Clonagem, expressão e caracterização de um inibidor de calicreína tecidual do tipo Kunitz presente em intestino de carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus
Data
2013
Autores
Abreu, Patricia de Andrade 
Orientadores
Tanaka, Aparecida Sadae
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Resumo
O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus e um ectoparasito exclusivo de bovinos. No Brasil, e o vetor de agentes causadores da Babesiose, Anaplasmose e Riquetsiose, o que resulta em enormes prejuizos a pecuaria. O controle de R. microplus e feito principalmente pelo uso de acaricidas, no entanto a aquisicao de resistencia assim como a contaminacao dos produtos derivados de bovinos, faz com que a busca por metodos alternativos de controle sejam desenvolvidos. Um grupo de moleculas importantes na fisiologia desse carrapato sao os inibidores de proteases, ja tendo sido descrito inumeros inibidores de proteases da familia tipo Kunitz-BPTI envolvidos em processos como: controle da coagulacao, agregacao plaquetaria do hospedeiro vertebrado, mas tambem na resposta imune do proprio ectoparasito. Neste trabalho clonamos, expressamos e caracterizamos o inibidor de calicreina tecidual do tipo Kunitz, denominado de BmKK91. Esse inibidor apresenta dois dominios Kunitz-BPTI, massa molecular teorica de aproximadamente 16 kDa. O BmKK91 recombinante foi expresso em levedura P. pastoris, apresentando alto nivel de expressao. O inibidor foi purificado com uma unica etapa, em cromatografia de troca ionica. O inibidor purificado inibiu as serinoproteases tripsina, calicreina pancreatica porcina (PPK) e calicreina plasmatica humana (HuPK) (Ki = 0,2 nM, 300 nM e 847 nM, respectivamente). O BmKK91 purificado apresentou massa molecular de 13 kDa por SDS-PAGE, no entanto a massa molecular obtida por espectrometria de massa MALDI TOF esta de acordo com a massa molecular teorica esperada de 16,3 kDa. As perspectivas deste trabalho serao a caracterizacao de BmKK91 sobre calicreinas teciduais humanas que sao enzimas importantes em processos fisiopatologicos como: tumores e sua progressao e avaliacao do potencial vacinal de BmKK91 em bovinos.
Descrição
Citação
ABREU, Patrícia de Andrade. Clonagem, expressão e caracterização de inibidor de calicreína tecidual do tipo Kunitz presente em intestino de carrapato Rhipicephalus(Boophilus) microplus. 2013. 71f. Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo. São Paulo, 2013.