Síntese, estudos conformacionais e atividade biológica do peptídeo antimicrobiano oligoventina e análogos

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dc.contributor.advisorSilva Junior, Vani Xavier da {UNIFESP]
dc.contributor.advisor-coSilva Junior, Pedro Ismael da [UNIFESP]
dc.contributor.advisor-coLatteshttp://lattes.cnpq.br/7158586957386749pt_BR
dc.contributor.advisorLatteshttp://lattes.cnpq.br/8202238208943023pt_BR
dc.contributor.authorMendes, Roberta Brandão [UNIFESP]
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/9759007573287366pt_BR
dc.coverage.spatialSão Paulopt_BR
dc.date.accessioned2023-11-21T18:04:44Z
dc.date.available2023-11-21T18:04:44Z
dc.date.issued2023-11-14
dc.description.abstractIntrodução: A oligoventina é um peptídeo antimicrobiano (PAM) isolado a partir dos ovos da aranha armadeira Phoneutria nigriventer, contendo 8 resíduos de aminoácidos (Gln-Pro-Phe-Ser-Leu-Glu-Arg-Trp) e apresenta atividade contra bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e levedura e não apresenta atividade hemolítica. Objetivos: Estudar a relação estrutura-atividade da oligoventina e seus análogos, onde foram feitas modificações pontuais para tentar entender seu mecanismo de ação. Os peptídeos foram projetados com modificações C- e N- terminal; sínteses retro-inversas e D-aminoácidos e acrescentando cargas positivas por meio de substituições de arginina ao longo da cadeia (Arg-scan) para tentar melhorar sua atividade antimicrobiana. Metodologia: Os peptídeos foram sintetizados pela síntese em fase sólida, purificados por HPLC e caracterizados por LC/ESI-MS. Os estudos da atividade antimicrobiana foram determinados por ensaio de inibição de crescimento em meio líquido; os ensaio de atividade hemolítica foram realizados utilizando sangue recém coletado tipo A, fator RH positivo; os estudos de degradação utilizando plasma humano recém coletado com diferentes tempos de incubação (0, 1, 2 e 24 horas) ; os estudos conformacionais foram determinados por Dicroísmo circular em diferentes concentrações de TFE (0, 10, 30 e 50% de TFE/H2O) utilizando o espectropolarímetro e os ensaios de atividade antitumoral foram determinados contra células normais (Vero) e diferentes células tumorais ( K562, Jurkat, B16F10 e Neuro 2A) utilizando o Alamar BLUE e MTT para a viabilidade celular. Resultados: Analisando os resultados, na atividade antimicrobiana, quando comparados com a Ogv, que apresentou um CMI de 400 µM, os análogos que apresentaram uma atividade com CMIs melhores foram: Ac-Ogv-NH2 (12,5 µM), Ac-[Retro]-Ogv-NH2 (25 µM), Ac-[Des-Phe3]-D-Ogv-NH2(12,5 µM), Ac-D-Ogv-NH2 (50 µM),Ac-Ogv (100 µM), Ogv-NH2 (100 µM), [Arg2]-Ogv (100 µM), [Arg3]-Ogv (100 µM) e [Arg4]-Ogv (50 µM). Na atividade hemolítica, os análogos que apresentaram as melhores atividades, não apresentaram hemólise nas concentrações testadas, enquanto o restante, apresentou taxa de hemólise mais alta. Na degradação, os análogos com modificações C- e N- terminal que foram acetilados e amidados, respectivamente, foram mais estáveis e não degradaram em até 24 horas de ensaio, enquanto os peptídeos com extremidades livres, degradaram em 2 horas. Nas estruturações secundárias dos análogos testados, todos possuem estruturas randômicas, exceto o análogo [Arg4]-Ogv, cujo espectro apresentou uma conformação mais rígida, mas sem adquirir conformação específica. Contra as células tumorais eritroleucêmicas K562 e melanoma murino, os análogos não apresentaram resultados significativos. Contra as Jurkat, Ac-(Glu1)-Ogv-NH2 foi a que apresentou a maior atividade em comparação com a Ogv. Contra as células Vero, a Ogv preservou cerca de 73% de viabilidade celular, juntamente com todos os análogos testados. Já contra as células N2A, os análogo que apresentaram os melhores resultados foram a [Arg4]-Ogv, com viabilidade celular de 45%, a Ogv e o análogo Ac-[Retro]-Ogv-NH2 com 53% de viabilidade celular. Conclusão: Esses estudos apresentaram alguns análogos com resultados melhores que a Ogv, sendo eles: Ac-Ogv-NH2, Ac-D-Ogv-NH2, Ac-[Retro]-Ogv-NH2 e Ac-[Des-Phe3]-D-Ogv-NH2 com as melhores atividades antimicrobianas, não foram degradados e não apresentaram atividade hemolítica no MIC que possuem atividade. A [Arg4]-Ogv foi a que apresentou um amplo espectro de ação, contra todas as bactérias Gram-positivas e Gram-negativas testadas e a única que apresentou atividade contra fungo filamentoso e levedura. A acetilação e amidação dos peptídeos tiveram um papel fundamental na melhora da atividade antimicrobiana, hemolítica e resistência a degradação. Novos estudos se fazem necessários para elucidar e se obter um melhor entendimento sobre a atividade desse peptídeo.pt_BR
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)pt_BR
dc.description.sponsorshipID88882.330464/2019-01pt_BR
dc.emailadvisor.customVani.junior@ufabc.edu.brpt_BR
dc.format.extent121 f.pt_BR
dc.identifier.citationMENDES, Roberta Brandão. Síntese, estudos conformacionais e atividade biológica do peptídeo antimicrobiano oligoventina e análogos. 2023. 210 f. Tese (Doutorado em Biologia Molecular) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2023.pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.unifesp.br/handle/11600/69515
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulopt_BR
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccesspt_BR
dc.subjectOligoventinapt_BR
dc.subjectSíntese de peptídeospt_BR
dc.subjectPhoneutria nigriventerpt_BR
dc.subjectPeptídeos de ovo de aranhapt_BR
dc.subjectAtividade antimicrobianapt_BR
dc.subjectAtividade hemolíticapt_BR
dc.subjectDicroismo circularpt_BR
dc.titleSíntese, estudos conformacionais e atividade biológica do peptídeo antimicrobiano oligoventina e análogospt_BR
dc.title.alternativeSynthesis, conformational studies, and biological activity of the antimicrobial peptide oligoventin and analogsen
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesispt_BR
unifesp.campusEscola Paulista de Medicina (EPM)pt_BR
unifesp.graduateProgramCiências Biológicas (Biologia Molecular)pt_BR
unifesp.knowledgeAreaCiências Biológicas IIpt_BR
unifesp.researchAreaEstrutura, atividades e síntese de peptídeos e proteinaspt_BR
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