Navegando por Palavras-chave "Inibidores da tripsina"
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- ItemAcesso aberto (Open Access)Ação dos inibidores de proteases, EcTI e CrataBL, em linhagens de câncer cerebral (glioblastoma multiforme)(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-11-27) Bonturi, Camila Ramalho [UNIFESP]; Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP]; Silva, Mariana Cristina Cabral [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/4713682588794288; http://lattes.cnpq.br/5832778223847349; http://lattes.cnpq.br/3244614441668694; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Glioblastoma multiforme (GBM) é um câncer cerebral com alta malignidade e agressividade. É o tumor mais comum dentre os que afetam o cérebro e apresenta dificuldade em relação ao diagnóstico e tratamento. A quimioterapia é usualmente adjuvante à radioterapia e em alguns casos, a cirurgia é também requerida. No entanto, a eficácia do tratamento é baixa, com um tempo de vida inferior a 1 ano e com aparecimento de recidivas mesmo após a cirurgia. Devido à importância e estágio avançado deste tumor (grau IV) compostos que apresentam propriedades anti-tumorigênica estão sendo investigados no esforço contra o GBM. Vários estudos têm demonstrado em modelos experimentais (in vitro e in vivo) a ação antitumoral (câncer gástrico, câncer de próstata, fibrosarcoma humano) e antitrombótica dos inibidores de proteases EcTI, Enterolobium contortisiliquum Trypsin Inhibitor e CrataBL, Crataeva tapia Bark Lectin. O presente trabalho propôs avaliar o potencial anti-tumorigênico desses inibidores no câncer cerebral do tipo GBM analisando eventos como a viabilidade, adesão, invasão, vias de sinalização, liberação de cálcio, óxido nítrico, ciclo e morte celular. Os inibidores de proteases foram eficazes na diminuição da viabilidade das células de câncer tanto isoladas quanto em co-cultura. Interessantemente, esses compostos promoveram um aumento do processo adesivo resultando na diminuição da invasão. EcTI e CrataBL também promoveram aumento da liberação de cálcio basal e óxido nítrico, relacionados com eventos anti-proliferativos e de apoptose. Os inibidores causaram parada do ciclo celular na fase G1/S, além de diminuir a expressão de citocinas pro-inflamatórias como IL-6, IL-8, MCP-1, G-CSF e GM-CSF. Com relação a sinalização celular, EcTI inteferiu nas proteínas integrina ?1/FAK/Src, enquanto CrataBL agiu em Src e BR2. Com isso, verifica-se que os inibidores por interferirem na invasão, adesão, viabilidade e vias de sinalização chaves no desenvolvimento do GBM, EcTI e CrataBL são importantes compostos para serem investigados nesse câncer.
- ItemSomente MetadadadosCaracterização de uma arginil endopeptidase e um inibidor de tripsina das sementes de Dioclea glaba Benth(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1994) Bueno, Norlene Regina [UNIFESP]; Sampaio, Claudio Augusto Machado [UNIFESP]
- ItemAcesso aberto (Open Access)Confirmação da sequência relatada para o inibidor de tripsina de Sechium edule (SETI-IIa) por síntese, e tentativa de conversão do SETI-IIa em inibidor de quimiotripsina por modificação da sequência da alça do seu centro reativo(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998) Faca, Vitor Marcel [UNIFESP]; Greene, Lewis Joel [UNIFESP]Os inibidores da familia squash sao os menores inibidores de tripsina descritos na literatura, purificados a partir de plantas da familia Cucurbitaceae, contendo de 28 a 31 residuos de aminoacidos por molecula. Estes inibidores apresentam seis residuos de cisteina, formando tres ligacoes dissulfeto em uma unica cadeia, o que confere a molecula uma estrutura muito compacta e rigida. Como em todos os inibidores fortes de tripsina (Ki - 10-10 - IO-11M), existe na superficie da molecula uma alca, denominada alca do centro reativo, responsavel pela maioria das interacoes existentes entre o inibidor e a enzima. A sequencia de aminoacidos desta alca da a espccificidade do inibidor contra a enzima cognata, principalmente na posicao P1, que no caso dos inibidores de tripsina corresponde aos residuos de Lys ou Arg. Dois inibidores de tripsina da famila squash, denominados SETI-HA e SETL-V, extraidos a partir do legume Sechium edule (chuchu), foram isolados e caracterizados quanto a sequencia de aminoacidos em nosso laboratorio, demonstrando alto grau de homologia e similaridade na constante de dissociacao (Ka = lxlO10M-1) com os outros inibidores da familia. Como parte do objetivo geral de produzir um novo inibidor com atividade inibitoria modificada contra enzimas tripsino-similares, o inibidor SETI-IIA foi sintetizado pelo metodo Fmoc, em sintetizador automatico utilizando a resina Fmoc-Gly-TGA. Os residuos de cisteina do inibidor sintetico foram oxidados segundo procedimento padronizado com o inibidor SETI-IIA nativo, obtendo-se um inibidor sintetico com atividade inibitoria de tripsina nos mesmos niveis do inibidor nativo (l,lxlO9M-'). O rendimento global da sintese foi de I,4 por cento , partindo-se de 5Omg (7,5mmol) de resina. Como tentativa de melhoria no rendimento do inibidor sintetico SETI-I[Ia, este foi sintetizado tambem com o seu C-terminal na forma amida, utilizando-se a resina NovasynTGR. O rendimento do inibidor de tripsina foi aumentado para 3,6 por cento , mas a purificacao por cromatografia de fase reversa em HPLC nao foi suficiente para a obtencao de um inibidor homogeneo. Um segundo peptideo, denominado SECI, com modificacoes na sequencia de aminoacidos da alca do centro reativo do inibidor SETI-IIA (de P6 , K7 I,, L', M'0 para T 6 , F 7@ E', Y9, Rio), dirigidas para producao de um inibidor de quimotripsina, foi sintetizado tambem, com C-terminal na forma de carboxila e amida. Este peptideo nao apresentou...(au)
- ItemSomente MetadadadosPurificação e caracterização química e cinética de dois inibidores de tripsina da semente de Sechium edule.(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1996) Laure, Hélen Julie [UNIFESP]; Greene, Lewis Joel [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosPurificação e determinação da estrutura primária de um inibidor de tripsina (tipo Kunitz) do Enterolobium contortisiliquum(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1993) Batista, Isabel de Fatima Correia [UNIFESP]; Sampaio, Claudio Augusto Machado [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosSíntese química e oxidação das pontes de dissulfeto do inibidor de tripsina da família Squash SETI-IIa e alguns analógos(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Faca, Vitor Marcel [UNIFESP]; Greene, Lewis Joel [UNIFESP]O inibidor de tripsina da familia squash SETI-Ila (Sechium edule trypsin inhibitor lia) um dos menores inibidores fortes descritos na literatura (Ki 10-9M). Ele contem 31 residuos aminoacidos por molecula dos quais 6 sao cisteinas. Sua sequencia de aminoacidos EDRKCPKILMRCKR SDCLKCTCQESGYCG, e forma uma compacta estrutura tridimensior mantida por 3 pontes dissulfeto. 0 inibidor foi extraido das sementes de chuchu (Sechium edul e purificado utilizando-se precipitacao corra acetona, cromatografia de gel-filtracao cromatografia de fase reversa por HPLC, servindo como material de referencia no presen estudo. 0 padrao das pontes dissulfeto do inibidor SETI-Ila foi determinado por digesf enzimatica com a enzima termolisina e caracterizacao dos fragmentos por analise c aminoacidos e sequenciamento por degradacao automatica de Edman. 0 padrao de pontE dissulfeto determinado foi Cys1-Cys4, Cys2-Cys5 e Cys3-Cys6, correspondente ao parir( relatado para outro inibidor da mesma familia (MCTI). 0 peptideo SETI-lia e dois analogo [desl-4]SETI-lia e [des1-4, P11, G20]SETI-Ila tambem foram obtidos por sintese automatica c peptideos utilizando-se a quimica Fmoc. 0 enovelamento e oxidacao das pontes dissulfeto f realizado com mistura de GSH e GSSG em solucao do peptideo diluida (<50pglmL) ou ei coluna de gel-filtracao, minimizando as interacoes intercadeia. Devido ao baixo rendimento dc peptideos sintetizados automaticamente, utilizou-se a cromatografia de afinidade por tripsir antes da etapa de fase reversa em HPLC para purificar-los. Tanto o peptideo sintetico SETI-IIa quanto os analogos [des1-4]SETI-lia e [des1-4, P11, G20]SETI-IIa apresentaram atividade inibitoria de tripsina apos oxidacao dos residuos de cisteinas. A sequencia [des1-4, P11 G20]SETI-IIa foi sintetizada para viabilizar a sintese por condensacao de fragmentos. 0 padrao das...(au)