Navegando por Palavras-chave "RNA mensageiro"
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- ItemAcesso aberto (Open Access)Análise da expressão de NRN1 e TNFAIP3 no sangue periférico de pacientes com câncer gástrico(Universidade Federal de São Paulo, 2022-04-29) Queiroz, Daniel Soares de [UNIFESP]; Santos, Fernanda Wisnieski Caires dos [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/1101600694934077; http://lattes.cnpq.br/8195307094802071O câncer gástrico (CG) é frequentemente diagnosticado em estádios avançados devido à ausência de sintomas ou à presença de sintomas não específicos nos estádios iniciais. A identificação de marcadores de diagnóstico e prognóstico confiáveis e minimamente invasivos é extremamente necessária para o aumento da sobrevida, assim como já ocorre em outros tipos tumorais. Dados prévios do nosso grupo de pesquisa revelaram NRN1 e TNFAIP3 como potenciais biomarcadores de diagnóstico/prognóstico e de resposta terapêutica em amostras de tecido gástrico neoplásico. Objetivos: avaliar se os níveis transcricionais dos genes NRN1 e TNFAIP3 podem constituir potenciais biomarcadores minimamente invasivos de diagnóstico e prognóstico, bem como de monitoramento dos pacientes. Métodos: os níveis transcricionais de NRN1 e TNFAIP3 a partir de amostras de sangue periférico de 42 participantes com CG e de 12 indivíduos sem câncer e negativos para H. pylori foram quantificados por RTqPCR. Um estudo de seguimento foi conduzido em 11 participantes com CG para monitorar os níveis de NRN1 e TNFAIP3 no período de até cinco anos após o tratamento cirúrgico. Os dados de expressão gênica foram associados às variáveis clínicas e patológicas. Resultados: os participantes com CG apresentaram maiores níveis transcricionais de NRN1 em relação aos indivíduos sem câncer (P<0,01). Além disso, a expressão de NRN1 foi capaz de discriminar esses indivíduos (AUC=0,72, P=0,02). Redução dos níveis transcricionais de NRN1 foi observada nos participantes com CG após a ressecção cirúrgica, alcançando os níveis detectados nos indivíduos sem câncer e sendo mais significativa um ano após o tratamento. Não foram detectadas alterações nos níveis de TNFAIP3 nos participantes com CG em relação aos controles, bem como após o tratamento cirúrgico. Conclusões: a expressão de NRN1 no sangue periférico tem o potencial para ser utilizado como um biomarcador de diagnóstico do CG e no monitoramento dos pacientes.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Análise proteômica diferencial na carcinogênese gástrica(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011-04-27) Leal, Mariana Ferreira [UNIFESP]; Smith, Marilia de Arruda Cardoso [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Gastric cancer is the fourth most common cancer and the second leading cause of cancerrelated death worldwide. In Pará State, this neoplasia is a serious public health problem due to its late diagnosis that leads to low survival rates. These facts reinforce the severity of this pathology and the necessity of new studies aiming to change this panorama. Aim: 1) to compare the expression profiling of gastric adenocarcinoma and the matched non-neoplastic gastric tissue. 2) to identify deregulated proteins and to discover pathways and networks involved in gastric carcinogenesis. 3) to evaluate the mRNA and protein expression of ENOA/ENO1, HSPB1, NPM1 and 14-3-3ɛ/YWHAE in neoplastic and non-neoplasic gastric samples and associate the expression of the selected genes to clinicopathological characteristics of gastric adenocarcinomas. Methods: the protein profile was evaluated by two-dimensional gel electrophoresis in 15 pairs of neoplastic and the matched non-neoplastic gastric samples of individuals from Pará State. To select the differentially expressed proteins, we performed parametric tests with resampling. After protein identification, we performed cluster analysis, and the proteins were classified according to cellular location, biological process, molecular function and gene location. Bioinformatic analysis was used to discover the main canonical pathways and the physical and/or functional networks involved in gastric carcinogenesis. The expression of ENOA/ENO1, HSPB1, NPM1 and 14-3-3ɛ/YWHAE were evaluated by real-time quantitative PCR and by western blot. Results: 111 proteins were associated to gastric carcinogenesis. The cluster analysis revealed the presence of two main groups: one group composed by only non-neoplastic samples and the other group presented all tumor samples and two misclassified non-neoplastic samples. The computational analysis revealed several proteins involved in the energy production processes. By proteomic analysis, we observed two ENOA spots presenting elevated expression in neoplastic samples compared to non-neoplastic. The mean of ENOA expression by western blot was significantly reduced in gastric tumors. The reduced ENOA expression was associated to lower tumor invasion (T1/T2). By proteomic analysis, one spot of HSPB1 was observed with elevated expression in gastric cancers. By western blot, the HSPB1 expression did not differed between neoplastic and non-neoplastic gastric samples. The expression of NPM1 and 14-3-3e was significantly reduced in gastric tumors compared to non-neoplastic samples. The reduced expression of NPM1 was associated with a poor prognosis. The reduced expression of 14-3-3e was associated with diffuse-type and early onset gastric tumors. Conclusion: The present study identified several differentially expressed proteins, enhancing efforts to generate and expand knowledge about gastric carcinogenesis, especially in individuals from Pará State. NPM1 and 14-3-3e have a role as tumor suppressors in gastric carcinogenesis. The identified proteins may be useful biomarkers for assessment of diagnosis and prognosis, as well as may be possible targets for anticancer therapy.
- ItemSomente MetadadadosCaracterização estrutural e regulação da transcrição do gene receptor B1 de cininas de camundongos(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Merino, Vanessa Ferreira [UNIFESP]; Pesquero, João Bosco [UNIFESP]A bradicinina é um potente nonapeptídeo vasoativo gerado no sangue e tecidos pela açao proteolítica da calicreína, que libera BK e Lys-BK do cininogênio de alto e baixo peso molecular, respectivamente, no caso de injúria de tecido. O Sistema Calicreína-Cinina (SCC) está envolvido em várias fases da resposta inflamatória aguda e crônica bem como na regulaçao cardiovascular e nocicepçao. As cininas desempenham seu amplo espectro de açao através da ativaçao de pelo menos dois subtipos de receptores, denominados B1 e B2. Ao passo que o receptor 132 é amplamente distribuído nos tecidos de mamíferos, o subtipo B1 é pouco expresso em condiçoes normais, sendo contudo induzido em casos de inflamaçao e trauma e por componentes da resposta inflamatória tais como citocinas, fator de crescimento e lipopolissacarídeo. Estudos moleculares do receptor B 1 de diversas espécies têm auxiliado na compreensao dos mecanismos que regulam a induçao da expressao do receptor B1 em processos patológicos, estabelecidos por caracterizaçoes farmacológicas. A regiao codificadora do gene do receptor B1 de camundongo foi determinada por Pesquero e cols. em 1996, entretanto, nesta época nao era ainda conhecida a estrutura molecular do gene, nem tampouco as regioes e os fatores que regulam sua transcriçao. Dessa forma, o objetivo deste trabalho consistiu na caracterizaçao da estrutura molecular do gene do receptor 131 de camundongo, na localizaçao da regiao promotora, seqüências regulatórias e a identificaçao dos fatores de transcriçao envolvidos no controle da expressao desse gene. No presente trabalho caracterizamos o gene do receptor B1 de cininas de camundongo, pelo ensaio de Sistema de Amplificaçao Rápida da Terminaçao 5' do cDNA (5' RACE), a partir de diversos tecidos de camundongo. O gene é formado por dois exons separados por um intron, a regiao codificadora do receptor encontra-se no exon 2, e o exon 1 apresenta tamanhos variáveis (189, 100 e 84 pb) de acordo com o tecido. A regiao promotora (90pb) do gene do receptor B 1 apresenta um elemento regulador da transcriçao positivo, ao qual foi identificada a ligaçao do fator de transcriçao NF-kB e negativo, responsivos ao LPS em CML-A. A induçao da transcriçao pelo LPS ocorre através da ligaçao do heterodímero NF-kB p50/p65.
- ItemSomente MetadadadosDiagnóstico do câncer de tiróide recorrente por meio da detecção do RNA mensageiro da tiroglobulina e do simportador de sódio e iodo em sangue periférico(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2000) Biscolla, Rosa Paula Mello [UNIFESP]; Maciel, Rui Monteiro de Barros [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosMapeamento e caracterização do RNAm dos genes do sistema renina-angiotensina ao longo do nefrón de rato(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1999) Aneas, Ivy [UNIFESP]; Pesquero, Joao Bosco [UNIFESP]O sistema renina-angiotensina (SRA) corresponde a um complexo sistema hormonal que desempenha importante papel no controle da homeostasia cardiovascular. Com a Introdução das tecnicas de biologia molecular, esta visao classica do SRA (sistema endocrino) vem sendo modificada, de forma a incluir funcoes tanto paracrinas como autocrinas da Ang II e alguns de seus metabolitos produzidos localmente em varios tecidos. A identificacao de todos ou parte dos componentes do SRA em diferentes celulas e tecidos constitui um passo importante para a compreensao deste sistema. No presente estudo, desenvolvemos a tecnica de RT-PCR para mapear a expressao do RNAm dos genes da renina, do angiotensinogenio e da ECA ao longo do nefron de rato. RNA total glomerular e tubular foram isolados. A quantificacao da expressao dos componentes do SRA no rim (cortex, medula externa e interna) foi determinada por RNase Protection Assay (RPA). A b-actina foi utilizada como controle positivo nas reacoes de RT-PCR e para normalizar os resultados obtidos por RPA. A especificidade dos produtos de PCR foi demonstrada por Southern blotting. RNAm para angiotensinogenio, renina e ECA foram detectados, por RT-PCR, em cortex, medula externa e interna. Ao longo do nefron, produtos de amplificacao especificos para angiotensinogenio (335 pb) e renina (25 8 pb) foram detectados em glomerulo, porcoes Sl e S2-S3 do tubulo proximal e ducto coletor (cortical, medular externo e interno). Nao foi detectada a expressao do RNAm destes genes nas porcoes fina e ascendente espessa (cortical e medular) da alca de Henle. A ECA (384 pb) apresentou distribuicao semelhante aos outros dois genes, exceto na porcao S2-S3 do tubulo proximal, onde o RNAm nao foi detectado. A quantificacao por RPA demonstrou que a expressao do angiotensinogenio e similar no cortex e na medula, enquanto que a renina e expressa principalmente no cortex renal. A ECA, por sua vez, apresenta expressao significativamente maior na medula externa quando comparada ao cortex e a medula interna. Os resultados indicam que, embora os genes do SRA estejam amplamente distribuidos no tecido renal, eles apresentam uma distribuicao diferenciada ao longo do nefron e compartimentos intrarenais de rato
- ItemSomente MetadadadosMoléculas moduladas durante a inibição de proliferação de células mamárias murinas HC11 tratadas com 1, 25(OH)2D3(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Katayama, Maria Lucia Hirata [UNIFESP]; Brentani, Maria Mitzi [UNIFESP]A 1,25 dihidroxivitamina D3 (1,25(OH)2D3) e um hormonio esteroide relacionado com a homeostase do calcio e envolvido com o controle da proliferacao celular. Celulas mamarias murinas HC11 imortalizadas espontaneamente, retem caracteristicas de celulas normais e tem o crescimento inibido mediante exposicao ao hormonio o qual se correlaciona com um aumento das celulas em GO/G1. Nosso objetivo foi verificar o efeito da 1,25(OH)2D3 (100nM, 72h) sobre moleculas especificas reguladoras do ciclo celular (ciclinas e inibidores de quinase dependente de ciclina (p21WAF1/C/P1 e p27KIP1) do estado de fosforilacao da proteina de retinoblastoma (pRb), como sobre os genes de resposta imediata das familias de c-myc, c jun e c-fos, sobre o fator transformante b (TGF b1, 2 e 3) e seus receptores (Tb RI e RII) e a proteina ligante 3 de IGF (IGF-BP3) atraves da expressao de RNAm, por ensaio de protecao da ribonuclease, e de proteina, por analise de western blot e imunoprecipitacao. As celulas HC11 expressam basicamente RNAm de c-myc e os de L-myc e B-myc estao praticamente ausentes. O tratamento nao alterou o nivel da expressao destas moleculas se comparadas ao controle, e tambem nao modulou a expressao dos RNAm de max, mad, mxi, mad3 e mad4. Celulas HC11 apresentam principalmente RNAm de jun-B e Jun-D em relacao a c-jun, e de fra-2, em relacao a c-fos, fos-B e fra-1, e o hormonio nao regulou estes niveis de expressao. Detectamos nestas celulas um maior conteudo de RNAm de TGFb1 e b3 se comparados com o de TGFb2, e tambem observamos a expressao dos receptores TbRI e RII. Sugerindo que estes genes nao estejam envolvidos nos efeitos inibitorios da 1,25(OH)2D3. Celulas HC11 exibem preferencialmente RNAm e proteina de ciclina D1 em relacao a ciclinas D2 e D3. Apresentam ainda um grande conteudo de RNAm de ciclinas A2, B1 e H. Os niveis de RNAm e de proteina destas ciclinas nao sao modulados pelo hormonio. Observamos tambem a expressao do RNAm de ciclina E, cujos niveis nao variaram em celulas induzidas com 1,25(OH)2D3, embora uma queda da expressao desta ciclina, apos 72 h de cultura, independente do tratamento tenha sido verificada. Entretanto, a expressao proteica de ciclina E dobrou com o tratamento em comparacao a celulas controle (72h), sugerindo que esta modulacao ocorra a nivel pos transcricional. Celulas induzidas apresentam tambem uma elevacao do conteudo proteico de p21WAFilclP1 (1,4 vezes) em relacao a celulas...(au)
- ItemAcesso aberto (Open Access)Níveis séricos, filtração e reabsorção renal do Fas solúvel (sFas) em indivíduos saudáveis e pacientes com Doença Renal Crônica(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006-12-31) Dalboni, Maria Aparecida [UNIFESP]; Cendoroglo Neto, Miguel [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Increased serum soluble levels of Fas (sFas) have been reported in patients with chronic kidney disease (CKD). We sought to quantify the renal Clearance of sFas in healthy subjects and patients with CKD, to investigate whether sFas is reabsorbed after filtration and to investigate whether there is an increased synthesis of sFas. We studied 69 patients with CKD (creatinine clearance = 37+19 ml/min/1,73 m2) and 14 healthy control subjects. ELISA was used to measure sFas (pg/mL) and retinol Binding Protein (RBP - mg/L), as a marker of proximal tubule dysfunction and RT-PCR was used to quantify mRNAsFas (μg/μL). Serum sFas levels were significantly higher in patients with CKD (2781±1214 vs. 2196±773.; p=0.02). The levels of sFas in 24 hour urine samples (23±27 vs. 40±17; p = 0.006), sFas Clearance (0.019±0.022 vs. 0.036±0.020; p=0.01) and sFas excretion fraction (0.03±0.03 vs. 0.08±0.16, p = 0,009). were significantly lower in patients with CKD. sFas Clearance correlated with Creatinine Clearance (r=0.25, p=0.02). Urine levels of RBP correlated with sFas levels in the urine (r = 0.80, p < 0.001). mRNAsFas levels were higher in patients with CKD (3.9±1.8 vs. 2.5±0.9, p <0,001). In conclusion, we demonstrate that when renal function decreases, sFas Clearance decreases and sFas serum levels increase. In patients with proximal tubule dysfunction (high urinary RBP levels), urinary sFas is also increased, suggesting that sFas is reabsorbed by the proximal tubule. It is possible that an increase in sFas synthesis also contributes to the increase of serum sFas levels in uremia.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Polimorfismos e expressão de genes de moléculas do sistema imune no carcinoma de colo uterino(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2007) Guzman, Valeska Barcelos [UNIFESP]; Gerbase-Lima, Maria [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Os objetivos de nosso trabalho foram: 1) investigar a relação entre polimorfismos dos genes CD28, ICOS, CTLA4, PDCD1, FAS, TGFB1, IFNG, IL6, IL10, TNFA e a ocorrência de carcinoma do colo uterino; 2) investigar a relação entre nível de expressão dos genes CD28, CTLA4, ICOS, ICOSL, CD80, CD86, GZMB (granzima B) em biópsias de carcinoma de colo uterino, no momento do diagnóstico, e a evolução do tumor após o tratamento. Materiais e Métodos: 1) A determinação dos polimorfismos foi realizada através dos métodos PCR-RFLP, para os SNPs: CD28 int3 (+17 T>C), CTLA4 promoter (-319 C>T), CTLA4 exon 1 (+49 A>G), ICOS 3’UTR (+1564 T>C), PDCD1 exon 5 (+7785 C>T) e FAS promoter (-670 G>A) e PCR-SSP para TNFA promoter (-308 G>A), IL6 promoter (-174 G>C), IFNG int1 (+874 A>T), TGFB1 codon 10 (+869 T>C), codon 25 (+915 G>C) and IL10 promoter (-1082 A>G), (-819 C>T), (-592 C>A) SNPs. Um algoritmo foi desenvolvido para identificar genótipos de SNPs isolados e/ou em combinações de 2 e 3 genótipos associados com a doença 2) Expressão gênica foi determinada, por PCR em tempo real, em biópsias de carcinoma cervical de pacientes posteriormente classificadas em dois grupos: 10 pacientes sem envidência do tumor (evolução clínica boa) após 6 meses do final do tratamento e 8 pacientes nas quais o tumor foi detectado (evolução clínica ruim) neste período. Resultados: 1) Nenhuma associação significante foi observada com os SNPs analisados isoladamente. A análise do multi-locus revelou, em pacientes, maiores frequências de três combinações de três genótipos (CD28 +17 int3(TT)/IFNG+874 int1(AA)/TNFA-308(GG), CD28+17 int3 (TT)/IFNG+874 Iint1(AA)/PDCD1 +7785 exon5 (CT), CD28 int3(TT)/IFNG int1(AA)/ICOS 1564 3’UTR (TT)) (p<0,01). Entretanto, a contribuição do terceiro polimorfismo (TNFA, ICOS, or PDCD1) não foi confirmada (p=0,1). Confirmamos maior frequência, em pacientes, da combinação CD28(TT)/IFNG(AA) nos três grupos juntos, e observamos uma contribuição principal desta combinação na associação com a doença (OR = 2,07, p=0,0011). 2) A expressão intra-tumoral de GZMB estava aumentada em biópsias de pacientes com estadio IIIB que apresentaram uma evolução clínica ruim (p=0,034). A expressão gênica das moléculas CD28, ICOS, ICOSL, CD80, CTLA4 e CD86 não mostrou diferenças significantes entre as biópsias de pacientes de grupos de evolução clínica boa e ruim. Conclusões: 1) Nossos resultados sugerem efeito epistático entre os genes CD28 e IFNG na susceptibilidade do câncer de colo uterino. Outros trabalhos em estudos independentes aplicando abordagem multi-locus são importantes para a elucidação da contribuição de polimorfismos genéticos para a susceptibilidade a esta doença. Além disto, o algoritmo desenvolvido pode ser aplicado a estudos sobre fatores genéticos de susceptibilidade a outras doenças complexas. 2) Altos níveis de mRNA de GZMB em tumores no estádio IIIB correlacionaram-se com menor sobrevida livre do tumor nos 6 meses após o tratamento. A expressão deste gene, se os resultados obtidos forem confirmados por um estudo independente, pode vir a se tornar um marcador de prognóstico para resposta a tratamento de carcinoma de colo uterino.
- ItemSomente MetadadadosTransporte transepitelial de glicose, sódio e água e RNA mensageiro dos transportadores de glicose no intestino delgado de ratos com anemia ferropriva(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Wayhs, Monica Lisboa Chang [UNIFESP]; Morais, Mauro Batista de [UNIFESP]Objetivos: Avaliar em ratos com anemia por defiCiência de ferro o transporte transepitelial de sodio, glicose, potassio e agua, e o conteudo de mRNA da proteina cotransportadora de sodio / glicose (SGLT1) e da proteina facilitadora do transporte de glicose (GLUT2) no intestino delgado. r Metodos: Foram utilizados, para cada experimento, ratos machos Wistar-EPM com 21I dias completos de vida, que receberam dieta pobre em ferro (<5 mg de ferro elementar/kg - grupo anemico) ou com conteudo normal de ferro (>35 mg de ferro elementar/kg - grupo controle) durante seis semanas. O transporte transepitelial de sodio, glicose, potassio e agua foi avaliado por meio do modelo experimental da perfusao intestinal In vivo em ratos com anemia ferropriva (n=9) e ratos sem anemia (n=10). A perfusao intestinal In vivo foi realizada em 20 cm de jejuno, utilizando-se a solucao de reidratacao da O.M.S. Em 12 ratos anemicos e 11 ratos sem anemia foram avaliados o conteudo relativo do mRNA do SGLT1 e do GLUT2 nas porcoes proximal, intermedia e distal do intestino delgado, por meio da tecnica de Northem Blotting. Os dois experimentos foram realizados em periodos e com ratos diferentes. Resultados: Apos seis semanas de tratamento dietetico a concentracao sanguinea da hemoglobina e o conteudo de ferro hepatico dos ratos anemicos submetidos a perfusao intestinal (Hb: 8,7 g/dl / DP=1,0 g/dl; ferro hepatico: 0,099 mg/g / DP=0,012 mg/g) ou utilizados para determinacao do mRNA (Hb: 3,9 g/dl / DP=0,7 g/dl; ferro hepatico: 0,078 mg/g / DP=0,015 mg/g) foram estatisticamente inferiores a dos ratos controles, tanto no primeiro experimento (Hb: 13,9 g/dl I DP=1,5 g/dl; ferro hepatico: 0,344 mg/g I DP=0,074 mg/g) quanto no segundo (Hb: 11,7 g/dl / DP=1,3 g/dl; ferro hepatico: 0,192 mg/g I DP=0,030 mg/g). O transporte transepitelial medio de sodio (-32,96 pEqlmin.cm / DP=370,81 pEq/min.cm), glicose (425,95 pM/min.cm / DP=535,84 gMlmin.cm) e agua (0,44 pl/min.cm / DP=4,18 pl/min.cm) no intestino delgado dos ratos anemicos foi significantemente menor do que o do grupo controle (sodio: 349,13 pEq/min.cm / DP=227,26 pEq/min.cm; glicose: 842,62 pM/min.cm / DP=297,64 gMlmin.cm; agua: 4,32 pl/min.cm / DP=2,79 pl/min.cm). Nao foi observada diferenca com relacao ao transporte transepiteliaL de potassio. O conteudo relativo de mRNA, expresso em unidades arbitrarias (UA), do SGLT1 dos ratos anemicos nos segmentos...(au)