Perfil proteolítico de células de leucemia mielóide crônica
Data
2020-07-30
Autores
Amador, Fernanda Cardoso 
Orientadores
Juliano, Maria Aparecida
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
Objective: Identification and differentiation of protease classes present in Chronic Myeloid Leukemia cells (K562 and Lucena 1) by studying the interference of pH and variation of enzymatic substrates on their proteolytic activities; comparison of intracellular proteases of the two cell lines by peptidomi analysis; in silico data processing for protease mapping. Methods: Lyses of the two cell lines studied and substrate variation and pH analysis were performed in fluorescence studies by substrate hydrolysis, chromatographic peptide analysis and mass spectrometry and in silico data treatment for protease mapping. Results: It was possible to identify through the tests performed the classes of proteases present in the two cell lines and differentiate them. Most proteases found in both lines are similar, corroborating that Lucena 1 cells are similar to K562 cells – both Chronic Myeloid Leukemia cell lines - containing only the difference in the development of Lucena 1 Multiple Drug Resistance. However, the presence of protease Suppressor of tumorigenicity 14 protein (EC: 3.4.21.109) only in Lucena 1 cells concludes the difference sought in this research. Conclusions: The protease in question has been described as an adjunct in the development of Multiple Drug Resistance in Chronic Myeloid Leukemia cells treated with doxorubicin chemotherapy. The identification of this proteolytic enzyme is fundamental for the development of future treatment methods, considering that the drugs for the cure of leukemia are mostly functional, having as a misfortune the tumor cells perspicacity to develop resistance to chemotherapy.
Objetivo: Identificação e diferenciação das classes das proteases presentes em células de Leucemia Mielóide Crônica (K562 e Lucena 1) por estudo da interferência de pH e variação de substratos enzimáticos sobre suas atividades proteolíticas; comparação de proteases intracelulares das duas linhagens celulares, por análise peptidômica; tratamento de dados in silico para mapeamento de proteases. Métodos: Foram realizadas lises das duas linhagens celulares estudadas e análises por variação de substratos e pHs em estudos de fluorescência por hidrólise de substratos, análise peptidômica por cromatografia e espectrometria de massas e tratamento in silico de dados para mapeamento de proteases. Resultados: Foi possível identificar através dos ensaios realizados as classes de proteases presentes nas duas linhagens e diferenciá-las. A maioria das proteases encontradas em ambas as linhagens são semelhantes, corroborando com o fato de as células Lucena 1 serem semelhantes às células K562 – ambas linhagens de Leucemia Mielóide Crônica - contendo apenas a diferença do desenvolvimento da Resistência à Múltiplas Drogas na Lucena 1. Contudo, a presença da protease Suppressor of tumorigenicity 14 protein (EC:3.4.21.109) apenas nas células de Lucena 1 concluem a diferença buscada nesta pesquisa. Conclusões: A protease em questão foi descrita como coadjuvante no desenvolvimento da Resistência à Múltiplas Drogas em células de Leucemia Mielóide Crônica tratadas com quimioterápico doxorrubicina. A identificação desta enzima proteolítica é fundamental para o desenvolvimento de métodos de tratamentos futuros, tendo em vista que os medicamentos para cura da Leucemia são funcionais em sua grande maioria tendo como infortúnio a perspicácia das células tumorais em desenvolverem resistência aos quimioterápicos.
Objetivo: Identificação e diferenciação das classes das proteases presentes em células de Leucemia Mielóide Crônica (K562 e Lucena 1) por estudo da interferência de pH e variação de substratos enzimáticos sobre suas atividades proteolíticas; comparação de proteases intracelulares das duas linhagens celulares, por análise peptidômica; tratamento de dados in silico para mapeamento de proteases. Métodos: Foram realizadas lises das duas linhagens celulares estudadas e análises por variação de substratos e pHs em estudos de fluorescência por hidrólise de substratos, análise peptidômica por cromatografia e espectrometria de massas e tratamento in silico de dados para mapeamento de proteases. Resultados: Foi possível identificar através dos ensaios realizados as classes de proteases presentes nas duas linhagens e diferenciá-las. A maioria das proteases encontradas em ambas as linhagens são semelhantes, corroborando com o fato de as células Lucena 1 serem semelhantes às células K562 – ambas linhagens de Leucemia Mielóide Crônica - contendo apenas a diferença do desenvolvimento da Resistência à Múltiplas Drogas na Lucena 1. Contudo, a presença da protease Suppressor of tumorigenicity 14 protein (EC:3.4.21.109) apenas nas células de Lucena 1 concluem a diferença buscada nesta pesquisa. Conclusões: A protease em questão foi descrita como coadjuvante no desenvolvimento da Resistência à Múltiplas Drogas em células de Leucemia Mielóide Crônica tratadas com quimioterápico doxorrubicina. A identificação desta enzima proteolítica é fundamental para o desenvolvimento de métodos de tratamentos futuros, tendo em vista que os medicamentos para cura da Leucemia são funcionais em sua grande maioria tendo como infortúnio a perspicácia das células tumorais em desenvolverem resistência aos quimioterápicos.