Confirmação da sequência relatada para o inibidor de tripsina de Sechium edule (SETI-IIa) por síntese, e tentativa de conversão do SETI-IIa em inibidor de quimiotripsina por modificação da sequência da alça do seu centro reativo
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Data
1998
Autores
Faca, Vitor Marcel 
Orientadores
Greene, Lewis Joel
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
Os inibidores da familia squash sao os menores inibidores de tripsina descritos na literatura, purificados a partir de plantas da familia Cucurbitaceae, contendo de 28 a 31 residuos de aminoacidos por molecula. Estes inibidores apresentam seis residuos de cisteina, formando tres ligacoes dissulfeto em uma unica cadeia, o que confere a molecula uma estrutura muito compacta e rigida. Como em todos os inibidores fortes de tripsina (Ki - 10-10 - IO-11M), existe na superficie da molecula uma alca, denominada alca do centro reativo, responsavel pela maioria das interacoes existentes entre o inibidor e a enzima. A sequencia de aminoacidos desta alca da a espccificidade do inibidor contra a enzima cognata, principalmente na posicao P1, que no caso dos inibidores de tripsina corresponde aos residuos de Lys ou Arg. Dois inibidores de tripsina da famila squash, denominados SETI-HA e SETL-V, extraidos a partir do legume Sechium edule (chuchu), foram isolados e caracterizados quanto a sequencia de aminoacidos em nosso laboratorio, demonstrando alto grau de homologia e similaridade na constante de dissociacao (Ka = lxlO10M-1) com os outros inibidores da familia. Como parte do objetivo geral de produzir um novo inibidor com atividade inibitoria modificada contra enzimas tripsino-similares, o inibidor SETI-IIA foi sintetizado pelo metodo Fmoc, em sintetizador automatico utilizando a resina Fmoc-Gly-TGA. Os residuos de cisteina do inibidor sintetico foram oxidados segundo procedimento padronizado com o inibidor SETI-IIA nativo, obtendo-se um inibidor sintetico com atividade inibitoria de tripsina nos mesmos niveis do inibidor nativo (l,lxlO9M-'). O rendimento global da sintese foi de I,4 por cento , partindo-se de 5Omg (7,5mmol) de resina. Como tentativa de melhoria no rendimento do inibidor sintetico SETI-I[Ia, este foi sintetizado tambem com o seu C-terminal na forma amida, utilizando-se a resina NovasynTGR. O rendimento do inibidor de tripsina foi aumentado para 3,6 por cento , mas a purificacao por cromatografia de fase reversa em HPLC nao foi suficiente para a obtencao de um inibidor homogeneo. Um segundo peptideo, denominado SECI, com modificacoes na sequencia de aminoacidos da alca do centro reativo do inibidor SETI-IIA (de P6 , K7 I,, L', M'0 para T 6 , F 7@ E', Y9, Rio), dirigidas para producao de um inibidor de quimotripsina, foi sintetizado tambem, com C-terminal na forma de carboxila e amida. Este peptideo nao apresentou...(au)
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 1998. 100 p.