Navegando por Palavras-chave "Receptores Purinérgicos P2"
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- ItemAcesso aberto (Open Access)Avaliação dos mecanismos intracelulares da diferenciação mieloide por receptores P2(Universidade Federal de São Paulo, 2019-05-23) Araujo Júnior, Roberto Theodoro de [UNIFESP]; Gamero, Edgar Julian Paredes; http://lattes.cnpq.br/9562213378846769; http://lattes.cnpq.br/3663248360368666A capacidade de auto renovação, quiescência e diferenciação em múltiplos passos apresentado pelas células-tronco hematopoéticas (CTHs) são características essenciais para a manutenção da homeostase do tecido hematopoético. Diversos trabalhos mostraram a capacidade do ATP e análogos em modular a atividade de células hematopoéticas maduras e em CTHs. Nosso grupo mostrou que o ATP extracelular promove a diferenciação das CTHs de forma Ca2+ dependente por receptores P2. Embora tenha sido observada a modulação da hematopoese por ATP e análogos por ativação de receptores P2, os subtipos de receptores envolvidos e as vias envolvidas no processo de diferenciação não foram completamente elucidados. Este trabalho teve como objetivo elucidar as vias intracelulares relacionadas com a indução da diferenciação mieloide promovida por receptores P2. Mostrou-se no presente estudo que as CTHs sofrem diferenciação por ativação dos receptores P2. As CTHs tratadas com ATP aumentam a expressão do marcador de proliferação Ki67, além de diminuir a expressão do receptor Notch-1 indicando assim, que estas células perderam a quiescência, característica das CTHs. Além disso, as vias Pi3K/AKT foram ativadas, sendo que a AKT foi fosforilada tanto na serina 473 quanto na treonina 308, sugerindo assim que tanto a enzima PDK-1 quanto o complexo proteico mTOR estão envolvidos na sinalização deste processo. As enzimas CaMKI, CaMKII e PKC, proteínas dependentes de Ca2+, também foram ativadas pelo ATP, porém não a proteína CaMKIV. Entre as vias ativadas por receptores P2Y estão as da PLCβ3, capaz de induzir liberação de Ca2+. Avaliou-se também a alguns fatores de transcrição como as STATs 3 e 5, ambas foram ativadas por vias independentes de Janus quinases, bem como a oncoproteína Bcl-2, que possui papel no processo de diferenciação celular. E por fim a ERK1/2, uma MAPK associada com a diferenciação, foi ativada de forma sustentada por até 24 h, o processo de ativação da via ERK está fortemente ligado a processos de diferenciação. Corroborando este resultado, um inibidor específico para a MEK foi capaz de reverter o processo de diferenciação induzido pelo ATP. Ademais, a utilização do inibidor da Pi3K foi capaz de reverter parcialmente o processo de diferenciação. Estes dados em conjunto sugerem que os receptores P2 levam às CTH a se diferenciarem por meio da sinalização de muitas vias como a da ERK1/2 e Pi3K.
- ItemSomente MetadadadosAvaliação dos mecanismos intracelulares da diferenciação mielóide por receptores P2(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-06-27) Araujo Junior, Roberto Theodoro De [UNIFESP]; Gamero, Edgar Julian Paredes [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Hematopoiesis is the process by which the organism forms all the bloodlines that occurs throughout the life of the individual. The capacity for self-renewal, quiescence and differentiation in multiple steps presented by hematopoietic stem cells (HTCs) are essential characteristics for the maintenance of homeostasis of hematopoietic tissue. In addition to cytokines, other signaling agents such as ATP, secreted by endothelial cells and osteoblasts, can modulate hematopoiesis by the activation of extracellular receptors. Several works have shown the capacity of ATP and analogues, in activating P2 receptors, and in modulating the activity of mature hematopoietic cells and in CTHs. Our group demonstrated that extracellular ATP promotes differentiation of HTCs through the increase of intracellular calcium promoted by P2 receptors. Although the modulation of hematopoiesis by ATP and analogs through the activation of P2 receptors has been observed, the receptor subtypes involved and the intracellular pathways that depend on these effects have not been fully elucidated. This work aims to elucidate the intracellular pathways related to the induction of myeloid differentiation promoted by P2 receptors. It was demonstrated in the present study that CTHs undergo differentiation through the activation of P2 receptors, ATP-treated HTCs increase Ki67 cell proliferation marker expression, thus indicating that these cells have lost the characteristic quiescence of HTCs. In addition, the Pi3K / AKT pathways were activated, and AKT was phosphorylated at both activation sites, thus demonstrating that both the PDK-1 enzyme and the mTOR protein complex are involved in signaling this process. CaMKII and PKC enzymes of the calcium dependent pathways were also activated, but without activation of CaMKIV. Among the pathways activated by P2Y receptors are those of PLCβ3 which, among other actions, is capable of inducing an increase in cytosolic calcium. Some transcription factors such as Stats 3 and 5 were also evaluated, both of which were activated by Janus kinase-independent pathways, as well as the best known Bcl-2 oncoprotein due to its participation in the apoptotic control process, but which has a role in the process of cell differentiation. Finally, the ERK was activated in a sustained manner for up to 24 hours, the process of activation of the ERK pathway is strongly linked to differentiation processes, and to corroborate this result a specific inhibitor for MEK was able to reverse the induced differentiation process by ATP. xviii These data together suggest that P2 receptors lead hematopoietic stem cells to differentiate themselves by signaling many pathways and that the role of MAPK ERK is of fundamental importance for this process.
- ItemSomente MetadadadosCaracterizacao do papel dos receptores purinegicos P1 e P2 envolvidos na regulacao da funcao atrial em ratos normotensos e hipertensos(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011) Rodrigues, Juliano Quintella Dantas [UNIFESP]Introdução: Os nucleotideos de purina, como o ATP e de pirimidina, como o UTP sao armazenados juntamente com a noradrenalina nas vesiculas sinapticas e liberadas dos terminais nervosos simpaticos. A acao desses nucleotideos nestas sinapses e mediada pelos receptores purinergicos P1 e P2, expressos em diversos tecidos do organismo. Os purinoceptores modulam, por exemplo, o sistema cardiovascular, mais especificamente o coracao no qual alteram o inotropismo e o cronotropismo. Nesse sentido como os mecanismos celulares e moleculares envolvendo os purinoceptores e o coracao nao estao esclarecidos na hipertensao arterial sistemica (HAS) tornou-se importante investigar a participacao desses receptores na regulacao da funcao atrial em animais normotensos e hipertensos. Materiais e Metodos: Os atrios direito (AD) e esquerdo (AE) dos ratos Wistar normotenso (NWR) e dos ratos Wistar espontaneamente hipertensos (SHR) de 4 a 6 meses foram isolados e montados em banho de orgaos isolados a 36,5°C e nutridos por uma solucao de Krebs-Henseleit continuamente borbulhada com mistura carbogenica (95% O2 + 5% CO2). Os AE foram submetidos a estimulacao eletrica transmural (EET) (2Hz, 5ms e 8-12 V) e os AD apresentaram batimentos espontaneos (180 a 420 bpm). Foram analisados parametros farmacologicos (pD2 e Emax) e fisiologicos (forca de contracao e frequencia cardiaca). Foram verificados os efeitos inotropicos e cronotropicos dos agonistas endogenos o ATP e o UTP, nas concentracoes de 10 nM a 1 mM, na ausencia e na presenca dos antagonistas seletivos dos receptores P1 e P2 (PPADS, Suramin, DPCPX, ZM 241385, MRS 1220). Tambem foi estudado a homeostase celular do Ca2+ com os farmacos: CCCP, nifedipina e rianodina. Os resultados foram analisados pelo teste t de Student nao pareado e analise de variancia - ANOVA de uma via com pos-teste a correcao de Bonferroni. Resultados: Os resultados obtidos demonstraram que o ATP (1 μM a 1 mM) e o UTP (1 μM a 1 mM) alteram o inotropismo e o cronotropismo dos atrios isolados dos animais NWR e SHR. Inicialmente, ambos os nucleotideos apos serem incubados produziram um efeito inotropico negativo (EIN), de cerca de 1 min de duracao seguido de um efeito inotropico positivo (EIP), que durou cerca de 7 min, concentracao-dependente. O ATP e o UTP produziram um EIN inicial de menor amplitude para o SHR. Apos este efeito comecou um EIP que apresentou maior amplitude para o SHR tanto para AD quanto AE. O EIN de ambos os nucleotideos foram bloqueados parcialmente pelo antagonista seletivo dos receptores A1 o DPCPX sugerindo que o receptor A1 seria o responsavel por esta resposta. Depois os antagonistas seletivos dos receptores P2 o PPADS e o Suramin bloquearam o EIP de ambos os nucleotideos tanto para AD quanto AE de SHR e de NWR, sugerindo que esta resposta seria mediada pelo receptor P2. Depois, utilizando o agonista dessensibilizante dos receptores P2X o α-β-metileno-ATP, pode-se inferir que o receptor P2Y participa majoritariamente na producao do EIP para ambos os animais e para ambos os atrios. Alem disso, ambos os nucleotideos modularam a frequencia do AD evidenciando a presenca de receptores purinergicos no nodo sinoatrial (NSA). Alem disso, os antagonistas sugeriram a participacao dos receptores A1 e P2 no NSA. Este estudo ainda evidenciou a participacao do ion calcio extra (utilizando o farmaco nifedipina que bloqueia os Canais de Ca2+ voltagem dependente (Cavs) do tipo L) e intracelular na producao do EIP dos nucleotideos para ambas as linhagens de animais e em ambos os atrios. A maior participacao foi dos estoques de calcio do reticulo sarcoplasmatico (RS) tanto para os animais normotensos quanto para os hipertensos, dado obtido pelo farmaco rianodina. Alem disso, utilizando o farmaco CCCP constatou-se a participacao da mitocondria na genese do EIP produzido pelos nucleotideos em ambos os atrios e para ambos os animais estudados. Conclusao: Portanto, os nossos resultados sugerem que os receptores A1, P2X e P2Y participam da regulacao da funcao contratil do AE e AD e da modulacao da frequencia do AD, de animais normotensos e hipertensos. As diferencas de pD2 e Emax e os resultados dos antagonistas sugerem alteracoes na neurotransmissao purinergica em SHR. Essas alteracoes poderiam ser explicadas, provavelmente, pelo aumento de expressao e/ou da afinidade dos receptores P2 bem como uma diminuicao da expressao e/ou afinidade dos receptores A1. Alem disso, as alteracoes funcionais dos receptores purinergicos sugerem modificacoes na homeostase celular dos ions calcio
- ItemSomente MetadadadosEstudo do papel dos receptores P2 no processo proliferacao e diferenciacao de osteoblastos(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011) Rodrigues, Renata [UNIFESP]