Confirmação da sequência relatada para o inibidor de tripsina de Sechium edule (SETI-IIa) por síntese, e tentativa de conversão do SETI-IIa em inibidor de quimiotripsina por modificação da sequência da alça do seu centro reativo

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dc.contributor.advisorGreene, Lewis Joel [UNIFESP]
dc.contributor.authorFaca, Vitor Marcel [UNIFESP]
dc.date.accessioned2015-12-06T22:59:52Z
dc.date.available2015-12-06T22:59:52Z
dc.date.issued1998
dc.description.abstractOs inibidores da familia squash sao os menores inibidores de tripsina descritos na literatura, purificados a partir de plantas da familia Cucurbitaceae, contendo de 28 a 31 residuos de aminoacidos por molecula. Estes inibidores apresentam seis residuos de cisteina, formando tres ligacoes dissulfeto em uma unica cadeia, o que confere a molecula uma estrutura muito compacta e rigida. Como em todos os inibidores fortes de tripsina (Ki - 10-10 - IO-11M), existe na superficie da molecula uma alca, denominada alca do centro reativo, responsavel pela maioria das interacoes existentes entre o inibidor e a enzima. A sequencia de aminoacidos desta alca da a espccificidade do inibidor contra a enzima cognata, principalmente na posicao P1, que no caso dos inibidores de tripsina corresponde aos residuos de Lys ou Arg. Dois inibidores de tripsina da famila squash, denominados SETI-HA e SETL-V, extraidos a partir do legume Sechium edule (chuchu), foram isolados e caracterizados quanto a sequencia de aminoacidos em nosso laboratorio, demonstrando alto grau de homologia e similaridade na constante de dissociacao (Ka = lxlO10M-1) com os outros inibidores da familia. Como parte do objetivo geral de produzir um novo inibidor com atividade inibitoria modificada contra enzimas tripsino-similares, o inibidor SETI-IIA foi sintetizado pelo metodo Fmoc, em sintetizador automatico utilizando a resina Fmoc-Gly-TGA. Os residuos de cisteina do inibidor sintetico foram oxidados segundo procedimento padronizado com o inibidor SETI-IIA nativo, obtendo-se um inibidor sintetico com atividade inibitoria de tripsina nos mesmos niveis do inibidor nativo (l,lxlO9M-'). O rendimento global da sintese foi de I,4 por cento , partindo-se de 5Omg (7,5mmol) de resina. Como tentativa de melhoria no rendimento do inibidor sintetico SETI-I[Ia, este foi sintetizado tambem com o seu C-terminal na forma amida, utilizando-se a resina NovasynTGR. O rendimento do inibidor de tripsina foi aumentado para 3,6 por cento , mas a purificacao por cromatografia de fase reversa em HPLC nao foi suficiente para a obtencao de um inibidor homogeneo. Um segundo peptideo, denominado SECI, com modificacoes na sequencia de aminoacidos da alca do centro reativo do inibidor SETI-IIA (de P6 , K7 I,, L', M'0 para T 6 , F 7@ E', Y9, Rio), dirigidas para producao de um inibidor de quimotripsina, foi sintetizado tambem, com C-terminal na forma de carboxila e amida. Este peptideo nao apresentou...(au)pt
dc.description.sourceBV UNIFESP: Teses e dissertações
dc.format.extent100 p.
dc.identifier.citationSão Paulo: [s.n.], 1998. 100 p.
dc.identifier.fileepm-015513.pdf
dc.identifier.urihttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/15845
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/restrictedAccess
dc.subjectInibidores da tripsinapt
dc.subjectBiossíntese peptídicapt
dc.subjectDissulfetospt
dc.titleConfirmação da sequência relatada para o inibidor de tripsina de Sechium edule (SETI-IIa) por síntese, e tentativa de conversão do SETI-IIa em inibidor de quimiotripsina por modificação da sequência da alça do seu centro reativopt
dc.title.alternativeSequence related confirmation for tripsin inhibitor the Sechium edule (SETI-IIa) by synthesis, and conversion attempt to SERI-IIa in chymotripsin by modified in the relative center loop sequenceen
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesis
unifesp.campusSão Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM)pt
unifesp.graduateProgramCiências Biológicas (Biologia Molecular)
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