Navegando por Palavras-chave "Genetic engineering"

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    Acesso aberto (Open Access)
    Angiogênese da retina e coroide : biomarcadores e engenharia genética
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-11-30) Silva, Thiago George Cabral [UNIFESP]; Mattos, Rubens Belfort [UNIFESP]; Lima, Luiz Henrique Soares Gonçalves de [UNIFESP]; Regatieri, Caio Vinicius Saito [UNIFESP]; Luiz Henrique Soares Gonçalves de Lima : http://lattes.cnpq.br/0399713306487727; Caio Vinicius Saito Regatieri : http://lattes.cnpq.br/3274977342997227; http://lattes.cnpq.br/4270399167335564; http://lattes.cnpq.br/6865877242594519; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Objetivo: Comparar a concentração do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) no humor aquoso antes e após uma única injeção intravítrea de bevacizumabe (IVB) e estudar a concentração de 19 moléculas angiogênicas antes e após três IVBs mensais em olhos com doença macular relacionada à idade (DMRI) exsudativa, apontando os principais grupos de moléculas pró e antiangiogênicas e, ainda, descrevendo tratamentos de engenharia genética como o futuro terapêutico da angiogênese ocular, em especial o uso do CRISPR. Métodos: Na primeira publicação, pacientes com DMRI exsudativa foram tratados com uma única injeção (1,25 mg/0,05 mL). Amostras de humor aquoso foram obtidas antes da injeção, em uma semana, um mês e três meses de seguimento. Na segunda publicação, pacientes com DMRI exsudativa foram tratados com IVB mensal (1,25 mg/0,05 mL). Foram analisadas as concentrações de 19 moléculas angiogênicas a partir de amostras do humor aquoso obtidas antes de cada IVB. Parâmetros clínicos foram analisados para ambos os estudos. Foi realizada uma revisão da literatura das principais moléculas relacionadas à neovascularização da retina e coroide, das terapias antiangiogênicas oculares disponíveis e de tratamentos promissores em desenvolvimento. Resultados: Na primeira publicação, os níveis do VEGF reduziram e a acuidade visual (AV) melhorou significativamente em todos os períodos de acompanhamento, quando comparados à linha de base. A menor expressão do VEGF foi observada em uma semana e a mais intensa melhora da AV ocorreu um mês após o tratamento. Todos os parâmetros avaliados na tomografia de coerência óptica (OCT) apresentaram redução significativa no primeiro mês. Na segunda publicação, observou-se uma diminuição significativa do VEGF-A nos seguimentos de um e dois meses, com aumento significativo na concentração de sete moléculas: angiopoietina-2, endotelina-1, folistatina, fator de crescimento semelhante ao fator de crescimento epidérmico de ligação à heparina, fator de crescimento de hepatócitos, interleucina-8 e fator de crescimento endotelial vascular-C. Houve melhora da AV aos dois meses e redução dos parâmetros do OCT em todos os períodos do estudo. Na terceira publicação, observaram-se 16 grupos de potenciais moléculas-alvo contra a neovascularização da retina e coroide, com 26 ensaios clínicos em andamento, sendo sete de terapias combinadas e utilização de vetores virais. A terapia genética modificou genes relacionados a doenças retinianas, diminuiu a ligação de fatores angiogênicos e a expressão do receptor do VEGF em lesões vasoproliferativas. Conclusões: Uma única IVB diminui significativamente os níveis do VEGF após uma semana do tratamento, com a melhora clínica ocorrendo após um mês. Ao analisarmos 19 moléculas, apesar da diminuição expressiva do VEGF-A, os níveis de sete moléculas pró-angiogênicas aumentaram significativamente após IVB. Não obstante a melhora na espessura da retina ocorrer logo no primeiro mês, a melhora da acuidade visual aconteceu aos dois meses. A combinação de inibição/estimulação de diferentes vias, na tentativa de controlar as complexas interações entre as moléculas relacionadas à angiogênese pode ser um futuro promissor no tratamento da neovascularização ocular. A engenharia genética, em especial o sistema CRISPR, tem potencial para se tornar um importante método no tratamento da DMRI exsudativa.
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    Engenharia genética de um sistema de expressão duradoura e seletiva do VEGF para condição isquêmica baseado no sistema integrase C31 e HRE
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2010-05-26) Yasumura, Eduardo Gallatti [UNIFESP]; Han, Sang Won [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Peripheral arterial disease is characterized by insufficient blood flow to the extremities and affects more than 10 million people worldwide and can occur strong pain, non-healing ulcers and loss of limb. With the aim to help these patients, gene therapy has been presented new studies to stimulate the process of neoangiogenesis by injecting genes that encode growth factors. Among the problems used in gene therapy for ischemic diseases, lack of expression of transgenes is the main. Most used vectors, because of the lack of expression levels, can lead to pathological processes of angiogenesis. The ideal vector for this condition would be one who possessed a mechanism of recognition of the ischemic condition to regulate the expression of the transgene and at the same time be integrated into the host cell genome perpetuating their action. Thus, the duration of gene expression would be long enough for the recovery of ischemic tissue and its level would be adjusted as the change in local oxygen concentration. Therefore, this thesis aims to develop a vector that satisfies these conditions using the gene for human vascular endothelial growth factor (hVEGF). To transfer the gene a vector was constructed using the C31 integrase system, which has been shown to mediate a robust and stable integration of the transgene into the genome of the cells. Along with this system, were also inserted the 9 copies of the consensus sequence of hypoxia response element (HRE) in order to control the expression according to oxygen concentration. ELISA, PCR, necrosis degree, determination of muscle force, muscle weigth and immunohistochemistry were performed to evaluate the behavior of the vector and its efficacy in the treatment of ischemia. The results demonstrated the integrative capacity and lasting expression of the vector both in vitro and in vivo. The presence of 9 copies of the HRE sequence, under hypoxia condition, allowed the modulation of gene expression with increased concentration of the protein. These characteristics have resulted in greatly improved in visual appearance of the ischemic limb and became evident the action of hVEGF in terms of increased strength and muscle weigth, decrease of fibrous tissue and increased number of vessels. This study suggests that the joint action of integrase C31 system and HRE may prolong and modulate gene expression in addition to enabling an improvement in treatment for a murine model of limb ischemia.