Navegando por Palavras-chave "Técnicas de cultura de células"
Agora exibindo 1 - 11 de 11
Resultados por página
Opções de Ordenação
- ItemSomente MetadadadosA atividade da BS desaminase não é responsável pela morte dos queratinóides que expressam o gene bsrm(gene de resistência a BS modificado)(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Machado, Tamara da Rocha [UNIFESP]; Han, Sang Won [UNIFESP]A epressão do gene bsr leva à síntese da blasticidina S desaminase, que catalisa a reação de desaminação do antibiótico blasticidina S (BS) inativando-o. Como a atividade da enzima é específica para a BS e não para seus análogos, como a citosina ou citidina, o sistema bsr e BS tem sido usado amplamente para experimentos de transformação celular. Com o objetivo de acelerar o processo de seleção, que é uma etapa determinante para a transferência gênica ex vivo, o gene bsr foi modificado nas regiões não codificantes para aumentar a sua expressão gênica, e essa nova versão foi denominada de bsrm. A eficácia do sistema bsrm/BS foi testada em diversos tipos celulares satisfatoriamente, exceto para os queratinócitos. Quando o bsrm foi introduzido nos queratinócitos via vetor retroviral, estas células entraram em apoptose em poucos dias. Parece que a expressão do gene bsrm instabiliza os queratinócitos e provoca estresse celular. A conseqüência disso é a geração de uma série de produtos de estresse oxidativo, tais como o peróxido de hidrogênio e o malonaldialdeído, que são extremamente tóxicos. Para entender o mecanismo molecular e genético de morte celular iniciada com a expressão do gene bsrm, a primeira pergunta que surge é se existe algum substrato da BS desaminase nos queratinócitos. Como a procura deste substrato é uma tarefa muito difícil, a pergunta foi refeita da seguinte forma: a atividade enzimática de BS desaminase é responsável pelo início do processo da morte dos queratinócitos? Esta pergunta tem o apoio de alguns resultados anteriores com o gene bsd, que foi isolado do fungo A. terreus e tem apenas 27,2 por cento de homologia em relação ao bsr. O bsd expressa a BS desaminase com a atividade enzimática bem superior à expressa pelo bsr, mas não tem efeito tóxico nos queratinócitos. Para responder a pergunta do trabalho, inicialmente os sítios responsáveis pela atividade enzimática foram identificados e seus mutantes foram gerados: E61 A, E61 D, C59A, C100A e C103A. Os vetores retrovirais dos mutantes de bsrm foram gerados para comparar com o vetar retroviral LBmSN, que tem a mesma estrutura de vetar que s mutantes, mas carrega o gene bsrm selvagem. Inicialmente, as células produtoras de vírus PA317 mutantes do bsrm e as células alvo, NIH3T3 mutantes do bsrm, foram testadas quanto à capacidade de resistência contra a BS. Todas as células que expressam os mutantes não...(au).
- ItemAcesso aberto (Open Access)Comparação entre membrana amniótica com e sem epitélio como substrato para cultura de células epiteliais do limbo ex vivo(Conselho Brasileiro de Oftalmologia, 2011-04-01) Covre, Joyce Luciana [UNIFESP]; Loureiro, Renata Ruoco [UNIFESP]; Cristovam, Priscila Cardoso [UNIFESP]; Ricardo, José Reinaldo da Silva [UNIFESP]; Freymüller-Haapalainen, Edna [UNIFESP]; Gomes, José Álvaro Pereira [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)PURPOSE: To evaluate the efficacy and ultrastructural aspects of human limbal epithelial cells cultured on amniotic membrane (AM) with and without epithelium. METHODS: Limbal epithelial cell cultures were established from cadaveric cor neo-scleral rim explants derived from 6 different donors. The explants from each donor were placed under 3 different groups: on human preserved AM with epithelium (Group 1), AM deepithelialized with trypsin (Group 2) and control (Group 3). The epithelial cell migration was evaluated under phase contrast microscopy. After 15 days, the amniotic membrane with cells cultures were removed and submitted to scanning and transmission electron microscopy to check for epithelial migration and adhesion. RESULTS: All epithelial cell cultures from the controls grew over the botton of the culture plate wells until reaching confluence. Epithelial cultures grew over all but one denuded amniotic membrane. In the group amniotic membrane with epithelium, epithelial cell growing was observed only in 1 well. CONCLUSIONS: Using this model, denuded amniotic membrane appeared to be the best substrate for epithelial cell migration and adhesion comparing to amniotic membrane with epithelium. Removal of amniotic membrane epithelial seems to be an important step for establishing limbal epithelial cell culture on amniotic membrane.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Estratégias de investigação in vitro e ex vivo dos efeitos do canabidiol sobre aspectos morfológicos e funcionais de células neurais(Universidade Federal de São Paulo, 2021-03-08) Quintella, Miguel Lins [UNIFESP]; Monteiro, Beatriz de Oliveira [UNIFESP]; Romariz, Simone Amaro Alves; http://lattes.cnpq.br/9325741054357205; http://lattes.cnpq.br/0245964878412260; http://lattes.cnpq.br/3865956747218713Introdução: Evidências recentes indicam que o canabidiol (CBD) possui ação neuroprotetora e anti-inflamatória, podendo atuar também como anticonvulsivante, antioxidante e ansiolítico. No entanto, alguns estudos têm demonstrado efeitos tóxicos e pró-apoptóticos do CBD, e o modo pelo qual o CBD atua sobre o sistema nervoso central ainda é desconhecido. Portanto, para compreender esses efeitos contraditórios uma possível estratégia é investigar a ação do CBD in vitro. Objetivo: Assim, o presente estudo teve como proposta analisar in vitro, em células neurais e em fatias (slices) de cérebro, os efeitos do CBD em aspectos morfológicos da doença de Alzheimer (AD), e funcionais da dependência química. Métodos: A tese foi organizada em dois capítulos. No capítulo 1 investigamos as alterações evidenciadas na formação das esferas, migração, crescimento de neuritos e morte neuronal de células neuroprogenitoras (NPC) e de células de neuroblastoma (N2a), na presença do CBD. O peptídeo β-amiloide (Aβ) foi adicionado à cultura como modelo de uma situação patológica simulando aspectos do processo inflamatório da AD e da toxicidade de Aβ. No capítulo 2, investigamos a influência do CBD na liberação de dopamina em fatias do estriado de camundongos tratados com CBD, avaliada por voltametria cíclica, mimetizando um aspecto da dependência química. Assim, foram utilizadas técnicas in vitro de culturas de neuroesferas e de células N2a, e ferramenta eletroquímica de voltametria cíclica de registro em slice, para avaliar aspectos morfológicos e funcionais das possíveis alterações causadas pelo tratamento com CBD. Resultados: Verificamos que o CBD exerce efeito no crescimento e formação de esferas, além de promover morte celular e reduzir a migração e o brotamento de neuritos. Além disso, células tratadas com Aβ também apresentaram redução da viabilidade celular, do crescimento da neuroesfera e de neuritos. As análises por voltametria mostraram não haver diferenças nos níveis de dopamina liberada no estriado de animais tratados com CBD. Em culturas de NPC e N2a foi possível identificar alterações morfológicas promovidas pelo tratamento com CBD. Porém, as análises por voltametria cíclica indicaram que o tratamento prévio com CBD não alterou a liberação de dopamina no estriado. Conclusão: CBD modificou o padrão de viabilidade, proliferação, migração e projeções de neuritos, que poderiam potencializar as alterações presentes na AD. Este estudo oferece insights in vitro sobre os efeitos do CBD.
- ItemSomente MetadadadosEstudo comparativo entre o teste de Sereny e o método de cultura de células HeLa para detectar invasão em colibacilos invasores: influência do tratamento enzimático sobre a invasibilidade(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1982) Horton, Denise Silvina Piccini Quintas [UNIFESP]; Toledo, Maria Regina Fernandes de [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosExpressão do gene do IGF-II em cultura de células tiroidianas (FRTL-5) de ratos(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1990) Kimura, Edna Teruko [UNIFESP]; Maciel, Rui Monteiro de Barros [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosFormação do stratum corneum in vitro e in vivo no enxerto de queratinócitos cultivados e derme acelular humana: estudo histológico e da capacitância elétrica superficial(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1999) Gragnani, Alfredo [UNIFESP]; Ferreira, Lydia Masako [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)O restabelecimento da barreira da epiderme e um fenomeno definitivo e essencial na cobertura das lesoes. Para a determinacao da formacao da barreira epidermica em relacao a hidratacao do stratum comeum (SC), foi medida a capacitancia eletrica superficial (SEC) da epiderme em enxerto de queratinocitos cultivados e derme acelular humana in vitro e in vivo. A medida da SEC in vitro foi realizada 24 h apos a elevacao dos enxertos compostos a interface ar-liquido durante 30 dias. Os enxertos compostos (n=6) apresentaram baixos valores da SEC entre o quarto e o sexto dia apos a elevacao a interface ar-liquido, mostrando a formacao da barreira; voltando aos valores elevados entre o decimo quarto e vigesimo sexto dia, exibindo a deterioracao da barreira. A avaliacao microscopica dos enxertos compostos in vitro (n=6) demonstrou a formacao parcial da camada cornea no terceiro dia e completa no setimo dia apos a elevacao a interface ar-liquido. A medida da SEC e a avaliacao microscopica delimitaram a formacao do SC entre o quarto e o sexto dia. Os enxertos compostos in vitro foram transplantados para o dorso de 5 ratos atimicos apos 10 dias em cultura. A auto-enxertia de pele foi realizada em 3 ratos. A medida da SEC dos enxertos compostos, auto-enxertos e pele normal do rato foi avaliada nos dias 4, 7, 10, 14, 17, 21, 24, 28 e 31 apos o transplante, e foi mantido o baixo valor da SEC antes da enxertia, sugerindo que a interface ar-liquido favoreceu a maturacao do enxerto composto in vitro. Nao foi observada diferenca estatistica entre os enxertos compostos, auto-enxertos de rato e a pele normal do rato. A contracao dos enxertos compostos e auto-enxertos em relacao a area original da lesao no dorso do rato foi avaliada nos periodos da medida da SEC, evidenciando contracao maior dos enxertos compostos apos a retirada do curativo, no setimo dia. Quando comparada com os auto-enxertos de rato, a contracao dos enxertos compostos foi significativamente maior. A medida da SEC e uma tecnica nao invasiva que determina um indice quantitativo da formacao da barreira, que pode ser empregada em estudos experimentais e clinicos na definicao do restabelecimento da barreira da epiderme
- ItemAcesso aberto (Open Access)Hemoderivados como suplemento no meio de cultivo para células-tronco dentárias humanas(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011-07-27) Pisciolaro, Ricardo Luiz [UNIFESP]; Duailibi, Silvio Eduardo [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Introduction: One among many aims of medicine is to overcome injuries inflicted to the organism by diseases, aging and trauma, re-establishing the usual functions. About tissues losses, several authors claim that the ideal replacement is the healthy tissue itself, originated from the same source or developed by Tissue Engineering (TE). However, much research is needed before in vivo application. Objective: To evaluate three different kinds of sera supplies used in stem cell culture media, as to cellular proliferation and cellular injuries on dental stem cell. Methods: Five experiments were made utilizing incompletely developed third molar teeth. After enzymatic digestion, the adult stem cells were cultivated in four different kinds of culture media. Medium I, serum free (SF); medium II, supplied with FBS (heterologous serum- HeS); medium III, supplied with homologous human serum (homologous serum- HoS) and medium IV, supplied with autologous human serum (autologous serum . AuHS).These cultures were analyzed comparatively as to cellular proliferation; they were submitted Von Kossa (VK) and Alizarin Red (AR) markers tests for four weeks (checked weekly), and each two weeks checked for Colonies Forming Unities (CFUs). On the 28th day, all four cultures were submitted to comet assay, and were inspected for possible cellular DNA injuries. The results underwent a non-parametric statistical Friedman fs variance test, with significance (p) . 5%. Results: Culture medium IV reached a cellular proliferation rate higher than medium I, showing a significant result (p*=0,0074). Culture medium II presented a superior proliferation result than medium I, and similar to medium III, although neither of them presented significant result when compared to medium IV. The comet assay fs results showed minor cellular DNA injury in the medium IV cultures, when compared to medium II and III cultures. The CFUs were numerous in the media IV and III cultures, respectively, and there was higher mineralization rate in the medium IV than in the media II and III. Conclusion: The culture medium supplied with AuHS significantly improved cellular proliferation. Human sera proved to be a viable supply to human dental stem cell culture.
- ItemEmbargoHipóxia em fibroblastos humanos cultivados de derme normal e de quelóide(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Keira, Sidney Mamoru [UNIFESP]; Ferreira, Lydia Masako [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo [UNIFESP]O presente estudo teve como objetivos comparar a origem dos fibroblastos humanos, derme normal ou queloide, em situacoes de normoxia e hipoxia, e comparar o efeito da hipoxia em fibroblastos humanos cultivados originados de derme normal e de queloide, atraves da mensuracao da biossintese de colageno. Os fibroblastos foram provenientes de derme normal (fragmentos cirurgicos de pele normal) e de queloide (fragmentos da regiao central de lesoes queloidianas) e foram mantidos em normoxia ou submetidos a uma sessao de hipoxia com uma mistura gasosa composta de nitrogenio e gas carbonico. Por outro lado, para a mensuracao do colageno produzido pelos fibroblastos, determinou-se uma sequencia de procedimentos fisico-quimicos de isolamento dos colagenos tipos I, II e III, no leito celular e no meio de cultura, atraves de reacao de precipitacao com sulfato de amonio, seguido de reacao de precipitacao cromogenica com o corante Sirius Red e finalizado com a mensuracao es pectrofotometrica da biossintese desta proteina. Os resultados submetidos a analise estatistica evidenciaram que a hipoxia, de forma isolada, nao alterou a biossintese de colageno. Contudo, observou-se que os fibroblastos derivados de queloide apresentaram uma biossintese de colageno maior do que os derivados de derme normal, quando mantidos em normoxia ou quando submetidos a hipoxia
- ItemAcesso aberto (Open Access)Importância do co-cultivo com fibroblastos de camundongo 3T3 para estabelecer cultura de suspensão de células epiteliais do limbo humano(Conselho Brasileiro de Oftalmologia, 2008-10-01) Cristovam, Priscila Cardoso [UNIFESP]; Glória, Maria Aparecida da [UNIFESP]; Melo, Gustavo Barreto de [UNIFESP]; Gomes, José Álvaro Pereira [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)PURPOSE: To evaluate the importance of the presence of 3T3 fibroblasts for establishing limbal epithelial cultures from cell suspension obtained from corneo-scleral rims (CSR). METHODS: Corneo-scleral rims from different donors (n=6) had their posterior stroma and endothelium stripped away. Each corneo-scleral rim was divided into three equal segments that were set up in tissue culture in three different conditions: one of the segments was placed with the epithelial side up on the bottom of a 6-well culture plate (Group A). The other two fragments were trypsinized and the obtained cell suspension was cultured with (Group B) or without (Group C) irradiaded 3T3 cells. The cells were cultured in supplemental hormonal epithelial medium (SHEM), the epithelial migration and clone formation in groups A, B and C were evaluated with phase contrast microscopy and rodamine B staining. RESULTS: Epithelial cell growth was observed in 4/6 rims (Group A). All epithelial cell suspensions that were cultured with 3T3 cells (Group B) formed clones. No adhesion or true clone formation (holo- or meroclones) was observed in the cell suspensions that were cultivated without 3T3 (Group C) (p=0.009). CONCLUSIONS: Epithelial cell suspension obtained from corneo-scleral rims in this model needs to be cultivated with 3T3 cells in order to form clones and establish limbal epithelial cell colonies with the potential to be used for ocular surface reconstruction.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Modelo de compressão contínua na cultura de fibroblastos derivados do ligamento periodontal humano(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015) Mattar, Marco Antonio [UNIFESP]; Ferreira, Lydia Masako [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Introdução: Modelos de estudos in vitro são considerados como padrão ouro para análises de atividades celulares que visam mimetizações da dinâmica das células in vivo, inclusive quando as amostras celulares são submetidas à compressão estática. Células quando cultivadas sob um substrato representam a estrutura natural e função dos tecidos in vivo no que diz respeito à fisiologia, forma da célula e seu ambiente. Objetivo: Avaliar a viabilidade e morte celular no modelo de compressão contínua na cultura de fibroblastos humanos derivados do ligamento periodontal. Métodos: Foram selecionados 10 pacientes, submetidos à extrações dos 4 terceiros molares inclusos por indicação ortodôntica. A amostra consistiu de 4 mm2 de tecido periodontal do terço médio das raízes. A mesma foi cultivada até a 6ª passagem e depois as células foram divididas em dois grupos: Grupo Controle (GC), com cultivo em monocamada e substrato sem aplicação de força durante 6h e Grupo Experimental (GE3 e GE4), com cultivo em monocamada e substrato com aplicação de carga de 3 e 4 g/cm2 durante 6h. Resultados: Tanto o GC quanto o GE3 e GE4, monocamada e substrato, não apresentaram diferença estatística nos valores de viabilidade celular e apoptose. Com o aumento da carga o GE4 indicou maior necrose em relação ao GC e o GE3. Conclusão: Não houve diferença na utilização de substrato de colágeno na cultura de fibroblastos periodontais em nenhum dos parâmetros avaliados, mas houve maior necrose com o aumento da carga na avaliação intragrupos. Descritores: Ligamento periodontal, Sobrevivência celular, Apoptose, Técnicas de cultura de células.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Vitamina C no estresse oxidadtivo em queratinócitos cultivados e submetidos a hipóxia(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2002) Santos, Laelcio Lins Ramos dos [UNIFESP]; Ferreira, Lydia Masako [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo [UNIFESP]O presente estudo teve como objetivo verificar o efeito da Vitamina C em culturas de queratinocitos humanos submetidos a hipoxia gasosa, quanto a agressao celular e ao estresse oxidativo. O metodo constitui-se no isolamento e cultivo de queratinocitos humanos em 40 garrafas, que foram divididas em quatro grupos: controle, controle com vitamina C, hipoxia e hipoxia com vitamina C. Os queratinocitos foram submetidos a hipoxia por substituicao gasosa no interior das garrafas por uma mistura contendo 95 por cento de nitrogenio e 5 por cento de C02,durante 30 minutos. Foram avaliados a agressao celular atraves de dosagem DHL e o estresse oxidativo pela dosagem de MDA. Os resultados demonstraram que a hipoxia aumentou em cerca de 8 vezes a liberacao de DHL pelos queratinocitos e que a vitamina C foi eficaz em inibir esta agressao. Quanto a producao de radicais livres, a hipoxia dobrou os valores de MDA dos grupos controle, sendo que a vitamina C levou a um aumento de peroxidacao lipidica. Assim, concluimos que a vitamina C foi capaz de diminuir de maneira significante a agressao celular pela hipoxia, havendo entretanto piorado o estresse oxidativo (nao significante)