Avaliação do desenvolvimento de embriões bovinos pós-biopsia: proposição de modelo de treinamento
Data
1999
Autores
Almodin, Carlos Gilberto 
Orientadores
Moron, Antonio Fernandes
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
O desejo de poder realizar o diagnostico citogenetico mais precocemente, obtendo-se informacoes precisas e seguras esta sendo possivel com o diagnostico pre-implantacao, o qual vem se somar aos procedimentos ja existentes. Para que possamos realizar o diagnostico pre-implantacao e necessario a obtencao de fragmentos dos embrioes em estudo, para que se possa analisar por meio da Hibridizacao in-situ (FISH) ou por Reacao da Polimerase em Cadeia (PCR). Desenvolvemos este trabalho objetivando montar um protocolo animal para estudo e treinamento. Realizamos procedimentos, com retirada dos ovarios de vacas em abatedouro, sem qualquer criterio de escolha das mesmas. Os ovarios apos serem assepticamente retirados foram levados encuba esteril para laboratorio de fertilizacao. Os foliculos com diametro inferior a 8 mm foram puncionados com seringa descartavel de 10 ml e agulha 21 G. Os ovocitos retirados do liquido folicular sob microscopio estereoscopio foram lavados em solucao de Dulbecco's (PBS) e transferidos para placas Nunc contendo meio de cultura para maturacao. Os ovocitos obtidos, separados para o estudo apos 24 horas de maturacao, foram fertilizados com aproximadamente l.OOO.OOO/ml de espermatozoides e mantidos em cultivo em meio de fertilizacao. Apos fertilizados, foram transferidos para placas de co-cultura com celulas vero, e mantidos em incubadora com 5 por cento CO2, 20 por cento oxigenio e 75 por cento nitrogenio a 370 C e umidade de 90 por cento , por cinco dias. Apos este periodo, separamos os embrioes com 8 ou mais blastomeros, aleatoriamente, em dois grupos. Um deles foi mantido em cultivo com o mesmo meio e mesmas condicoes para servir como grupo controle, o outro foi submetido a biopsia, com abertura da zona pelucida com lamina de corte ajustada em microscopio optico Olympus. Apos abertura da zona pelucida, retiramos l ou 2 blastomeros dos embrioes, com a utilizacao de microscopio Diaphot Nikon, micromanipuiadores Narishige MMO-204 e injetores-aspiradores IM6, com micropipetas Humagem. Em seguida a biopsia, os embrioes permaneceram em co-cultura por mais tres dias. Ao final deste tempo, avaliamos o desenvolvimento comparativamente com o grupo de controle. Foi realizado estudo morfologico dos embrioes ate o estagio de blastocito ou extrusao da zona pelucida(hatching), identificando o fenomeno de cavitacao e estreitamento da zona pelucida, e contagem do numero de celulas atraves de coloracao especificas para nucleos...(au)
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 1999. 70 p.