Evento adverso locorregional pós-vacina BCG como sinalizador de defeito genético-molecular associado a um erro inato da imunidade
Data
2021
Autores
Monteiro, Sandra Aparecida Moreira Gomes 
Orientadores
Pinto, Maria Isabel De Moraes
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
Objectives: To describe the frequency of genetic variants associated with monogenic diseases with inborn errors of immunity in children who have had localized adverse events after BCG vaccination. Patients and Methods: Forty-four children (probands) with a history of localized adverse event to the BCG vaccine (BCGitis) who had an indication of specific drug treatment (isoniazid) were selected. For cases with a history of BCGitis in family members, when available, the other affected family members were included. Human immunodeficiency virus (HIV) infection was considered an exclusion criterion. All patients were evaluated with immunological tests, which included immunophenotyping of T, B and NK cells by flow cytometry, evaluation of phagocytic function (dihydro-rodamin test - DHR) and production of IL-12 and IFNg after in vitro stimulation with BCG and IL-12 or IFNg. When necessary, complement tests were performed and humoral immunity was assessed using immunoglobulins. Whole Exome Sequencing (WES) by New Generation Sequencing (NGS) was performed from peripheral blood samples. The exome sequences were filtered for variants in the 344 genes associated with 354 Inborn Errors of Immunity (IEI-Genes) described by the Primary Immunodeficiency Disease Committee of the International Union of Immunological Societies - IUIS. The candidate variants identified after NGS analysis that were selected were then validated by Sanger sequencing. Samples of the parents and/or siblings of the proband, when available, were submitted to Sanger sequencing to study family segregation. Results: Among the 44 probands, 36 were sporadic cases and eight had other cases of BCGitis in their family. Among the sporadic cases, 25/36 (69.4%) presented, besides BCGitis, immunoallergic conditions or other infectious conditions that required hospitalization. Among the sporadic cases, 15/36 (41.7%) presented variants in IEI-genes classified as pathogenic or likely pathogenic. Among familal cases, 6/8 (75%) presented, in addition to BCGitis, immunoalergic conditions or other infectious conditions that required hospitalization and of these, 4/8 (50%) presented variants in IEI-genes classified as probably pathogenic who met inclusion criteria in this analysis. Considering all probands in the initial cohort, 19/44 (43.2%) presented variants classified as pathogenic or likely pathogenic in IEI-genes. Conclusions: Variants in genes related to inborn erros of immunity and classified as pathogenic or likely pathogenic were found in the exoma analysis of 43.2% of the probands who presented a localized adverse event following BCG vaccination. All these variants found may be related to BCGitis, suggesting that these localized adverse events following BCG immunization may be indicative of a molecular defect related to an inborn error of immunity.
Objetivos: Descrever a frequência de variantes genéticas associadas a doenças monogênicas que cursam com erros inatos da imunidade em crianças que apresentaram eventos adversos locorregionais pós-vacina BCG. Casuística e Métodos: Foram selecionadas 44 crianças (probandos) com história de evento adverso locorregional à vacina BCG (BCGite) que apresentavam indicação de tratamento medicamentoso específico (isoniazida). Para casos com histórico de BCGite em familiares, quando disponíveis, os demais membros afetados da família foram incluídos. A infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) foi considerada critério de exclusão. Todos os pacientes foram avaliados com testes imunológicos, que incluíram imunofenotipagem de células T, B e NK por citometria de fluxo, avaliação da função fagocítica (teste da di-hidrorodamina - DHR) e produção de IL-12 e IFNg após estimulação in vitro com BCG e IL-12 ou IFNg. Quando necessário, foram realizados ensaios de complemento e avaliada a imunidade humoral por meio de imunoglobulinas. O sequenciamento completo do exoma (WES) foi realizado utilizando o Sequenciamento de Nova Geração (NGS) a partir de amostras de sangue periférico. As sequências de exoma foram filtradas para variantes nos 344 genes associados a 354 Erros Inatos de Imunidade (IEI-Genes) descritos pelo Primary Immunodeficiency Disease Committee of the International Union of Immunological Societies - IUIS. As variantes candidatas identificadas após análise de NGS e selecionadas foram validadas por sequenciamento de Sanger. Amostras dos pais e/ou irmãos do probando, quando disponíveis, foram submetidas ao sequenciamento de Sanger para estudar a segregação familiar. Resultados: Dentre os 44 probandos, 36 eram casos esporádicos e oito apresentavam outros casos de BCGite na família. Dentre os casos esporádicos, 25/36 (69,4%) apresentaram, além da BCGite, alterações imuno-alérgicas de intensidade variável ou outros quadros infecciosos que necessitaram hospitalização. Dentre o total de casos esporádicos, 15/36 (41,7%) apresentaram variantes em IEI-genes classificadas como patogênicas ou provavelmente patogênicas. Dentre os casos familiares, 6/8 (75%) apresentavam além da BCGite alterações imuno-alérgicas de intensidade variável ou outros quadros infecciosos que necessitaram hospitalização e destes, 4/8 (50%) apresentaram variantes em IEI-genes classificadas como provavelmente patogênicas que cumpriram critérios de inclusão nesta análise. Considerando todos os probandos da coorte inicial, 19/44 (43,2%) apresentaram variantes classificadas como patogênicas ou provavelmente patogênicas em IEI-genes. Conclusões: Variantes em genes relacionados a erros inatos da imunidade e classificadas como patogênicas ou provavelmente patogênicas foram encontradas na análise do exoma de 43,2% dos probandos que apresentaram evento adverso locorregional pós-vacina BCG. Todas as variantes encontradas podem estar relacionadas às BCGites, sugerindo que os eventos adversos locorregionais pós-vacina BCG podem ser sinalizadores de um erro inato de imunidade.
Objetivos: Descrever a frequência de variantes genéticas associadas a doenças monogênicas que cursam com erros inatos da imunidade em crianças que apresentaram eventos adversos locorregionais pós-vacina BCG. Casuística e Métodos: Foram selecionadas 44 crianças (probandos) com história de evento adverso locorregional à vacina BCG (BCGite) que apresentavam indicação de tratamento medicamentoso específico (isoniazida). Para casos com histórico de BCGite em familiares, quando disponíveis, os demais membros afetados da família foram incluídos. A infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) foi considerada critério de exclusão. Todos os pacientes foram avaliados com testes imunológicos, que incluíram imunofenotipagem de células T, B e NK por citometria de fluxo, avaliação da função fagocítica (teste da di-hidrorodamina - DHR) e produção de IL-12 e IFNg após estimulação in vitro com BCG e IL-12 ou IFNg. Quando necessário, foram realizados ensaios de complemento e avaliada a imunidade humoral por meio de imunoglobulinas. O sequenciamento completo do exoma (WES) foi realizado utilizando o Sequenciamento de Nova Geração (NGS) a partir de amostras de sangue periférico. As sequências de exoma foram filtradas para variantes nos 344 genes associados a 354 Erros Inatos de Imunidade (IEI-Genes) descritos pelo Primary Immunodeficiency Disease Committee of the International Union of Immunological Societies - IUIS. As variantes candidatas identificadas após análise de NGS e selecionadas foram validadas por sequenciamento de Sanger. Amostras dos pais e/ou irmãos do probando, quando disponíveis, foram submetidas ao sequenciamento de Sanger para estudar a segregação familiar. Resultados: Dentre os 44 probandos, 36 eram casos esporádicos e oito apresentavam outros casos de BCGite na família. Dentre os casos esporádicos, 25/36 (69,4%) apresentaram, além da BCGite, alterações imuno-alérgicas de intensidade variável ou outros quadros infecciosos que necessitaram hospitalização. Dentre o total de casos esporádicos, 15/36 (41,7%) apresentaram variantes em IEI-genes classificadas como patogênicas ou provavelmente patogênicas. Dentre os casos familiares, 6/8 (75%) apresentavam além da BCGite alterações imuno-alérgicas de intensidade variável ou outros quadros infecciosos que necessitaram hospitalização e destes, 4/8 (50%) apresentaram variantes em IEI-genes classificadas como provavelmente patogênicas que cumpriram critérios de inclusão nesta análise. Considerando todos os probandos da coorte inicial, 19/44 (43,2%) apresentaram variantes classificadas como patogênicas ou provavelmente patogênicas em IEI-genes. Conclusões: Variantes em genes relacionados a erros inatos da imunidade e classificadas como patogênicas ou provavelmente patogênicas foram encontradas na análise do exoma de 43,2% dos probandos que apresentaram evento adverso locorregional pós-vacina BCG. Todas as variantes encontradas podem estar relacionadas às BCGites, sugerindo que os eventos adversos locorregionais pós-vacina BCG podem ser sinalizadores de um erro inato de imunidade.