Navegando por Palavras-chave "Lectinas"
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- ItemSomente MetadadadosAumento De Sensibilidade De Sensor De Ressonância Plasmônica De Superfície Para Detecção De Proteínas(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-02-10) Macedo, Erenildo Ferreira De [UNIFESP]; Tada, Dayane Batista [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)This study describes the development of a method to increase the sensitivity of a Surface Plasmon Resonance Biosensor (SPR) to detect proteins at low concentrations. The method used gold nanoparticles (AuNPs) in two different approaches. In the first one, the protein to be detected was covalently linked to the AuNPs and then analyzed on the SPR sensor. In the second approach AuNPs were functionalized with specific antibody to capture protein of interest free in solution. The chosen proteins were lectins Arachis hypogaea (PNA) and Canavalia ensiformis (conA), and the biomarker of ovarian cancer, mesothelin. The second approach was more efficient in amplifying the signal, providing a better resolution response and reduced detection limit. The sensor response was compared to the detection of free protein in solution and the detection of protein covalently linked to AuNPs. In this order, the limit of detection for the approach of using the AuNPs to capture proteins was 98% and 89% lower in PNA detection and 79% and 77% lower in conA detection. It is possible that the higher efficiency was due to the role of AuNPs in enhancing the concentration of protein at NPs surface, as well as in providing the plasmonic coupling between the AuNPs and the gold surface of the SPR sensor. This result motivated the use of capture AuNPs in the detection of the protein mesothelin, an important biomarker used in the diagnosis of ovarian cancer and mesothelioma. The test was performed based on the cutoff point used to diagnose ovarian cancer (415pM). The result showed a detection limit of 35pM, which was of great relevance, demonstrating the efficiency of detection of mesothelin at low concentrations, demonstrating the potential use of this method for future studies in the area of cancer diagnosis.
- ItemSomente MetadadadosCalicreína plasmática de rato e ativador tecidual recombinate de plasmogênio competem na ligação a células hepáticas: estudo em ratos normais e submetidos a diferentes modelos de lesão hepática(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Nagaoka, Márcia Regina [UNIFESP]; Kouyoumdjian, Maria [UNIFESP]Nesta tese comparamos caracteristicas de depuracao da calicreina plasmatica de rato (RPK) e do ativador tecidual do plasminogenio (tPA) em modelo experimental de perfusao de ligado isolado de rato e em celulas hepaticas isoladas. Especificamente testamos a hipotese destas duas proteinas competirem pelo mesmo receptor. Como controle para a perfusao de figado, realizamos perfusao de veia cava inferior e verificamos que o tPA e removido eficientemente tanto veia cava como pelo ligado perfundido. Em contraste, a depuracao da RPK pela veia cava e desprezivel, comparada a depuracao pelo figado perfundido, O tPA e depurado da CIRCULACAO de ratos em fase aguda e de ratos submetidos ao modelo de cirrose experimental com velocidade menor quando comparado aos ratos normais. A flbrose experimental nao altera a depuracao do tpA da circulacao. A depuracao do tPA pelo figado perfundido de ratos submetidos ao modelo experimental de fase aguda e/ou inativacao das celulas de Kupffer e menor que em ratos normais. Por outro lado, a depuracao hepatica da RPK aumenta nos animais submetidos ao modelo de fase aguda ou inativacao das celulas de Kupffer. A fibrose ou a cirrose experimental diminui a depuracao do tPA pelo figado perfundido de rato. Por outro lado, a fibrose nao altera a depuracao hepatica da RPK. A depuracao hepatica do tPA e inibida pela adicao de b-galactosideos (b-lactose octacetato ou metil b-galactosideo) ou a-metil manosideo ao liquido de perfusao, sugerindo a participacao de lectinas S (inibicao por b-galactosideos) e receptor manosil-especifico (inibicao por manosideo). A depuracao hepatica da RPK diminui somente na presenca de metil b-galactosideo. Entretanto, na depuracao das duas proteinas nao houve completa inibicao pelos carboidratos utilizados sugerindo a presenca de outro sistema de reconhecimento para estas proteinas, possivelmente via parte proteica. A ligacao do 125I-tPA aos hepatocitos isolados e inibida por metil b-galactosideo (50 e 100 mM), tiodigalactosideo (50 mM), tio-b-galactosideo (O,8 e 3,2 MM). Dextran T-40 nao inibe esta ligacao. Estes dados reafirmam a participacao de lectinas S no reconhecimento do tPA. A marcacao indireta da RPK com inibidores marcados radioativamente foi desenvolvida com sucesso. A 125I-a5CK-RPK ou a 3H-DFP-RPK sao depuradas eficientemente pelo figado perfundido de rato, em contraste com a 125I-RPK. O tPA e)...(au)
- ItemSomente MetadadadosCaracterização de uma arginil endopeptidase e um inibidor de tripsina das sementes de Dioclea glaba Benth(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1994) Bueno, Norlene Regina [UNIFESP]; Sampaio, Claudio Augusto Machado [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosIsolamento e caracterização de MIC1 d MIC4, proteínas, micronemias do protozoário parasita Roxoplasma gondii, ligantes de lactose(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Pereira-Faça, Sandra Rodrigues [UNIFESP]; Greene, Lewis Joel [UNIFESP]o protozoario parasita Toxoplasma gondii do filo Apicomplexa, foi obtido por transferencia intraperitoneal seriada de tres dias em camundongos suicos inoculados com cerca de 107 parasitas. O exsudato, obtido de lavagens peritoneais utilizando-se 5mL de PBS, foi submetido a centrifugacao para a remocao de celulas contaminantes, quando necessario, e obtidos no sedimento. Sonicacao extensiva foi realizada na obtencao do extrato de proteinas do parasita, o qual foi submetido a cromatografia de afinidade em lactose imobilizada. A fracao ligante, eluida com lactose O,1M em PBS O,5M, contem a proteina micronemal l (MIC1) e a proteina micronemal 4 (MlC4) como componentes principais. As proteinas de 63kDa e 78kDa, MIC1 e MIC4 respectivamente, foram separadas por SDS-PAGE e RP-HPLC. Estas proteinas foram ainda identificadas no banco de dados BLAST com base na degradacao automatica de Edman, a qual forneceu a sequencia ITPAGDDVSANVTSSEP e SHSHAPARPRY, para MIC4 e MIC1, respectivamente. Alguns dominios repetitivos contendo 6 residuos de cisteinas foram identificados em ambas proteinas, MIC1 e MIC4. Na proteina MIC4, estes dominios foram homologos a dominios Apple, que sao compostos de aproximadamente 90 residuos e 6 cisteinas formando tres ligacoes dissulfeto. Este dominio esta presente em proteinas obtidas de outros parasitas apicomplexos, sugerindo que MIC4 pertence a uma nova classe de proteinas micronemais. Ambas proteinas apresentam ainda sequencias correspondentes a padroes de sequencia presentes em determinadas lectinas, sugerindo que a atividade biologica esta relacionada com a propriedade de reconhecimento de carboidrato. MIC1 e MIC4 isoladas por RP-HPLC podem ser utilizadas no estudo de propriedades imunossupressoras de proteinas micronemais
- ItemAcesso aberto (Open Access)Lectinas como reagentes para deteccao de anticorpos IgM no diagnostico da toxoplasmose aguda ou recente pela reacao de imunofluorescencia indireta(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1985) Nojimoto, Idalina Thiomi Inumaru [UNIFESP]
- ItemAcesso aberto (Open Access)Proteômica de células de osteosarcoma humano após tratamento com lectinas de sementes de quiabo(Universidade Federal de São Paulo, 2023-04-18) Costa, Erika Sayuri Nishiduka [UNIFESP]; Tashima, Alexandre Keiji [UNIFESP]; Justo, Giselle Zenker [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/9147445236159161; http://lattes.cnpq.br/3395922547042342; https://lattes.cnpq.br/9963736748632144Lectinas são proteínas capazes de reconhecer e se ligar a carboidratos presentes na membrana celular com alta especificidade. Células tumorais frequentemente possuem alterações no padrão de glicosilação da superfície celular, que podem ser seletivamente reconhecidos por lectinas de plantas. Aelki representa um conjunto de isolectinas da semente do quiabo (Abelmoschus esculentus L. Moench) que apresentou em estudos anteriores ação antitumoral seletiva contra células de câncer de mama humanos (MCF7) e baixa toxicidade contra uma linhagem não tumorigênica de células de fibroblastos (CCK-1059 sk). A investigação da atividade dar AelKI poderia ser ampliada a tumores de outras origens histológicas, incluindo tipos raros como o osteosarcoma. Este trabalho investigou a atividade antitumoral in vitro da AelKI, contra células de osteosarcoma humano (U-2 OS). O proteoma das células tratadas com AelKI foi comparado com o das células não tratadas, visando estabelecer alvos moleculares e vias bioquímicas afetados pelo tratamento. O extrato de AelKI foi preparado a partir das sementes do quiabo e purificado por cromatografia de troca iônica. A citotoxicidade de AelKI sobre as células U-2 OS foi avaliada para a determinação das concentrações para incubação, e dois níveis equivalentes a IC25 e IC40 foram selecionadas para o tratamento. Foi realizada a análise proteômica quantitativa de células U-2 OS, pelo método sem marcação. Ensaios de immunoblotting foram utilizados para verificação de marcadores das vias apoptótica e autofágica. AelKI reduziu a viabilidade da população celular em cerca de 90% nas concentrações a partir de 2 micromolar, apresentando IC50=0,26 micromolar. A análise proteômica revelou em torno de 2.200 proteínas quantificadas em todos os grupos, das quais 41 foram diferencialmente abundantes (PDA). Em termos de vias bioquímicas alteradas, as PDAs foram principalmente relacionadas à apoptose, autofagia, metabolismo energético, vesiculação intracelular e replicação de DNA. O ensaio de immunoblotting revelou que marcadores de apoptose (Caspase-3, Caspase-9, Bax e Bcl-2) tiveram seus níveis alterados pelo tratamento, indicando ativação da via intrínseca. Em relação à via autofágica, não houve alteração significativa no nível de expressão dos marcadores testados. Conjuntamente, os resultados apresentados indicam que AelKI induz a morte celular de células de osteosarcoma humano U-2 OS pela ativação da via apoptótica intrínseca, sugerindo o seu potencial como modelo para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos antitumorais.
- ItemSomente MetadadadosPurificação e caracterização de uma lectina e de um inibidor de serinoproteinase, de sementes de Swartzia pickellii Killip(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1994) Cavalcanti, Maria do Socorro de Mendonca [UNIFESP]; Sampaio, Cláudio Augusto Machado [UNIFESP]