Efeito do veneno de Lonomia obliqua em macrófagos humanos derivados da linhagem THP-1
Data
2020-08-27
Autores
Oliveira, Douglas Souza 
Orientadores
Tavassi, Ana Marisa Chudzinski
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
Envenomation caused by contact with Lonomia obliqua bristles is characterized by pain, intense systemic inflammatory reaction and disturbances in the coagulation cascade which, dependent on the severity of the case, is followed by severe clinical manifestations that can lead to fatal outcome. However, the role of immune system components in these effects is still poorly understood. Therefore, the present study evaluated the direct effect of Lonomia obliqua crude bristle extract on macrophages derived from THP-1 cell line. We used protocol for monocyte differentiation into macrophage incubating the cells with Phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA). After obtaining and characterizing these cells, we evaluated the cytotoxic effect of the venom and its ability to modulate inflammatory markers in macrophages, such as membrane proteins and a cytokine and chemokine release profile. Our results showed that the venom had no cytotoxic effects at the different concentrations used. However, at 5 μg/mL the venom was able to directly exert a potent pro-inflammatory reaction in macrophages. Characterized by the activation of the NF-kB transcription factor pathway, increasing in co-stimulating molecules expression, such as CD80 and CD83, and a high releasing of pro-inflammatory mediators such as, TNF-α, IL-1β, IL- 6, IL-8 , CXCL10 and CCL3.These results presented in this dissertation suggest that macrophages can play an important role during the inflammatory response orchestration present in envenomation caused by Lonomia obliqua caterpillars.
O envenenamento causado pelo contato com as cerdas da lagarta da espécie Lonomia obliqua é caracterizado por dor, intensa reação inflamatória sistêmica e distúrbios na cascata de coagulação, que dependendo da gravidade do caso, podem levar a complicações clínicas fatais. No entanto o papel de componentes do sistema imune nesses efeitos ainda é pouco conhecido. O presente trabalho avaliou o efeito direto do extrato bruto de cerdas de Lonomia obliqua em macrófagos derivados da linhagem THP-1. Utilizamos protocolo de diferenciação de monócitos em macrófagos incubando as células com Phorbol-12-miristato-13-acetato (PMA). Após obtenção e caracterização dos macrófagos, avaliamos o efeito citotóxico do veneno e sua habilidade de modular marcadores inflamatórios como proteínas de membranas e o perfil de citocinas e quimiocinas secretadas. Nossos resultados mostraram que o extrato das cerdas, contendo o veneno não foi citotóxico nas diferentes concentrações testadas. Contudo, a concentração de 5 μg/mL do mesmo foi capaz de exercer diretamente uma potente ativação pró-inflamatória em macrófagos. Foi detectado que a ativação dos macrófagos ocorreu via o fator de transcrição NF-kB, aumento na expressão de moléculas coestimuladoras, CD80 e CD83, e alta liberação de mediadores pró-inflamatórios como, TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-8, CXCL10 e CCL3. O conjunto de dados apresentados nessa dissertação apontam que os macrófagos podem desempenhar papel importante durante a orquestração da resposta inflamatória presente no envenenamento por Lonomia obliqua.
O envenenamento causado pelo contato com as cerdas da lagarta da espécie Lonomia obliqua é caracterizado por dor, intensa reação inflamatória sistêmica e distúrbios na cascata de coagulação, que dependendo da gravidade do caso, podem levar a complicações clínicas fatais. No entanto o papel de componentes do sistema imune nesses efeitos ainda é pouco conhecido. O presente trabalho avaliou o efeito direto do extrato bruto de cerdas de Lonomia obliqua em macrófagos derivados da linhagem THP-1. Utilizamos protocolo de diferenciação de monócitos em macrófagos incubando as células com Phorbol-12-miristato-13-acetato (PMA). Após obtenção e caracterização dos macrófagos, avaliamos o efeito citotóxico do veneno e sua habilidade de modular marcadores inflamatórios como proteínas de membranas e o perfil de citocinas e quimiocinas secretadas. Nossos resultados mostraram que o extrato das cerdas, contendo o veneno não foi citotóxico nas diferentes concentrações testadas. Contudo, a concentração de 5 μg/mL do mesmo foi capaz de exercer diretamente uma potente ativação pró-inflamatória em macrófagos. Foi detectado que a ativação dos macrófagos ocorreu via o fator de transcrição NF-kB, aumento na expressão de moléculas coestimuladoras, CD80 e CD83, e alta liberação de mediadores pró-inflamatórios como, TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-8, CXCL10 e CCL3. O conjunto de dados apresentados nessa dissertação apontam que os macrófagos podem desempenhar papel importante durante a orquestração da resposta inflamatória presente no envenenamento por Lonomia obliqua.