PPG - Medicina (Hematologia)

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https://hdl.handle.net/11600/61354

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Navegando PPG - Medicina (Hematologia) por Orientador(es) "Chauffaille, Maria de Lourdes Lopes Ferrari Chauffaille [UNIFESP]"

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    Determinação do perfil lipídico metabolômico plasmático, por espectrometria de massas, de pacientes com neoplasias mieloproliferativas crônicas, síndromes mielodisplásicas e leucemia mieloide aguda
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-03-25) Oliveira, Adriana Ramos de [UNIFESP]; Chauffaille, Maria de Lourdes Lopes Ferrari Chauffaille [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introduction: There are thousands of individual lipid species in the cells interacting in different compartments in the cell membrane. The functional consequences of this diversity are not yet fully understood and new technological tools are being developed with the aim of a more comprehensive investigation. Over the past two decades, mass spectrometry (MS) has emerged as the main method used in lipidomics analysis, which allows the structural characterization and quantification of complex lipids and their metabolites. Due to the importance of this field we have considered the use of the lipidomic innovative platform to identify differences in the plasma lipid metabolomic profile of hematological patients with Myeloid Neoplasms. Purpose: Determine the lipid metabolomic profile comparative of blood plasma samples from healthy individuals and patients with Myeloproliferative Neoplasms, Myelodysplastic Syndromes and Acute Myeloid Leukemia and evaluate the existence of possible biomarkers. Methods: Untargeted Shotgun MS/MS Analysis was performed from plasma samples from 153 participants were analyzed being, 90 of the Control Group, 43 Myeloproliferative Neoplasms, 11 Myelodysplastic Syndromes and 9 Acute Myeloid Leukemias. Data were acquired using the AB-Sciex Analyst TF, processed using the AB-Sciex LipidView? and the web-based analytical pipeline MetaboAnalyst 2.0. Results: Untargeted analysis identified in negative and positive-modes a total of 658 features at 2 ppm resolution. PCA and PLS-DA analysis revealed clear discrimination among groups, in particular for AML patients. Main lipid groups differentially expressed were: Monoacylglycerols (MAG), Glucosylceramide E (GlcdE), Ethyl Esters (EE), Lysophosphatidic acid (LPA), Sulfoquinovosil diacylglycerols (SQDG), Monoglycerols (MG), Methyl Ethanolamines (ME), Lysophosphatidylcholines (LPC), Dimethyl Phosfatidyletanilamines (DMPE), Monometylphosphatidiletanolamines (MMPE), Ceramide-1-phosphate (CerP), Glicerophosphoglycerols (GP), Lysomonomethyl-Phosphatidyl ethanolamines (LMMPE), Phosphatidic Acids (PA), Ergosterols (ERG), Glycerophosphoserine (PS), Diacylglycerols (DAG), Hexocylceramides (HexCer) and Lanosterol (Lan). ROC Curve Analysis revealed Total LMMPE as the strongest discriminating marker between Controls from Patients with MDS or AML (Sensitivity= 0.95 (0.824-1); Specificity= 0.8941 (0.847-0953); Positive Likelihood Ratio= 8.972 and Negative Likelihood Ratio =0.05592 and T Test= 7.576E-12). In addition these lipids were also able to differentiate MDS and AML from NMP (Sensitivity= 0.9118 (0.824-1), Specificity= 0.95 (0.85-1); Positive Likelihood Ratio= 18.2 and Negative Likelihood Ratio= 0.05592). Conclusions: The Myeloproliferative Neoplasms from the point of view of global plasma lipidomics are accompanied by several modifications. In particular the Lysomonomethyl-Phosphatidyl ethanolamines seems to play important differentiating roles among them.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Investigação da relação entre as células tregulatórias e expressão do gene IRF-1 com a patogênese e fenômenos autoimunes nas síndromes mielodisplásicas: avaliação prospectiva e sequencial
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2015-04-29) Perazzio, Aline dos Santos Borgo [UNIFESP]; Chauffaille, Maria de Lourdes Lopes Ferrari Chauffaille [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    NTRODUÇÃO: As síndromes mielodisplásicas (SMD) são caracterizadas pela proliferação clonal das células da medula óssea (MO), com produção ineficaz de linhagens celulares e conseqüente citopenia periférica. A patogênese precisa das SMD é ainda desconhecida. A boa resposta a terapia com globulina antitimocítica corrobora a hipótese de que sejam doenças imunomediadas e têm sido relatados que cerca de 10% desses pacientes apresentam fenômenos autoimunes. Estudos têm mostrado presença de funções imunológicas anormais e inibidores mediados por células T na hematopoese. Diante disso, há interesse em avaliar parâmetros imunes que possam relacionarse à SMD como as células Tregulatórias e o gene Fator Regulador de Interferon (IRF1). OBJETIVOS: Avaliar parâmetros que possam estar implicados no funcionamento do sistema imunitário em pacientes com SMD, tais como, células Tregulatórias (Treg) e expressão do IRF1 e FoxP3, e sua relação com caraterísticas autoimunes, de forma sequencial (tempo zero e 12 meses), em um estudo prospectivo em pacientes SMD comparados com controles negativos e controles positivos (com doenças autoimunes). MATERIAIS E MÉTODOS: foram coletadas amostras de sangue periférico (SP) e de MO de 38 pacientes com SMD. Como controles negativos, forma colhidos SP de 28 indivíduos saudáveis e como controles positivos, 17 pacientes com doenças autoimunes (DAI=Lupus e Artrite Reumatóide). Nessas amostras foram analisados: o número das células Treg identificados por citometria de fluxo, a função de supressão que as células Treg exercem na proliferação das células Tefetoras (Tefet) em cultura celular em diferentes proporções (Tefet isolada, Teft:Treg:1:1 e Tefet:Treg:8:1). Além disso, no sobrenadante dessas culturas, foi realizada a dosagem de citocinas (IL2, IL4, IL6, IL10, TNFalfa, INF y, IL17) por método de CBA. A expressão do gene IRF1( éxon 2 e 4/5) e FOXP3 por RTPCR foi identificada em SP e células Treg. No soro dessas amostras, dosouse, adicionalmente, os autoanticorpos e complemento total. RESULTADOS: Os pacientes com SMD apresentaram a média de idade de 71,7anos (23-93a) e de hemoglobina de 9,6g/dL (5,314,9g/dL). Desses 39.5% apresentaram cariótipo alterado e pela a classificação da OMS (2008), 17 pacientes eram CRDM, 3 AR, 10 ARSA, 3 AREBI, 4 AREBII e 1 paciente, sindrome 5q. Classificando os pacientes pelo escore prognóstico IPSS, WPSS e IPSSR e comparando com o nível de hemoglobina sérica, esta foi menor no grupo de alto risco comparado ao de baixo risco (p=0,025) e quanto ao número de células Treg, não houve diferença: WPSS (p=0,29), IPSS (p=0,5) e IPSSR (p=0,6), assim como, na presença de cariótipo alterado (p=0,12), também não houve diferença. Comparando os grupos de estudo, o número de Treg (x105cells) foi maior nos pacientes com SMD do que nos controles negativos (p=0,007) ou com DAI (p=0,008). A porcentagem de célula Tefet foi similar nos grupos. A supressão de proliferação da célula Tefet pelas células Treg, medido por citometria de fluxo, após 7 dias de cultura celular, foi maior no grupo controle (p=0,003) comparado a SMD e DAI. A produção de IL10, TNFalfa e INF-y foi menor na SMD na cultura de Tefet isolada. A expressão gênica do éxon 2 do IRF1 (p<0.02) e 4/5 (p<0.01) no sangue total foi menor nos pacientes com SMD comparado ao grupo de DAI. A expressão do FoxP3 na célula Treg foi similar entre os grupos (p=0,96). A concentração de CH100 foi menor na SMD que DAI (p=0,014). Quando avaliamos o estudo de forma prospectiva, o número de Treg (T0=5,6x105±2,8 vs T12=4,8x105±2,60; p=0.3) e porcentagem de Tefet (T0=16,8%±9,5 vs T12=13,1%±6,3; p=0.06) não alterou após 12 meses. A produção de todas as citocinas (IL2, IL4, IL6, IL10, TNFalfa, INF-y, IL17) foi significantemente maior no sobrenadante de cultura celular após 12 meses. A expressão relativa do exon 4/5 do IRF1 aumentou no sangue total (p=0,001) e nas Treg (p<0.001) após 12 meses. Entretanto, a expressão do éxon 2 aumentou somente no sangue total (p<0.001), enquanto que a expressão do FoxP3 nas Treg não apresentou diferença estatística (p=0.57). Interessantemente, houve uma correlação positiva moderada entre Foxp3 e exon 4/5 do IRF1 (R=0,659; p=0.002). CONCLUSÃO/DISCUSSÃO: Nossos resultados mostram uma diminuição de supressão da Tefet pela Treg em pacientes com SMD, apesar de apresentar maior número de célula Treg, sugerindo que a função regulatória pode estar alterada na SMD. Uma das explicações seria uma hiperativação do sistema imunitário, onde há necessidade de aumento de células Treg para controle imunológico. A produção de citocinas globalmente diminuída nos pacientes com SMD revela uma exaustão do sistema imunitário, posteriormente confirmada pelo consumo do complemento. Já na progressão da doença, a proliferação da Tefet e produção de citocina sugere uma piora da supressão pelas Treg e pode estar relacionada a disfunção de inibição por contato ou produção de citocina inibitória. A redução da expressão do IRF1 nos pacientes com SMD apresentou um aumento importante durante a progressão. A baixa expressão do IRF1 pode estar associada a progressão da doença. Entretanto, o IRF1 está envolvido em várias funções do sistema immune e a alta expressão foi descrita nos pacientes com SMD com manifestações autoimunes. Em camundongos, o IRF1 inibe a expressão do FoxP3 nas células Tregulatórias. Entretanto, nossos resultados mostram uma correlação positiva entre eles. Isso pode decorrer de uma indução de Foxp3 de forma desproporcional ao longo da evolução da doença.
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    Padronização do teste de arranjos de polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPa) para a detecção de anormalidades genético-moleculares em leucemia mieloide aguda e síndromes mielodisplásicas
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014-09-26) Noronha, Thiago Rodrigo de [UNIFESP]; Chauffaille, Maria de Lourdes Lopes Ferrari Chauffaille [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Introduction: Single nucleotide polymorphism array (SNPa) is a type of DNA microarray which is used to detect polymorphisms within a population. SNP is a variation of a single nucleotide in a DNA sequence, and is the most frequent type of variation in the genome. Millions of SNPs have been identified and a map of SNPs can be used as an excellent genotypic marker for research. SNPa has been widely used in cancer genetics due to its great performance in providing information of copy number variation (CNV) and copy neutral loss of heterozygosity (CN-LOH). In Onco-hematology, AML/MDS provide an interesting model for investigation of new molecular changes by SNPa with implications for pathogeneses of diseases. This is evidenced by the lack of cytogenetic abnormalities in cases of AML/MDS and general lack of molecular assays that can be used to detect such abnormalities. Objectives: The objectives of this study were to standardize the SNPa method in AML and MDS, and to establish the similarities and differences between SNPa and karyotype. Materials and Methods: 25 patients diagnosed with AML (n=22) and MDS (n = 3) were studied. The G-banding karyotype according to usual method and SNPa (Cytoscan HD - Affymetrix) were performed using DNA extracted from mononuclear cells from bone marrow (BM) and from buccal cells (BC). Results: The mean age of the patients studied was 54 years old, and the median age, 55 years (range from 28 – 93). 12 (48%) were male and 13 (52%) female. 10 patients showed abnormal karyotype (40,0%), 11 normal (44,0%) and 4 had no mitosis (16,0%). Regarding the BM SNPa: 17 were abnormal (68.0%) and 8 were normal (32.0%). Comparing the karyotype with SNPa from the 25 cases, by karyotype was possible to detect a total of 17 alterations (deletions/loss: 8, trissomy/gain: 7 and translocation: 2) and by SNPa a total of 42 alterations (loss: 17, gain: 16 and CN-LOH: 9). Conclusion: It was possible to standardize SNPa in AML/MDS and compare it with the abnormalities detected by karyotype. SNPa increased the detection rate of abnormalities compared to the karyotype. It was possible to confirm that it is a reliable and sensitive instrument for detecting submicroscopic and CN-LOH changes. SNPa also offered a new set of abnormalities that deserve to be further investigated in future studies.