacrificados 30 dias após o trauma. As uretras foram incubadas com anticorpos primários dirigidos contra desmina, miosina de cadeia pesada de músculo estriado (MYH2) e miosina de cadeia pesada de músculo liso (MYH11). Foram realizadas duas análises nos três diferentes grupos (Controle, Trauma e Trauma + ADSC). A primeira análise foi histopatológica qualitativa. A segunda, foi uma avaliação imunohistoquímica, que denominamos de quantitativa. Resultados: A avaliação histopatológica no trigésimo dia após o trauma mostrou que as uretras das ratas do grupo Trauma apresentaram maior edema, dissociação das fibras musculares e alargamento do lúmen em relação às uretras das ratas controle e das tratadas com células-tronco. As uretras de ratas tratadas com células-tronco apresentaram maior espessura das camadas musculares (miosina de cadeia pesada do músculo liso e estriado e desmina) em relação aos grupos Controle e Trauma. Nesse mesmo período, a expressão imunohistoquímica de MYH11, MYH2 e Desmina não mostrou diferenças estatísticas significativas entre os grupos Controle, Trauma e Trauma + ADSC (p=0,43; p=0,48 e p=0,54) respectivamente. Conclusão: Na avaliação qualitativa após trinta dias do trauma simulado e a injeção na veia da cauda da rata de ADSC observamos uma recuperação do tecido uretral. Já na avaliação quantitativa das proteínas musculares MYH11, MYH2 e Desmina não observamos alterações estatisticamente significativas.