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    Análise morfológica do ventrículo esquerdo de ratos jovens após lesão térmica por escaldadura
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-05-25) Taffarel, André Andriolli [UNIFESP]; De Oliveira, Flavia [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3387760393535776; http://lattes.cnpq.br/8428196426546357; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    A lesão térmica está entre os traumas mais recorrentes em crianças e adolescentes, tendo crescido como tema de pesquisa já que a abrangência de seus efeitos sistêmicos ainda não é completamente compreendida. A característica mais evidente deste trauma corresponde à extensa destruição de tecidos, levando o organismo aos limites do estresse com a ativação de processos inflamatórios e catabólicos. A hipótese desse estudo é que a morfologia cardíaca em modelo experimental jovem de lesão térmica possa sofrer alterações relacionadas à remodelação do miocárdio. Dessa maneira, o objetivo do presente estudo foi compreender os mecanismos celulares envolvidos na alteração tecidual do miocárdio em um modelo experimental jovem de lesão térmica em mais de 40% da área de superfície corporal. Foram utilizados 36 ratos jovens distribuídos nos seguintes grupos: controle (C) e lesão térmica por escaldadura (LTE) e posteriormente redistribuídos em avaliações com 1, 4 e 14 dias após a lesão. Ao final dos períodos, os corações foram retirados e submetidos à análise histológica (Hematoxilina-Eosina), análise dos colágenos I e III (Picro-Sírius) e imunohistoquímica para as expressões da COX-2, MMP-2, MMP-9 e 8-OHdG. Os animais LTE4 e LTE14 apresentaram menor ganho de massa que o grupo C4 e C14 no decorrer do experimento. A análise histopatológica dos animais do grupo C revelou aspecto histológico normal, enq uanto os animais do subgrupo LTE1 apresentaram alterações como infiltrado inflamatório, espaço intercelular aumentado e congestão dos vasos sanguíneos. O subgrupo LTE4 apresentou exsudato eritrócitário entre os cardiomiócitos e congestão dos vasos sanguíneos; já o subgrupo LTE14 apresentou infiltrado eritrocitário, neutrófilos no interior de vasos e cardiomiócitos em degeneração. Os achados da morfometria revelaram uma maior espessura dos cardiomiócitos no grupo LTE1 quando comparado ao C1 e que não houve diferença estatística na área de perfil celular entre os grupos C e LTE. A análise histopatológica dos tipos de colágeno I e III não exibiu diferença entre os grupos. Os achados imunohistoquímicos evidenciaram maior imunomarcação para a COX-2 para o grupo LTE em todos os dias investigados. As imunomarcações da MMP-2 e MMP-9 não apresentaram diferenças entre os grupos investigados e para a 8-OHdG, não houve imunomarcação tanto para o grupo C quanto para o grupo LTE. Concluiu-se que a lesão térmica por escaldadura em mais de 40% da área total de superfície corporal queimada causou alterações histopatológicas no miocárdio do ventrículo esquerdo de ratos condizentes com uma resposta inflamatória e relacionada à imunoexpressão de COX-2. Os achados morfométricos e da avaliação do colágeno, MMP-2 e MMP-9 caracterizaram que, apesar da inflamação, não ocorreu remodelação do miocárdio.
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    Características do tecido ósseo e cartilagíneo do fêmur de um modelo experimental para Distrofia Muscular de Duchenne
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-07-08) Santos, José Fontes dos [UNIFESP]; De Oliveira, Flavia [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3387760393535776; http://lattes.cnpq.br/4452664613699869; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Duchenne muscular dystrophy (DMD) is induced by genetic mutation in the protein dystrophy. Patients suffering DMD have muscle weakness, loss of mobility and, greater bone resorption, reduced bone mass and greater susceptibility to fracture. The experimental MDX murine model, as in dystrophic humans, has a genetic mutation that causes the lack of dystrophin. However, unlike dystrophic humans, these animals have muscle regeneration and non-progressive disease phenotype. Thus, the study aims to evaluate bone and cartilage from femur of murine models DMD, C57BL/10-dmdmdx (MDX group, n=3), and their respective controls (Control group, n=3). Both animal groups were euthanized at 16 weeks-old. After that, the proximal epiphysis was separated and processed through histological techniques for obtaining some tissue that were subsequently submitted to staining HE and Sirius red staining for structural, cellular analysis such as, collagen and immunohistochemistry for RUNX-2/RANK-L; MMP-2 e MMP-9; Caspase-3 and KI-67. Statistical analyzes were performed by the unpaired Student t test. The results showed that both articular cartilage and bone tissue underwent severe morphological changes due to muscular dystrophy. In addition, histopathology analysis showed a predominance of type I collagen fibers, with the pantographic mesh compacted in the articular cartilage from dystrophic animals. In the immunohistochemical analyzes, the MDX group showed expression for all proteins used in this study, particularly in the regions of subchondral bone, medulla and diaphysis. These results indicate that the changes present in bone and cartilage tissue are not exclusively related to muscle weakness, but also due to action of the osteogenic regulation proteins and remodeling bone process.
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    MMP-9 Expression Increases According to the Grade of Squamous Intraepithelial Lesion in Cervical Smears
    (Wiley-Blackwell, 2014-10-01) Matheus, Erika R.; Zonta, Marco A.; Discacciati, Michelle G.; Paruci, Priscila; Velame, Fernanda; Cardeal, Laura B. S.; Barros, Silvia B. M.; Pignatari, Antonio C. [UNIFESP]; Maria-Engler, Silvya S.; Universidade de São Paulo (USP); In Cito Lab Diagnost Cytol; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Studies about cervical carcinogenesis have demonstrated the increased expression of matrix-metalloproteinase (MMP) according to the grade of cervical intraepithelial lesions. Considering the importance of innovative techniques to introduce noninvasive and rapid diagnoses for patients, this study aimed to perform MMP-9 immunocytochemistry in cervical smears according to the cytopathological diagnoses, in order to monitor MMP activity in cervical smears. This cross-sectional study investigated the expression of MMP-9 in normal cervical smears, inflammatory cervical smears, squamous intraepithelial lesions, and cervical carcinoma. Cervical smears from 630 women were collected for cytopathological diagnoses and immunocytochemistry. Women with squamous intraepithelial lesions showed an increase in MMP-9 expression, with moderate to intense staining occurring with increasing cervical lesion grade. the prevalence of moderate to intense MMP-9 staining was 9% in normal cervical smears, 12% in cervical inflammation, 24% in low-grade squamous intraepithelial lesion (LSIL), 92% in high-grade squamous intraepithelial lesions (HSIL) and 100% in cervical carcinoma cases. in the specific case of LSIL, we found that association with MMP-9 is more evident when there is the simultaneous presence of an infectious agent. Thus, the expression of MMP-9 in cervical smears increases according to the grade of cervical lesion and LSIL in the presence of infectious agents showed higher MMP-9 expression than women with LSIL without infectious agents. Diagn. Cytopathol. 2014;42:827-833. (c) 2014 Wiley Periodicals, Inc.
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    Relação entre as metaloproteinases 2 e 9 no processo de fibrose do músculo esquelético de um modelo experimental para distrofia muscular de Duchenne
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017) Maziero, Carla [UNIFESP]; De Oliveira, Flavia [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/3387760393535776; http://lattes.cnpq.br/4384595332108984; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introdução: A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma doença genética recessiva ligada ao cromossomo X e caracterizada pela mutação da proteína distrofina. A DMD afeta a funcionalidade do indivíduo, com comprometimento de força e massa muscular. A mutação leva a ciclos de degeneração e regeneração de fibras musculares, o que leva ao aumento da quantidade de tecido conjuntivo no músculo e conseqüente fibrose. Sabe-se que as metaloproteinases (MMPs) são uma família de enzimas proteolíticas zinco-dependentes que participam da degradação de macromoléculas da matriz extracelular, como o colágeno da membrana basal e da matriz intersticial. A denominação - gelatinase – relacionada tanto a MMP-2 quanto a MMP-9 se deve pelo fato dessas MMPs degradarem preferencialmente o colágeno desnaturado. Objetivos: Devido às conseqüências indesejáveis da DMD, o objetivo do estudo é analisar o tecido conjuntivo do músculo bíceps braquial do animal mdx e a relação do mesmo com a imunoexpressão das MMP-2 e MMP-9. Até o presente momento os resultados relacionados a tais investigações já foram coletados e previamente apresentados como um trabalho de iniciação científica. No entanto, ainda pretende-se ampliar a revisão da literatura sobre o tópico bem como realizar a discussão dos dados encontrados para a compilação de um trabalho de conclusão de curso bem como de um artigo científico. Metodologia: Foram utilizados 12 camundongos (CEUA-UNIFESP 8165240614), sendo 6 do grupo controle (C), C57BL10, e 6 do grupo DMD, C57BL10-DMD/mdx, machos, todos com oito semanas de vida. Após a eutanásia dos animais, foi coletado o músculo bíceps braquial, o qual foi imediatamente fixado em solução de formalina 10% tamponada com fosfato durante 24h para a análise histopatológica (Hematoxilina-eosina e Picro-sírus) e imunohistoquímica (MMP-2 e MMP-9). Através das fotomicrografias das lâminas coradas em hematoxilina-eosina foi ainda determinada a densidade de fibras musculares (número de fibras/mm2 ), a qual foi analisada através do teste t de Student, considerando o nível significância p≤0,05. Resultados: A análise histopatológica (Hematoxilina e Eosina) do músculo bíceps braquial dos animais C revelou fibras musculares com espaçamento eqüidistante, com tamanho homogêneo e núcleos periféricos. Já os animais do grupo DMD apresentaram as células com núcleos centralizados e de diferentes tamanhos além de fibras em processo de degeneração em meio ao intenso infiltrado inflamatório. A análise do tecido conjuntivo, avaliada através do Picro-Sírius, revelou que os animais controle apresentaram envoltórios musculares (endomísio e perimísio) com características normais, ou seja, sem espessamentos. Já o grupo DMD apresentou grandes espessamentos entre as fibras musculares e intenso processo de fibrose. A análise imunohistoquímica tanto para a MMP-2 quanto para a MMP-9 mostrou intensa imunoexpressão desses marcadores biológicos nos locais com processo de fibrose. Os resultados da densidade de fibras musculares (número de fibras/mm2 ) revelaram não haver diferença estatisticamente significante quando comparadas as médias entre os grupos experimentais avaliados. No entanto, observou-se grande heterogeneidade na avaliação desse parâmetro para o grupo DMD. Conclusão: O intenso processo de inflamação e fibrose do músculo bíceps braquial dos animais do grupo DMD analisado no presente estudo mostrou relação com a imunoexpressão da MMP-2 e MMP-9
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    Structural and functional changes in the alveolar bone osteoclasts of estrogen-treated rats
    (Wiley-Blackwell, 2012-01-01) Faloni, Ana Paula de Souza [UNIFESP]; Sasso-Cerri, Estela [UNIFESP]; Godoy Rocha, Fernanda Regina; Katchburian, Eduardo [UNIFESP]; Cerri, Paulo Sergio [UNIFESP]; UNESP Univ Estadual Paulista; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    This study investigated structural and functional features of apoptotic alveolar bone osteoclasts in estrogen-treated rats. for this purpose, 15 female rats 22 days old were divided into three groups: Estrogen (EG), Sham (SG) and Control (CG). the rats of EG received daily intramuscular injection of estrogen for 7 days. the SG received only the oil vehicle. Maxillary fragments containing alveolar bone were removed and processed for light and transmission electron microscopy. Area (OcA) and number of nuclei (OcN) and bone resorption surface per TRAP-positive osteoclasts (BS/OC) were obtained. Vimentin, caspase-3 and MMP-9 immunoreactions, TUNEL/TRAP and MMP-9/TUNEL combined reactions were performed. in EG, the OcA, OcN and BS/Oc were reduced. Moreover, osteoclasts showed cytoplasm immunolabelled by caspase-3 and a different pattern of vimentin expression in comparison with CG and SG. MMP-9 expression was not affected by estrogen and the TUNEL-positive osteoclasts were MMP-9-immunolabelled. in EG, ultrastructural images showed that apoptotic osteoclasts did not exhibit ruffled borders or clear zones and were shedding mononucleated portions. TRAP-positive structures containing irregular and dense chromatin were partially surrounded by fibroblast-like cells. in conclusion, the reduction in the BS/Oc may be due to reduction in OcA and OcN; these effects seem to be related to vimentin disarrangement rather than to an interference of estrogen with osteoclast MMP-9 expression. Osteoclast apoptosis involves caspase-3 activity and vimentin degradation; these cells release portions containing one apoptotic nucleus and, subsequently, undergo fragmentation, giving rise to apoptotic bodies.